产角鲨烯细胞工厂的构建及关键基因的筛选、克隆与表达 被引量：3

1

作者 李宁 刘波 +3 位作者 刁梦雪 陆坚 刘伟丰 陶勇 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期2813-2824,共12页

角鲨烯因具有很强的抗氧化、抗菌和抗肿瘤活性,被普遍应用于医药、保健品和化妆品等领域。文中在实验室构建的高效合成萜类化合物底盘菌株工作的基础上,以角鲨烯为目标产物,通过过表达法尼基焦磷酸合酶基因ispA得到高效合成三萜化合物... 角鲨烯因具有很强的抗氧化、抗菌和抗肿瘤活性,被普遍应用于医药、保健品和化妆品等领域。文中在实验室构建的高效合成萜类化合物底盘菌株工作的基础上,以角鲨烯为目标产物,通过过表达法尼基焦磷酸合酶基因ispA得到高效合成三萜化合物的底盘菌株;然后对原核生物来源的角鲨烯合酶进行系统发育分析、筛选、克隆和表达,得到两株高效合成角鲨烯的大肠杆菌Escherichiacoli工程菌株。其中,导入来源于嗜热蓝细菌Thermosynechococcus elongatus和深蓝聚球蓝细菌Synechococcus lividus的角鲨烯合酶的工程菌株,角鲨烯产量分别达到(16.5±1.4)mg/g(细胞干重含量,后同)和(12.0±1.9)mg/g,发酵液浓度达到(167.1±14.3)mg/L和(121.8±19.5)mg/L。相比于当前普遍使用的人源角鲨烯合酶及初代菌株,来源于T.elongatus和S.lividus的角鲨烯合酶分别使角鲨烯产量大幅提升了3.3倍和2.4倍,为原核细胞异源合成角鲨烯打下坚实的基础。 展开更多

关键词 大肠杆菌 角鲨烯 生物合成 原核基因筛选

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骨纤维结构不良恶变的病例对照研究

2

作者 刘巍峰 丁宜 +5 位作者 杨勇昆 金韬 宫丽华 孙扬 郝林 牛晓辉 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2018年第19期1009-1015,共7页

目的:分析骨纤维结构不良(fibrous dysplasia,FD)恶变的生物学行为,探讨恶变诊断的危险因素。方法:回顾性分析北京积水潭医院2006年3月至2017年3月收拾的FD 394例,病理学证实恶变7例为研究组。根据恶变病例的年龄、部位等流行病学资料,... 目的:分析骨纤维结构不良(fibrous dysplasia,FD)恶变的生物学行为,探讨恶变诊断的危险因素。方法:回顾性分析北京积水潭医院2006年3月至2017年3月收拾的FD 394例,病理学证实恶变7例为研究组。根据恶变病例的年龄、部位等流行病学资料,按照1:2配对分析同期FD 14例为对照组。对比临床特点、疼痛VAS评分、病灶大小、影像学特征、血液生化指标、随访肿瘤学结果及功能评分进行统计学分析。结果:FD恶变7例,其中男性3例,女性4例。平均随访时间为175(3～396)个月,恶变后平均随访时间为26(3～51)个月。平均和中位年龄分别为45.6岁和47(24～60)岁,其中股骨6例,胫骨1例。2例为单发病灶,5例为全身多发纤维结构不良,2例为初次手术,5例为复发后确诊,恶变距初次手术间隔平均时间为207(37～377)个月。研究组的疼痛(visual analogue scale/score,VAS)评分较对照组显著增高(Z=-3.317,P=0.001),且研究组术后VAS较术前明显改善(Z=-2.384,P=0.017)。研究组较对照组术前碱性磷酸酶(alkline phosphatase,AKP)对比明显增高(Z=-2.314,P=0.021),术前乳酸脱氢酶(lac-tate dehydrogenase,LDH)(Z=-1.269,P=0.205)两组比较均无显著性差异。研究组术后AKP较术前明显下降(Z=-2.366,P=0.018),术后LDH较术前下降(Z=-2.028,P=0.043)。CT扫描发现研究组增强后CT值明显高于对照组增强后CT值(Z=-3.659,P<0.001)。单因素分析表明术前VAS评分、AKP值、皮质破坏、软组织包块和CT增强值5项因素在判断FD恶变具有临床意义。恶变病理分别为骨肉瘤4例,低级别梭形细胞肉瘤2例,未分化多形性肉瘤1例,3例患者接受辅助化疗,2例出现肺转移,1例死亡。术后功能MSTS评分,对照组平均95.0%±3.9%,功能优于研究组86.0%±10.9%(F=5.689,P=0.029)。结论:FD恶变罕见,术前VAS评分、AKP值、皮质破坏、是否存在软组织包块以及CT增强值有助于临床判断是否恶变;广泛外科边界切除为主要治疗方法 展开更多

