重组可溶表达结核分枝杆菌新基因编码蛋白Rv2742的相互作用蛋白质组研究

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作者 王红 万李 +5 位作者 武舒佳 常蕾 万康林 张瑶 徐平 戴二黑 《军事医学》 CAS 北大核心 2019年第10期747-754,共8页

目的 Rv2742是基于蛋白质基因组学技术从结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis H37Rv,结核菌)中发现并验证的遗漏注释基因。该研究旨在筛选Rv2742在结核菌中的相互作用蛋白质,对Rv2742互作网络进行分析,为深入探索其在结核菌中所参... 目的 Rv2742是基于蛋白质基因组学技术从结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis H37Rv,结核菌)中发现并验证的遗漏注释基因。该研究旨在筛选Rv2742在结核菌中的相互作用蛋白质,对Rv2742互作网络进行分析,为深入探索其在结核菌中所参与的生物学功能提供理论基础。方法采用免疫亲和纯化质谱(IP-MS)筛选Rv2742在结核菌中的互作蛋白质。以pMAL-c2X和pMAL-c2X-Rv2742载体诱导表达、纯化获得的麦芽糖结合蛋白(MBP)和MBP-Rv2742融合蛋白为诱饵,分别取等摩尔蛋白与H37Rv非变性全细胞蛋白质裂解物进行孵育,收集2次生物学重复实验得到的与MBP和MBP-Rv2742诱饵结合的蛋白质复合物,10%SDS-PAGE凝胶电泳验证,通过液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)分析、筛选出Rv2742在结核菌中的互作蛋白质,对筛选到的蛋白质进行基因本体(gene ontology,GO)和互作网络分析。结果共筛选到105个Rv2742的潜在互作蛋白质,其定位主要分布在细胞壁、细胞质膜和细胞外区域等细胞组分中,功能上主要参与低氧应激、宿主共生、运输、毒力因子分泌等生物学过程。结论结核菌中有105个蛋白质与Rv2742互作,生物学功能及互作网络分析发现Rv2742可能参与结核菌侵入人体后的致病过程。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 新编码基因 Rv2742 蛋白质组 质粒 相互作用蛋白质 MBP pull-down

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湖南省525株非结核分枝杆菌临床分离株的菌种鉴定与流行特征 被引量：11

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作者 李文彬 胡培磊 +8 位作者 陈忠南 陈振华 易松林 余艳艳 郭靖玮 刘彬彬 王巧智 万康林 谭云洪 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期417-422,共6页

目的对2019-2020年湖南省分离的非结核分枝杆菌(NTM)进行菌种鉴定,并分析其分布特征,为非结核分枝杆菌病的防治提供基础科学依据。方法收集2019-2020年湖南省胸科医院疑似结核病患者分离到的分枝杆菌临床分离株,通过MPB64蛋白免疫胶体... 目的对2019-2020年湖南省分离的非结核分枝杆菌(NTM)进行菌种鉴定,并分析其分布特征,为非结核分枝杆菌病的防治提供基础科学依据。方法收集2019-2020年湖南省胸科医院疑似结核病患者分离到的分枝杆菌临床分离株,通过MPB64蛋白免疫胶体金法、PNB(对硝基苯甲酸)培养基生长试验进行结核分枝杆菌复合群和NTM鉴定,应用16S rRNA和Hsp 65测序分析法对NTM菌株进行菌种鉴定。结果共收集到6515份分枝杆菌阳性培养物,初步鉴定为NTM共525株,占比8.06%,其中分离于男性患者285株,占比54.29%;女性患者240株,占比45.71%;人群分布以农民为主,共367株,占比69.90%;年龄分布以40岁以上中老年患者最多,共402株,占比76.57%。2019-2020年NTM菌种分布达27种,菌种分布位列前4者分别为脓肿分枝杆菌(190株,36.19%)、胞内分枝杆菌(174株,33.14%)、鸟分枝杆菌(64株,12.19%)、戈登分枝杆菌(47株,8.95%);其它50株(9.52%)包含23种NTM。脓肿分枝杆菌主要在郴州市、湘西自治州地区、衡阳市和永州市等地区流行;胞内分枝杆菌主要在郴州市、岳阳市和湘潭市流行。结论2019-2020年湖南地区分枝杆菌中NTM检出率仍保持较高水平,以脓肿分枝杆菌、胞内分枝杆菌、鸟分枝杆菌和戈登分枝杆菌为主;感染人群以男性、中老年、农民为主。 展开更多

