为进一步探讨旋毛虫海藻糖酶(Trehalase of Trichinella spiralis,TsTRE)蛋白对BALB/c小鼠的免疫保护作用,本研究将TsTRE蛋白进行Western-blot分析,并使用该蛋白对BALB/c小鼠进行3次免疫,然后分别感染50条和200条肌幼虫,从免疫前到攻虫...为进一步探讨旋毛虫海藻糖酶(Trehalase of Trichinella spiralis,TsTRE)蛋白对BALB/c小鼠的免疫保护作用,本研究将TsTRE蛋白进行Western-blot分析,并使用该蛋白对BALB/c小鼠进行3次免疫,然后分别感染50条和200条肌幼虫,从免疫前到攻虫试验结束,每周采集一次血清,且在攻虫后第7天和第42天分别计算成虫与肌幼虫减虫率。利用流式细胞术检测表达CD4+T淋巴细胞和表达CD8+T淋巴细胞比例及吞噬能力,利用CCK-8检测淋巴细胞增殖能力,利用ELISA抗体试剂盒检测血清中特异性抗体(IgG、IgG1和IgG2a)、Th1型细胞因子(IFN-γ、IL-2)及Th2型细胞因子(IL-4和IL-10)的水平。Western-blot结果显示,TsTRE蛋白可与小鼠感染旋毛虫的血清发生特异性结合;与PBS对照组相比,表达CD4+T细胞比例升高,而表达CD8+T细胞比例降低,差异均显著(P<0.05);脾淋巴细胞吞噬能力和增殖能力均加强,差异显著(P<0.05)。此外,ELISA方法检测结果显示,特异性抗体水平均极显著增长,且IgG1水平高于IgG2a水平;Th1/Th2型细胞因子水平均显增长趋势,且Th1型细胞因子水平在攻虫后第7天达到最高峰,Th2型细胞因子水平在攻虫后第14天达到最高峰。TsTRE(500)和TsTRE(2000)攻虫组的小鼠成虫与肌幼虫减虫率分别为46.32%、51.19%、40.49%和42.37%。以上结果表明,TsTRE蛋白可诱导小鼠细胞/体液免疫应答,该反应是前期以Th1为主导,后期以Th2为主导的Th1/Th2混合型免疫。以TsTRE为免疫原的疫苗具有一定的减虫作用,该蛋白有望成为疫苗研究新靶点,这为后续预防旋毛虫病提供基础数据。展开更多
文摘为进一步探讨旋毛虫海藻糖酶(Trehalase of Trichinella spiralis,TsTRE)蛋白对BALB/c小鼠的免疫保护作用,本研究将TsTRE蛋白进行Western-blot分析,并使用该蛋白对BALB/c小鼠进行3次免疫,然后分别感染50条和200条肌幼虫,从免疫前到攻虫试验结束,每周采集一次血清,且在攻虫后第7天和第42天分别计算成虫与肌幼虫减虫率。利用流式细胞术检测表达CD4+T淋巴细胞和表达CD8+T淋巴细胞比例及吞噬能力,利用CCK-8检测淋巴细胞增殖能力,利用ELISA抗体试剂盒检测血清中特异性抗体(IgG、IgG1和IgG2a)、Th1型细胞因子(IFN-γ、IL-2)及Th2型细胞因子(IL-4和IL-10)的水平。Western-blot结果显示,TsTRE蛋白可与小鼠感染旋毛虫的血清发生特异性结合;与PBS对照组相比,表达CD4+T细胞比例升高,而表达CD8+T细胞比例降低,差异均显著(P<0.05);脾淋巴细胞吞噬能力和增殖能力均加强,差异显著(P<0.05)。此外,ELISA方法检测结果显示,特异性抗体水平均极显著增长,且IgG1水平高于IgG2a水平;Th1/Th2型细胞因子水平均显增长趋势,且Th1型细胞因子水平在攻虫后第7天达到最高峰,Th2型细胞因子水平在攻虫后第14天达到最高峰。TsTRE(500)和TsTRE(2000)攻虫组的小鼠成虫与肌幼虫减虫率分别为46.32%、51.19%、40.49%和42.37%。以上结果表明,TsTRE蛋白可诱导小鼠细胞/体液免疫应答,该反应是前期以Th1为主导,后期以Th2为主导的Th1/Th2混合型免疫。以TsTRE为免疫原的疫苗具有一定的减虫作用,该蛋白有望成为疫苗研究新靶点,这为后续预防旋毛虫病提供基础数据。