关键词 纤维结构不良 恶变 病例对照研究

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稳态冲击射流作用下平地及坡地高层建筑的风荷载特性 被引量：15

3

作者 汪之松 左其刚 +2 位作者 唐伟峰 刘亚南 李正良 《建筑结构学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第3期103-110,共8页

现行规范的设计风荷载以普通大气边界层风场为主,其平均风剖面为指数型或对数型。下击暴流风场的典型风剖面与普通边界层风场差异很大。基于稳态冲击射流试验和数值模拟分析,考虑平地与坡地两种地形以及坡地坡度的影响,研究冲击射流风... 现行规范的设计风荷载以普通大气边界层风场为主,其平均风剖面为指数型或对数型。下击暴流风场的典型风剖面与普通边界层风场差异很大。基于稳态冲击射流试验和数值模拟分析,考虑平地与坡地两种地形以及坡地坡度的影响,研究冲击射流风场中的高层建筑物表面风压分布特性与风荷载情况。风洞试验和数值模拟结果表明:冲击射流风场中建筑表面风压分布不同于大气边界层风场,迎风面最大风压出现在建筑下部;坡地上建筑物迎风面风压小于同等情况下平地上建筑物迎风面风压,而在侧面和背风面则呈现出相反的规律。对不同坡度坡地上的模型分析结果表明,随着坡地坡度的增大,建筑迎风面风压逐渐减小。 展开更多

关键词 高层建筑 冲击射流 风洞试验 数值模拟 表面风压 风荷载

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经后路手术治疗腰椎管狭窄症伴退行性腰椎侧凸的临床疗效观察 被引量：8

4

作者 韩伟峰 刘宝戈 《临床外科杂志》 2017年第2期141-144,共4页

目的观察椎管狭窄症合并退行性腰椎侧凸的手术疗效,探讨手术方式及固定节段的选择。方法椎管狭窄症合并退行性腰椎侧凸症患者27例。采用后路有限减压、固定、融合手术进行治疗并随访。术后及末次随访时测量Cobb角、腰椎前凸角、C7铅垂线... 目的观察椎管狭窄症合并退行性腰椎侧凸的手术疗效,探讨手术方式及固定节段的选择。方法椎管狭窄症合并退行性腰椎侧凸症患者27例。采用后路有限减压、固定、融合手术进行治疗并随访。术后及末次随访时测量Cobb角、腰椎前凸角、C7铅垂线(C7PL)与S1椎体后上缘距离(SVA),C7PL与骶骨中线距离(CVA),并与术前进行比较,术后采用JOA评分评估临床疗效,运用SF-36调查问卷对患者治疗前和末次随访时生活质量变化情况进行评价。结果所有患者获得随访,平均20个月。患者术前、术后及末次随访时的Cobb角分别为(22.1±10.5)、(10.2±7.3)°和(10.4±4.8)°,腰椎前凸角分别为(21.2±10.3)°、(25.7±12.2)°和(25.3±12.3)°,SVA分别为(7.5±6.1)cm、(0.6±3.1)cm和(0.5±2.4)cm,CVA分别为(6.9±5.3)cm、(2.8±1.3)cm和(2.9±1.2)cm,与术前比较差异有统计学意义(P<0.05),且术后矫正效果持续性良好,术后与末次随访结果比较,差异无统计学意义(P>0.05)。JOA评分:术前、术后及末次随访时分别为(10.8±1.4)分、(21.3±2.4)分和(23.5±2.3)分;SF-36调查问卷表中的8个维度分值与术前比较,明显改善(P<0.05)。结论根据患者症状、体征及影像学资料制定个体化手术方案,进行选择性减压、融合及固定可以取得满意的临床疗效。 展开更多