关键词 分枝杆菌 非结核分枝杆菌 菌种鉴定

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结核病疫苗研究进展及挑战 被引量：5

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作者 范雪亭 万康林 +2 位作者 王瑞白 赵秀芹 刘海灿 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期643-647,共5页

卡介苗是目前唯一应用于预防人类结核病的疫苗,但其保护效果备受争议,研究新型高效的结核病疫苗尤为重要。从安全性、经济成本及保护效果等方面考虑,多阶段抗原亚单位疫苗或多表位疫苗具有较好的应用前景。随着对结核分枝杆菌致病机制... 卡介苗是目前唯一应用于预防人类结核病的疫苗,但其保护效果备受争议,研究新型高效的结核病疫苗尤为重要。从安全性、经济成本及保护效果等方面考虑,多阶段抗原亚单位疫苗或多表位疫苗具有较好的应用前景。随着对结核分枝杆菌致病机制的深入了解以及疫苗研发技术的不断更新,结核病疫苗会有重大突破。本文论述结核病疫苗的类型及其特性,并针对结核病新型疫苗研究中抗原选择、动物模型选择、疫苗效果评价指标及人群特异性存在的问题和挑战进行讨论,旨在为新型结核病疫苗的研究提供参考。 展开更多

关键词 结核病 卡介苗 结核病新型疫苗

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一种最小抑菌浓度检测试剂盒检测结核分枝杆菌临床菌株药物敏感性的效果评价

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作者 曹滨 王泉 +12 位作者 于晋杰 邓乐乐 钱程宇 方丹昂 万康林 李马超 刘梦文 赵秀芹 赵丽丽 刘海灿 肖开提·米吉提 袁秀琴 李桂莲 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期827-836,共10页

目的评价一种最小抑菌浓度检测试剂盒检测结核分枝杆菌(MTB)临床分离菌株对11种一、二线抗结核药物敏感性的效能。方法从2017年1月至2018年12月期间来自新疆不同地区4家结核病院的住院/门诊结核病患者的847株MTB临床分离菌株中,随机选取... 目的评价一种最小抑菌浓度检测试剂盒检测结核分枝杆菌(MTB)临床分离菌株对11种一、二线抗结核药物敏感性的效能。方法从2017年1月至2018年12月期间来自新疆不同地区4家结核病院的住院/门诊结核病患者的847株MTB临床分离菌株中,随机选取188株,采用一种最小抑菌浓度检测试剂盒(MYCOTB)检测其对11种一、二线抗结核药物的耐药性,以常规微孔板微量肉汤稀释法为对照方法,结合全基因组测序技术,评估MYCOTB法检测药物耐药性的灵敏度、特异度及两种表型药敏方法的一致性。结果以常规微孔板微量肉汤稀释法为标准,MYCOTB检测RFP、ETH、RFB、SM、INH、PAS、OFX、AMK、MFX、EMB和KM等11种药物耐药性的灵敏度分别为92.0%、88.6%、86.7%、84.6%、84.3%、75.0%、67.7%、57.4%、56.7%、56.5%和40.0%,特异度分别为97.1%、96.7%、96.2%、97.3%、90.0%、95.6%、96.1%、99.5%、91.1%、96.4%和100.0%,符合率分别为95.7%、95.2%、94.7%、94.7%、87.2%、94.7%、91.0%、97.9%、85.6%、91.5%和96.8%,Kappa值分别为0.89、0.84、0.81、0.84、0.75、0.52、0.68、0.66、0.47、0.57和0.87。对于两种表型药敏方法结果不一致的菌株,基因测序结果更支持MYCOTB的检测结果。结论MYCOTB检测MTB对11种一、二线抗结核药物耐药性具有良好的灵敏度和特异度,可用于MTB菌株耐药性的检测。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 药物敏感性试验 MYCOTB 微孔板微量肉汤稀释法

