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利用CRISPR/Cas9技术构建微RNA-155基因敲除小鼠模型孙瑞成
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作者 张冬 孙瑞成 +7 位作者 崔永春 王佩合 张宝杰 张会东 张宏 刘晓鹏 罗晓康 唐跃 《中华生物医学工程杂志》 CAS 2016年第6期445-450,共6页
目的 探讨利用CRISPR/Cas9技术构建微RNA-155（miR-155）基因敲除小鼠模型.方法 选择健康C57BL/6J小鼠,首先进行小鼠基因组靶序列的扩增和测序,明确miR-155序列及位点,然后设计并构建Cas9载体质粒（Cas9 RNA）及打靶载体单导向RNA（sgRN... 目的 探讨利用CRISPR/Cas9技术构建微RNA-155（miR-155）基因敲除小鼠模型.方法 选择健康C57BL/6J小鼠,首先进行小鼠基因组靶序列的扩增和测序,明确miR-155序列及位点,然后设计并构建Cas9载体质粒（Cas9 RNA）及打靶载体单导向RNA（sgRNA）,随后将体外转录的Cas9 RNA及sgRNA显微注射入小鼠的受精卵,并将受精卵体外培养.将培养合格的胚胎移植到代孕小鼠的输卵管中,待小鼠生育后得到F0代小鼠.通过对F0代小鼠基因型检测确定基因敲除情况,进而繁育并建立基因敲除小鼠模型.结果 利用CRISPR/Cas9技术构建模型小鼠得到F0代小鼠18只,其中4号小鼠出现DNA单链碱基片段缺失,且基因型可以稳定传代.对其进行繁育后,得到F1代杂合子小鼠3只.杂合子小鼠交配繁育,得到F2代纯合子基因敲除小鼠,电泳及测序结果证实其缺失114 bp碱基序列,成功敲除miR-155基因.miR-155基因敲除小鼠在清洁级动物饲养环境中可以正常繁育.结论 CRISPR/Cas9技术能够快速、有效地构建miR-155基因敲除小鼠模型. 展开更多
关键词 微RNA-155 CRISPR/Cas9 模型 动物 小鼠 基因敲除
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