关键词 退变性腰椎侧凸 腰椎管狭窄 减压 融合

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以2-苯基-4,4'-二氨基二苯醚为基础的热固性聚酰亚胺树脂及其复合材料 被引量：6

5

作者 范卫锋 刘秀菊 +3 位作者 阎敬灵 孟祥胜 刘敬峰 王震 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1926-1931,共6页

以2-苯基-4,4'-二氨基二苯醚(p-ODA)、异构二苯醚二酐(ODPA)和苯乙炔基苯酐(PEPA)为原料,通过两步法合成了聚合度分别为1,2和3的酰亚胺树脂低聚物,并通过模压成型法制备了单向碳纤维增强的聚酰亚胺复合材料.表征了酰亚胺树脂低聚物... 以2-苯基-4,4'-二氨基二苯醚(p-ODA)、异构二苯醚二酐(ODPA)和苯乙炔基苯酐(PEPA)为原料,通过两步法合成了聚合度分别为1,2和3的酰亚胺树脂低聚物,并通过模压成型法制备了单向碳纤维增强的聚酰亚胺复合材料.表征了酰亚胺树脂低聚物的溶解性、熔体黏度及其固化物聚酰亚胺树脂的热性能,结果表明,聚酰亚胺树脂具有良好的溶解性,在N,N-二甲基乙酰胺(DMAc)、四氢呋喃(THF)及1,4-二氧六环等溶剂中的溶解度大于30%;所有酰亚胺树脂低聚物的最低熔体黏度均在10 Pa·s以下,具有良好的成型工艺性;聚酰亚胺树脂具有良好的热性能,玻璃化转变温度(Tg)最高可达300℃,5%热失重温度(T5%)最高可达545℃,碳纤维增强聚酰亚胺复合材料PIC-4,4'-ODPA-2具有最佳的高低温力学性能. 展开更多

关键词 聚酰亚胺 2-苯基-4 4'-二氨基二苯醚 溶解性 力学性能 碳纤维增强复合材料

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胃旁路术和袖状胃切除术对重度肥胖患者疗效对比分析 被引量：6

6

作者 任庆责 张弘玮 +5 位作者 董维峰 刘伟杰 韩晓东 韩峻峰 张频 狄建忠 《中华内分泌外科杂志》 CAS 2016年第6期474-477,共4页

目的回顾性分析腹腔镜下胃旁路术（1aparoscopic Roux—en—Y gastric bypass，LRYGB）与袖状胃切除术（laparoscopic sleeve gastrectomy，LSG）对病态肥胖患者（BMI≥35kg／m^2）体重控制的手术疗效。方法选取2013年12月至2015年12月... 目的回顾性分析腹腔镜下胃旁路术（1aparoscopic Roux—en—Y gastric bypass，LRYGB）与袖状胃切除术（laparoscopic sleeve gastrectomy，LSG）对病态肥胖患者（BMI≥35kg／m^2）体重控制的手术疗效。方法选取2013年12月至2015年12月行腹腔镜减重手术（LRYGB与LSG）的病态肥胖患者48例，进行1年临床随访研究，对比肥胖相关的一般状况及生化指标，观察2种不同的手术方式对病态肥胖患者的手术疗效。结果LRYGB组20例，LSG组28例。术后6个月LRYGB组多余体重下降百分比（％EWL）高于LSG组（（73±0．04）vs（59±0．05，P=0．03）），术后12个月2组EWL差异无统计学意义。术后1年LRYGB组的低密度脂蛋白水平显著低于ISG组（（2．42±0．16）vs（3．29±0．20，P=0．006））；叶酸水平显著高于袖状胃切除组（（15．58±1．99）vs（7．59±1．59），P=0．022））。结论2种手术术后1年随访资料可看出，在单纯控制体重方面比较，2种手术疗效无明显差异。肥胖相关疾病及营养状况方面，LRYGB组略优于LSG组。但这只是重度肥胖患者短期的术后疗效，长期体重控制效果及肥胖相关疾病的控制仍有待进一步探究。 展开更多