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RPA-LFD技术快速检测结核分枝杆菌利福平耐药性的应用 被引量：3

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作者 鲁瑶 赵丽丽 +5 位作者 李马超 刘海灿 赵秀芹 刘志广 万康林 楼永良 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期387-391,共5页

目的基于重组酶聚合酶扩增(RPA)技术结合侧向流动试纸条(LFD),建立可快速检测结核分枝杆菌(MTB)利福平耐药的方法,并初步评价其临床应用价值。方法采用比例法对182株结核分枝杆菌临床分离株进行利福平耐药性检测。建立RPA-LFD技术,检测... 目的基于重组酶聚合酶扩增(RPA)技术结合侧向流动试纸条(LFD),建立可快速检测结核分枝杆菌(MTB)利福平耐药的方法,并初步评价其临床应用价值。方法采用比例法对182株结核分枝杆菌临床分离株进行利福平耐药性检测。建立RPA-LFD技术,检测182株菌株中利福平耐药决定区(RRDR)常见突变位点rpoB 531、526和516的突变情况,同时使用PCR测序进行验证。用SPSS 24.0分析,以比例法为金标准,评价RPA-LFD对利福平耐药的检测效率。结果以比例法药敏结果为金标准,RPA-LFD检测利福平耐药的灵敏度为84.2%,特异度为100.0%,Kappa检验显示Kappa值为0.880,两种方法检测结果具有高度一致性。同样以比例法为金标准,以DNA测序结果判断利福平耐药性的灵敏度为91.2%,特异度为100.0%,Kappa值为0.935。结论RPA-LFD技术用于结核分枝杆菌利福平耐药性的检测具有好的灵敏度、很高的特异度,且检测时间短,具有一定的临床应用价值。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 利福平耐药 RPA-LFD RRDR 突变

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127株结核分枝杆菌基因分型及耐药相关研究 被引量：1

6

作者 刘益萍 庞慧 +4 位作者 万康林 弓艳娥 郭旭霞 王艳霞 刘海灿 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1119-1125,共7页

目的研究山西省长治及周边地区结核分枝杆菌的基因多态性及基因型与耐药的相关性。方法收集结核分枝杆菌临床分离株,运用MLVA方法进行基因分型,对8种抗结核药物分别采用比例法进行药敏试验,应用BioNumerics 5.0软件进行聚类分析。结果 1... 目的研究山西省长治及周边地区结核分枝杆菌的基因多态性及基因型与耐药的相关性。方法收集结核分枝杆菌临床分离株,运用MLVA方法进行基因分型,对8种抗结核药物分别采用比例法进行药敏试验,应用BioNumerics 5.0软件进行聚类分析。结果 15个位点中Mtub21、MIRU26和ETRE多态性较高(HGI>0.6),MIRU40、ETRB、MIRU16、ETRD、MIRU23和ETRC位点多态性较低(HGI<0.3)。127株结核分枝杆菌共分为11个基因群102种基因型,90株为独特型,基因群中Ⅰ群所占比例最大(80.31%)。127株菌株对一线和二线抗结核药物的总耐药率分别为47.24%和23.62%。一线药物中链霉素(40.94%)的耐药率最高,乙胺丁醇(6.30%)最低。二线药物中左氧氟沙星(14.17%)的耐药率最高,丙硫异烟胺(3.15%)最低。链霉素的单耐药率最高(11.81%);耐多药率为21.26%(27/127);广泛耐多药率为3.15%。Ⅰ群菌株的耐药率与其它菌株的差别无统计学意义。结论初步证实山西长治及周边地区的结核分枝杆菌具有明显的多态性,Ⅰ群为主要流行群。结核分枝杆菌对二线药物的敏感性高于一线药物。主要流行菌株Ⅰ群菌株与耐药无明显的相关性。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 基因分型 MLVA 药敏试验

