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非洲猪瘟病毒pA104R蛋白单克隆抗体的制备与应用 被引量：6
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作者 王露露 皇甫皓月 +7 位作者 席飞 张振江 weldu tesfagaber 张纪文 黄炼榆 李芳 步志高 赵东明 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1214-1218,共5页
为了给非洲猪瘟的临床诊断技术和实验室研究提供物质基础,本研究以我国首次分离的非洲猪瘟病毒(ASFV)Pig/HLJ/2018株基因组为模板,扩增pA104R基因,并将其克隆至pET-30a载体,构建重组原核表达质粒pET-30a-A104R,表达并纯化重组pA104R蛋白... 为了给非洲猪瘟的临床诊断技术和实验室研究提供物质基础,本研究以我国首次分离的非洲猪瘟病毒(ASFV)Pig/HLJ/2018株基因组为模板,扩增pA104R基因,并将其克隆至pET-30a载体,构建重组原核表达质粒pET-30a-A104R,表达并纯化重组pA104R蛋白(rpA104R),以其为抗原免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体(MAb),并采用ELISA、western blot、间接免疫荧光法(IFA)和免疫组化(IHC)对所获得的MAb进行鉴定。结果显示,正确构建p ET-30a-A104R重组质粒,并获得大小约为12 ku的可溶性蛋白。通过间接ELISA方法筛选到2株阳性杂交瘤细胞株为4G2和4E10,并且2株MAb的重链均为IgG1,轻链为Kappa链。Western blot和IFA结果显示,MAb 4G2株能够特异性地识别ASFV pA104R蛋白和病毒感染的猪肺泡巨噬细胞中表达的pA104R蛋白。IHC结果表明,MAb 4G2可以与病毒感染的阳性猪组织发生特异性反应。本研究也为ASFV基因缺失疫苗的开发提供了技术储备。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 pA104R 蛋白印迹法 间接免疫荧光 单克隆抗体
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