关键词 病态肥胖 减重 胃旁路术 袖状胃切除术

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硬纤维瘤的分子发病机制和治疗进展

7

作者 吴宏宇 李卓宇 刘巍峰 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期418-424,共7页

硬纤维瘤(desmoidtumor,DT)是一种罕见的局部侵袭性肿瘤,无转移能力,但具有浸润性生长及局部复发的倾向,可严重影响患者功能,造成沉重的临床负担甚至死亡。近20年来,该病的治疗理念发生了巨变,从传统的积极手术转变为以主动监测为一线... 硬纤维瘤(desmoidtumor,DT)是一种罕见的局部侵袭性肿瘤,无转移能力,但具有浸润性生长及局部复发的倾向,可严重影响患者功能,造成沉重的临床负担甚至死亡。近20年来,该病的治疗理念发生了巨变,从传统的积极手术转变为以主动监测为一线治疗的保守策略,治疗手段也更加丰富,呈现多学科管理的发展趋势。相关研究指出DT的发病与Wnt及Notch信号通路失调有关,以nirogacestat为代表的多款针对其发病机制的新型药物正在研发中,有望成为该病未来治疗的新方向。本文就DT的分子发病机制和治疗进展进行综述,为该病的临床治疗及未来研究提供依据和方向。 展开更多

关键词 硬纤维瘤 分子发病机制 治疗进展 治疗策略 nirogacestat

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基于选择实验法的生物资源公众保护偏好研究 被引量：4

8

作者 蓝菁 夏伟峰 +1 位作者 刘立 欧维新 《资源科学》 CSSCI CSCD 北大核心 2017年第3期577-584,共8页

本文以武夷山地区的生物资源保护为例,从公众参与的角度出发,运用选择实验法分析公众对不同生物资源的保护偏好。研究发现:①公众愿意参与武夷山地区生物资源保护的比例达到了60%左右;②依据公众对生物资源各属性边际支付意愿的大小,公... 本文以武夷山地区的生物资源保护为例,从公众参与的角度出发,运用选择实验法分析公众对不同生物资源的保护偏好。研究发现:①公众愿意参与武夷山地区生物资源保护的比例达到了60%左右;②依据公众对生物资源各属性边际支付意愿的大小,公众考虑的先后优先保护级别为"中国特有","繁育技术不成熟"、"易危"、"濒危"、"繁育技术成熟但未普及"、"濒危程度一般"的生物资源,这与政府及保护组织优先保护"濒危"生物资源的保护政策并不一致。根据研究结果,得出以下政策启示:①政府应积极鼓励公众参与进生物资源的保护作为政府保护力量的有益补充;②政府及保护组织应重视其保护行为与公众保护偏好不一致的情况,并采取相关措施,从而吸引公众更多地参与到保护中来。 展开更多

关键词 公众参与 生物资源 保护偏好 选择实验 武夷山

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黑色素瘤前哨淋巴结活检的意义 被引量：3

9

作者 牛晓辉 刘巍峰 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2018年第14期707-711,共5页

黑色素瘤可发生于皮肤和黏膜,是目前发病率增长较快、易早期淋巴结转移的恶性肿瘤。淋巴结状态的评估对于黑色素瘤的分期和治疗具有重要意义,前哨淋巴结活检(sentinel lymph node biopsy,SLNB)扮演着重要角色。目前,SLNB技术发展较快,但... 黑色素瘤可发生于皮肤和黏膜,是目前发病率增长较快、易早期淋巴结转移的恶性肿瘤。淋巴结状态的评估对于黑色素瘤的分期和治疗具有重要意义,前哨淋巴结活检(sentinel lymph node biopsy,SLNB)扮演着重要角色。目前,SLNB技术发展较快,但是SLNB阳性患者行淋巴结清扫(complete lymph node dissection,CLND)是否显著延长总生存期(overall survival,OS)仍然存在争议。全球多中心临床试验结果对前哨淋巴结阳性病例行CLND仍存争议,未得到黑色素瘤特异性生存率(melanoma specific survival,MSS)获益,但是可以确定SLNB能显著提高患者局部控制率,是现阶段循证医学证据下评估和分期的可靠方法。本文就黑色素瘤SLNB的研究进展和意义进行述评。 展开更多