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独山瓜馥木总生物碱抗结核活性初探 被引量：1

7

作者 周蕾 安婷婷 +5 位作者 赵秀芹 徐冬蕾 蒋毅 王瑞白 万康林 杨再昌 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期487-490,共4页

目的系统评价独山瓜馥木二氯甲烷提取物3种组分的抗结核作用。方法采用抗结核活性跟踪法,从独山瓜馥木根中分步提取具有抗结核活性的组分,并采用Alarmar-Blue液体药敏法进行体外抗结核活性的评价。结果从独山瓜馥木根中获得了具有抗结... 目的系统评价独山瓜馥木二氯甲烷提取物3种组分的抗结核作用。方法采用抗结核活性跟踪法,从独山瓜馥木根中分步提取具有抗结核活性的组分,并采用Alarmar-Blue液体药敏法进行体外抗结核活性的评价。结果从独山瓜馥木根中获得了具有抗结核活性的二氯甲烷提取物(组分1)。薄层层析定性分析为总生物碱,进一步分离纯化得到组分2和3。药敏结果显示组分1和组分2对异烟肼和利福平的单耐药及耐多药结核分枝杆菌均有明显的抑制作用,尤其是组分2,对3/4的耐多药菌株的最小抑菌浓度小于40μg/mL。结论在当前耐药结核病流行的严峻形势下,独山瓜馥木提取物有治疗单耐和耐多药结核病的研发前景,其有效成分及抗结核机制有待进一步研究。 展开更多

关键词 独山瓜馥木 结核分枝杆菌 耐药结核病 抗结核活性 药物敏感试验

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结核分枝杆菌Rv2941蛋白抗原表位集中区免疫原性研究

8

作者 范雪亭 栾秀丽 +5 位作者 赵秀芹 李马超 万康林 卢选成 李晓燕 刘海灿 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期394-399,共6页

目的分析结核分枝杆菌Rv2941抗原的T细胞表位集中区的免疫原性,探究其作为结核病疫苗候选抗原的潜力。方法通过免疫表位数据库(Immune Epitope Database,IEDB)分析Rv2941抗原的T细胞表位区(命名为Rv2941p)并构建表达载体PET32a-Rv2941p... 目的分析结核分枝杆菌Rv2941抗原的T细胞表位集中区的免疫原性,探究其作为结核病疫苗候选抗原的潜力。方法通过免疫表位数据库(Immune Epitope Database,IEDB)分析Rv2941抗原的T细胞表位区(命名为Rv2941p)并构建表达载体PET32a-Rv2941p,诱导表达并纯化Rv2941p。将其与免疫佐剂二甲基三十六烷基铵(DDA)和PolyI:C乳化后,皮下免疫BALB/c小鼠3次,每次免疫间隔10 d,末次免疫1周后处死小鼠,进行免疫效果评价。采用ELISA法检测免疫后小鼠血清中IgG、IgG1和IgG2a抗体滴度以及免疫后小鼠脾脏淋巴细胞分泌IL-4、IL-2、IL-6和IFN-γ的水平。同时,利用流式细胞技术检测淋巴细胞内CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞增殖情况以及胞内细胞因子(IFN-γ、TNF-α和IL-4)表达水平。结果Rv2941p可溶性表达,并获得高纯度的蛋白。Rv2941p诱导产生了高水平的特异性抗体IgG,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.001)。另外,Rv2941p提高了IgG2a/IgG1的比值。细胞因子检测结果显示,Rv2941p提高了IFN-γ和IL-6的分泌,与Ag85B组比较,差异有统计学意义(P<0.001)。同时,Rv2941p可以促进CD4^(+)和CD8^(+)T细胞的增殖分化,以及提高胞内IFN-γ和TNF-α的表达。结论Rv2941p可以刺激小鼠产生较高的体液和细胞免疫,尤其Th-1类细胞免疫,可以作为结核病疫苗候选抗原,为结核病新型疫苗的开发奠定了基础。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 Rv2941 T细胞表位 结核病疫苗

