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快速纯化重组腺联病毒的受体结合捕捉方法
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作者 陈裴裴 刘晓明 +4 位作者 卢会鹏 周晓慧 张鑫宇 夏晓莉 孙怀昌 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期621-630,共10页
【目的】建立用于重组腺联病毒(AAV)纯化的受体结合捕捉方法。【方法】将AAV受体的多囊肾病(PKD)结构域1和2与类弹性蛋白多肽(ELP)在重组大肠杆菌中进行融合表达,利用相变循环(ITC)纯化ELP-PKD融合蛋白;分别用昆虫和AAV-293细胞制备rAAV... 【目的】建立用于重组腺联病毒(AAV)纯化的受体结合捕捉方法。【方法】将AAV受体的多囊肾病(PKD)结构域1和2与类弹性蛋白多肽(ELP)在重组大肠杆菌中进行融合表达,利用相变循环(ITC)纯化ELP-PKD融合蛋白;分别用昆虫和AAV-293细胞制备rAAV-GFP,与ELP-PKD融合蛋白共孵育后进行ITC,从沉淀复合物提取病毒DNA进行PCR检测;在优化条件下利用ELP-PKD蛋白结合捕捉rAAV-GFP,利用电子显微镜观察、免疫转印和细胞感染试验进行rAAV鉴定。【结果】ELP-PKD融合蛋白获得正确、可溶性表达,ITC纯化的蛋白纯度大于90%;ELP-PKD蛋白能特异结合rAAV-GFP,结合具有p H、温度和时间依赖性,受体结合捕捉方法可在1h内完成,从两种细胞纯化rAAV-GFP的回收率分别为58%和56%;rAAV-GFP洗脱具有p H和温度依赖性,洗脱rAAV-GFP的回收率分别为46%和44%;纯化rAAV-GFP具有AAV的典型形态和结构蛋白。【结论】建立的ELP-PKD结合捕捉法可用于不同细胞源rAAV的快速纯化。 展开更多
关键词 腺联病毒受体 ELP融合表达 受体结合捕捉 重组AAV纯化
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Th9细胞与肝纤维化的研究进展
2
作者 战廷正 王小莉 +2 位作者 夏超明 战廷正 王小莉 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1083-1087,共5页
Th9细胞是近年新发现的Th细胞亚群。这种细胞亚群的诱导分化受到多种细胞因子与转录因子的影响,且与其他亚群间存在相互影响。IL-4和转化生长因子β是诱导Th9分化的关键细胞因子,PU.1和干扰素调节因子4为其特异的转录因子。Th9细胞主要... Th9细胞是近年新发现的Th细胞亚群。这种细胞亚群的诱导分化受到多种细胞因子与转录因子的影响,且与其他亚群间存在相互影响。IL-4和转化生长因子β是诱导Th9分化的关键细胞因子,PU.1和干扰素调节因子4为其特异的转录因子。Th9细胞主要通过分泌大量IL-9细胞因子在自身免疫性疾病、过敏性疾病以及抗寄生虫感染等过程中发挥重要作用。近年来的研究发现Th9细胞可能促进肝纤维化的发生,本文就Th9细胞与肝纤维化关系的研究现状做一综述。 展开更多
关键词 TH9细胞 白介素-9 肝纤维化 肝星状细胞
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GRAPES区域集合预报系统模式不确定性的随机扰动技术研究 被引量：44
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作者 袁月 李晓莉 +1 位作者 陈静 夏宇 《气象》 CSCD 北大核心 2016年第10期1161-1175,共15页
为进一步描述GRAPES(Global/Regional Assimilation and Prediction System)区域集合预报系统(GRAPES Me—soscale Ensemble Prediction System,GRAPES—MEPS)中GRAPES—Meso模式的不确定性特征,本研究在GRAPES—MEPS系统中引人了模式... 为进一步描述GRAPES(Global/Regional Assimilation and Prediction System)区域集合预报系统(GRAPES Me—soscale Ensemble Prediction System,GRAPES—MEPS)中GRAPES—Meso模式的不确定性特征,本研究在GRAPES—MEPS系统中引人了模式物理参数化倾向随机扰动方案(Stochastically Perturbed Parameterization Tendencies,SPPT),随机扰动型的产生是基于-阶马尔科夫链,其具有时间相关性特征,并服从正态分布,另外经过谱展开随机场具有空间结构特征,在水平结构上较平滑和连续。本文开展了基于SPPT方案的GRAPES—MEPS集合预报试验,针对SPPT方案中随机场的扰动幅度和时间相关尺度参数开展了一系列敏感性试验,并对试验结果进行了较全面的集合预报客观检验,此外,针对一次强降水过程,分析了SPPT方案对降水预报的影响。试验结果表明,引入SPPT方案能在一定程度上提高GRAPES—MEPS系统的预报技巧,降低系统的漏报率;且能显著改进预报后期大雨量级降水的预报技巧。通过敏感性试验发现,对于GRAPES—MEPS系统,SPPT方案的效果与随机扰动场幅度的范围,及扰动场的时间相关尺度选择相关,需经过敏感性试验确定出较适合的参数。 展开更多
关键词 集合预报 随机扰动参数化倾向方案 扰动范围 时间尺度
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