关键词 黑色素瘤 前哨淋巴结活检 分期 预后 淋巴结清扫

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金山区村卫生室中医适宜技术开展现状与分析 被引量：3

10

作者 吴伟峰 刘惠萍 +1 位作者 倪淑萍 曾德才 《中国卫生标准管理》 2017年第15期28-30,共3页

目的调查金山区村卫生室中医适宜技术开展现状并进行分析。方法对金山区120家村卫生室的医疗执业现状进行全覆盖监督检查,并进行问卷调查,调查内容包括中医适宜技术在村卫生室中的相关基础情况及村卫生室中医适宜技术从业人员的基本情... 目的调查金山区村卫生室中医适宜技术开展现状并进行分析。方法对金山区120家村卫生室的医疗执业现状进行全覆盖监督检查,并进行问卷调查,调查内容包括中医适宜技术在村卫生室中的相关基础情况及村卫生室中医适宜技术从业人员的基本情况。结果 120家村卫生室中医诊疗设备、中成药、中药饮片配备率分别为100.0%、47.1%和0.0%;开展5项及以上中医适宜技术的项目村卫生室共57家(47.5%),而开展1~5项的共42家(35.0%),未开展的共21家(17.5%)。在辖区内250名医务人员中,执业级别中执业助理医师占比最高(84.8%),人员学历中专以下占比最高(50.8%),人员年龄构成上45~60周岁的人数占比最高(57.6%),参加过中医培训的人员共计占比为65.6%。村卫生室中医适宜技术开展工作中尚存在着中成药、中药饮片的配备不达标、中医技术实际应用少等问题。结论村卫生室推广中医适宜技术优势显著,正在起步阶段的村卫生室中医适宜技术推广工作仍需要更多的支持。 展开更多

关键词 中医适宜技术 金山区村卫生室 开展现状 分析

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甲苯二胺对厌氧微生物活性的影响 被引量：3

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作者 唐伟枫 刘敏 +1 位作者 陈滢 汤伟 《化工环保》 CSCD 北大核心 2017年第5期509-513,共5页

以相对产甲烷活性(RA)和COD去除率为指标,考察不同浓度甲苯二胺对厌氧污泥微生物活性的影响。实验结果表明:甲苯二胺质量浓度为0~150 mg/L时,RA接近100%甚至高于100%,COD去除率为91%~93%,与对照组无差别,对厌氧微生物几乎没有抑制作用;... 以相对产甲烷活性(RA)和COD去除率为指标,考察不同浓度甲苯二胺对厌氧污泥微生物活性的影响。实验结果表明:甲苯二胺质量浓度为0~150 mg/L时,RA接近100%甚至高于100%,COD去除率为91%~93%,与对照组无差别,对厌氧微生物几乎没有抑制作用;当甲苯二胺质量浓度为200~400 mg/L时,RA为75%~95%,COD去除率与对照组相比下降了2~6个百分点,属于轻度抑制;当甲苯二胺质量浓度高于400 mg/L时,RA在70%以下,COD去除率降至85%以下,属于中度抑制;且随着甲苯二胺质量浓度增大,RA减小、COD去除率减小,抑制作用增强。因此,为了防止甲苯二胺对厌氧污泥微生物活性的抑制,甲苯二胺质量浓度应控制在0~150 mg/L。 展开更多

关键词 甲苯二胺 厌氧污泥 产甲烷量 微生物活性 抑制

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代谢工程改造酿酒酵母提高法尼醇产量 被引量：2

12

作者 郭俊琪 王征 +1 位作者 张伟欣 刘巍峰 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期1257-1268,共12页