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人兽共患细菌性疾病防控现状及特征分析

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作者 卢亮平 万康林 徐建国 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期967-970,976,共5页

目的了解我国目前在人兽共患细菌性疾病防控领域的现状及存在的主要问题。方法采用查阅文献和专家会议法,以鼠疫、炭疽、布鲁氏菌病等常见的人兽共患细菌病为例,对其存在现状、面临威胁、已经具备的防范基础和能力以及防控中面临的主要... 目的了解我国目前在人兽共患细菌性疾病防控领域的现状及存在的主要问题。方法采用查阅文献和专家会议法,以鼠疫、炭疽、布鲁氏菌病等常见的人兽共患细菌病为例,对其存在现状、面临威胁、已经具备的防范基础和能力以及防控中面临的主要问题进行讨论分析。结果人兽共患细菌性疾病的危害明显加剧,部分人兽共患细菌病重新反弹,新的疾病不断出现。部分人兽共患细菌性疾病拥有较为系统完善的监测系统,具备病原体分离培养、检测技术以及物资储备能力,但从事该病防控的专业人员明显减少。监测方案亟需调整,监测经费不足,非监测省份缺乏相应的技术储备;健康教育和监管尚不到位,时有因剥食病畜肉引起疫情发生;在疫情处置过程中,由于人医和兽医隶属于不同行政主管部门,难以做到有效沟通和协作。结论加强人兽共患细菌性疾病防控的法律法规建设,促进多部门在人兽共患细菌性疾病防控中的合作是有效控制该病的关键。 展开更多

关键词 细菌性疾病 人兽共患病 防控现状

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胶体金免疫层析法检测结核分枝杆菌特异性IgG/IgM抗体对结核病诊断的应用价值 被引量：25

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作者 李霜君 张治国 +6 位作者 余琴 罗巧 王莉 李晓琴 李马超 刘海灿 万康林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期139-143,149,共6页

目的评价胶体金免疫层析法检测血清中结核分枝杆菌特异性IgG/IgM抗体在结核病诊断中的应用价值。方法收集结核病患者和健康人的血清样本共332份及其背景资料,采用胶体金法检测血清中特异性结核抗体IgG/IgM,与临床诊断和细菌学检测结果比... 目的评价胶体金免疫层析法检测血清中结核分枝杆菌特异性IgG/IgM抗体在结核病诊断中的应用价值。方法收集结核病患者和健康人的血清样本共332份及其背景资料,采用胶体金法检测血清中特异性结核抗体IgG/IgM,与临床诊断和细菌学检测结果比较,使用SPSS 22.0统计软件对结果进行比较分析,以P<0.05为差异具有统计学意义。结果胶体金免疫层析法检测结核病患者中特异性结核抗体IgG/IgM的灵敏度为41.15%、特异性为91.67%,检测菌阳和菌阴结核病患者的敏感性分别为51.38%和33.77%。在全部结核病患者中,特异性结核抗体IgG/IgM检测检出率(41.15%)显著高于痰涂片法(18.84%)和痰菌培养法(36.15%)(P<0.05)。结核抗体检测、痰涂片法和痰培养法三种方法联合检测阳性率为61.54%,高于单种方法检测或其中两种方法联合检测。结论胶体金免疫层析法检测血清中结核分枝杆菌抗体具有灵敏、特异、快速和简便等优点,可用于结核病的筛查,同时该方法也具有一定的局限性,敏感度和特异度有待进一步的提高,因此不可单独用于诊断结核病,可配合痰细菌学、影像学和临床表现等进行辅助诊断。 展开更多

关键词 结核抗体 结核分枝杆菌 胶体金免疫层析法 诊断

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中国西北四省(区)结核分枝杆菌分离株一线药物耐药状况及其影响因素分析 被引量：24

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作者 李雨晴 万李 +6 位作者 陈杏 刘海灿 蒋毅 赵秀芹 管茶香 万康林 袁秀琴 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期398-402,422,共6页

目的了解西北地区结核分枝杆菌耐药状况及其影响因素,为预防和控制耐药结核病提供基础科学依据。方法选取中国西北4省、自治区(甘肃、西藏、新疆、内蒙古)2005-2011年从结核病患者痰标本中分离培养的757株结核分枝杆菌(MTB),采用比例法... 目的了解西北地区结核分枝杆菌耐药状况及其影响因素,为预防和控制耐药结核病提供基础科学依据。方法选取中国西北4省、自治区(甘肃、西藏、新疆、内蒙古)2005-2011年从结核病患者痰标本中分离培养的757株结核分枝杆菌(MTB),采用比例法检测MTB对4种一线抗结核药物链霉素(SM)、利福平(RFP)、异烟肼(INH)和乙胺丁醇(EMB)的敏感性,结合病例背景资料分析相关影响因素。结果共检测了757株结核分枝杆菌,对SM、RFP、INH和EMB的耐药率分别为28.14%、26.68%、26.02%和7.53%,总的耐药率和耐多药率分别为40.55%和18.63%。西藏、新疆、甘肃和内蒙古的总耐药率和MDR率分别为64.42%和42.94%、40.48%和23.81%、41.61%和3.36%、27.90%和11.29%。χ2检验结果显示,各省份间菌株对INH、RFP和SM 3种药物的耐药率以及耐多药率差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,影响结核病耐药产生的主要原因是病例类型。复治病例发生耐药的危险性是新发病例的2.582倍(95%CI 1.869-3.566)。结论中国西北地区耐多药情况较为严重,特别是西藏和新疆。加强对结核病耐药性监测,规范化和针对性的全程治疗,防止疾病复发,是预防和控制耐药结核病的关键。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 耐药性 一线抗结核药物 LOGISTIC回归分析

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福建省肺非结核分枝杆菌临床分离株的菌种鉴定（英文） 被引量：13

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作者 刘海灿 黄明翔 +5 位作者 蒋毅 连璐璐 赵秀芹 张丽水 吴移谋 万康林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期389-397,共9页

目的对2005-2011年间,福建省福州市胸科医院分离获得的非结核分枝杆菌临床菌株进行菌种鉴定。方法分别使用传统鉴别培养基法和多位点PCR、hsp65-PRA与rpoB-PRA,以及hsp65、rpoB、16srRNA和ITS基因测序等分子生物学方法,对全部菌株进行... 目的对2005-2011年间,福建省福州市胸科医院分离获得的非结核分枝杆菌临床菌株进行菌种鉴定。方法分别使用传统鉴别培养基法和多位点PCR、hsp65-PRA与rpoB-PRA,以及hsp65、rpoB、16srRNA和ITS基因测序等分子生物学方法,对全部菌株进行菌种鉴定。结果 450株被初步鉴定为非结核分枝杆菌的临床分离菌株中,有45株被鉴定为结核分枝杆菌,其余405株被鉴定为23种不同的非结核分枝杆菌和1株支气管戈登菌。结论在该地区有多种非结核分枝杆菌传播和流行,其中,6种非结核分枝杆菌和支气管戈登菌为在福建省内首次发现。 展开更多