【目的】法尼醇(FOH,C_(15)H_(26)O)是一种具有芳香气味的非环状倍半萜醇,被广泛应用于化妆品和医学药物的工业化生产,也可作为航空燃料的理想替代品。具有食品级安全性的酿酒酵母细胞能够合成内源性法尼醇,但其产量很低,无法满足工业... 【目的】法尼醇(FOH,C_(15)H_(26)O)是一种具有芳香气味的非环状倍半萜醇,被广泛应用于化妆品和医学药物的工业化生产,也可作为航空燃料的理想替代品。具有食品级安全性的酿酒酵母细胞能够合成内源性法尼醇,但其产量很低,无法满足工业生产的需要。因此,需要采用代谢工程手段,改造法尼醇合成途径,以有效提高法尼醇在酿酒酵母中的产量。【方法】以酿酒酵母工业菌株CEN.PK2-1D为底盘细胞,强化甲羟戊酸途径中关键酶的表达水平和弱化麦角固醇合成分支途径,以提高法尼醇合成所需的直接前体物质法尼基焦磷酸(FPP);并分别表达催化FPP合成法尼醇的五种内源磷酸酶和两种异源合酶,筛选能高效合成法尼醇的磷酸酶或合酶。【结果】通过在CEN.PK2-1D(法尼醇产量<0.1 mg/L)中强化表达甲羟戊酸途径中截短形式的HMG-CoA还原酶(tHMGR1)和FPP合酶(ERG20),使法尼醇产量提高约50.8倍,达到5.08 mg/L;使用HXT1启动子替换鲨烯合酶编码基因ERG9启动子以下调其表达水平,使法尼醇产量进一步提升47.1倍,达到239.17 mg/L。在此基础上,筛选发现,表达酿酒酵母内源性磷酸酶PAH1时,获得最高产量法尼醇,达到393.13 mg/L。【结论】采用代谢工程策略对酿酒酵母法尼醇合成途径进行改造,有效提高法尼醇产量至393.13 mg/L,为目前报道的在酿酒酵母中摇瓶培养条件下的最高产量。 展开更多

关键词 法尼醇 酿酒酵母 甲羟戊酸途径 磷酸酶 法尼醇合酶

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轻型卡车离合操纵系统的匹配选型研究

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作者 赵威锋 刘朋朋 《汽车实用技术》 2017年第6期94-96,共3页

通过分析影响离合操纵系统的匹配因素,具体介绍了轻型卡车离合操纵系统的匹配选型研究。

关键词 离合操纵系统 匹配选型

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靶向番茄SlACS2基因CRISPR-Cas9sgRNA的设计和分析 被引量：2

14

作者 白云凤 张爱萍 +5 位作者 闫建俊 贺飞燕 张维锋 冯瑞云 刘江娜 张西英 《生物信息学》 2017年第1期7-15,共9页

番茄为呼吸跃变型果实,伴随呼吸跃变产生大量乙烯,即系统II乙烯,易使番茄果实过熟,导致腐烂变质。SlACS2是番茄系统II乙烯合成的限速酶,通过CRISPR-Cas9基因组编辑系统修饰该基因,调控系统Ⅱ乙烯过量表达,将迟滞番茄过熟。本研究基于RNA... 番茄为呼吸跃变型果实,伴随呼吸跃变产生大量乙烯,即系统II乙烯,易使番茄果实过熟,导致腐烂变质。SlACS2是番茄系统II乙烯合成的限速酶,通过CRISPR-Cas9基因组编辑系统修饰该基因,调控系统Ⅱ乙烯过量表达,将迟滞番茄过熟。本研究基于RNA-seq建立了SlACS2基因的数字表达谱,表明该基因呈果实特异性表达,在植株的根、茎、叶等部位不表达。SlACS2位于番茄1号染色体,含4个外显子和3个内含子。利用在线工具CRISPRdirect和CRISPR-P发现第1、2、3外显子分别具有18、9和11条sgRNA。其中,sgRNA1-14和sgRNA3-8及二者的近PAM的12 nt种子序列在番茄基因组是唯一序列,GC含量高于40%,不存在TTTT终止序列。BLAST结果表明,sgRNA1-14和sgRNA3-8与GenBank公布的8条SlACS2同源序列高度一致,位于该基因的保守区,而与SlACS4和SlACS6的同源序列存在多个SNP,预示这2条sgRNA可用于番茄不同品种SlACS2基因的靶向编辑,并可规避对SlACS家族其他同源基因的脱靶效应。 展开更多

关键词 番茄 ACC合成酶2 sgRNA CRISPR-Cas9 基因组编辑

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