关键词 菌种鉴定 分枝杆菌 PRA 核酸测序

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结核分枝杆菌异烟肼耐药性——一个不容忽视的问题 被引量：12

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作者 李桂莲 万康林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期475-479,共5页

异烟肼是控制结核病的主要药物之一.2018年WHO报告的结核病初治病人中利福平敏感的异烟肼耐药率明显高于2017年的耐多药/利福平耐药率.我国结核病人的异烟肼总耐药率明显高于利福平总耐药率.异烟肼耐药容易导致治疗失败或复发.异烟肼耐... 异烟肼是控制结核病的主要药物之一.2018年WHO报告的结核病初治病人中利福平敏感的异烟肼耐药率明显高于2017年的耐多药/利福平耐药率.我国结核病人的异烟肼总耐药率明显高于利福平总耐药率.异烟肼耐药容易导致治疗失败或复发.异烟肼耐药机制复杂,多个基因的突变均与异烟肼耐药有关,然而这些基因突变与表型的关系尚未完全清楚,直接影响了分子药敏快速诊断方法的建立.基因组学数据证明异烟肼耐药相关基因突变先于利福平耐药性相关基因突变发生.异烟肼耐药结核分枝杆菌容易诱发菌株获得额外耐药性,其机制可能与外排泵以及氧化应激机制有关.总之,结核分枝杆菌异烟肼耐药问题不容忽视,因此应该加强异烟肼作用机制、耐药机制、协同作用机制等方面的研究. 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 异烟肼 耐药性

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结核分枝杆菌RD区蛋白研究进展 被引量：10

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作者 李文彬 万康林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期362-371,共10页

由病原菌结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)引发的结核病是一种严重危害人类健康的传染病。根据世界卫生组织的《全球结核病报告2017》年报指出:2016年新增结核病感染者1 040万例,其中死亡人数达到167万例,死于HIV共感染的... 由病原菌结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)引发的结核病是一种严重危害人类健康的传染病。根据世界卫生组织的《全球结核病报告2017》年报指出:2016年新增结核病感染者1 040万例,其中死亡人数达到167万例,死于HIV共感染的人数37万。随着多耐药性菌株和HIV共感染等出现,使得结核病的预防和治疗形式愈加严峻,积极研发新型结核疫苗十分必要。结核分枝杆菌RD区编码蛋白在结核病新型疫苗研发及新型诊断方法建立中具有重要的潜在意义及应用价值。本文主要介绍结核分枝杆菌基因组RD区及其编码蛋白的研究进展。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 RD区 蛋白 诊断

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结核分枝杆菌Rv1787基因编码蛋白PPE25的原核表达及生物信息学分析 被引量：7

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作者 刘田 万李 +4 位作者 周勇 段佳熙 管茶香 吴小翠 万康林 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第7期765-772,共8页

目的构建结核分枝杆菌Rv1787基因的原核表达质粒进行体外表达,运用生物学信息分析方法分析Rv1787基因编码蛋白PPE25的生物学特征。 方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,PCR法扩增Rv1787基因,并与表达载体pET-32a构建重组质粒。原... 目的构建结核分枝杆菌Rv1787基因的原核表达质粒进行体外表达,运用生物学信息分析方法分析Rv1787基因编码蛋白PPE25的生物学特征。 方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,PCR法扩增Rv1787基因,并与表达载体pET-32a构建重组质粒。原核表达重组质粒,SDS-PAGE分析表达产物并利用亲和层析的方法进行纯化。利用生物信息学软件ProtParam分析PPE25蛋白的理化性质,TMPRED和SignalP4.1Service预测蛋白的跨膜区和信号肽,NPS@SOPMA和Swissmodel分别预测蛋白的二级结构和三级结构,Bepipred 1.0bserver和DNAStar综合预测蛋白的B细胞抗原表位,综合运用SYFPEITHI、BIMAS、NetCTL、RANKPEP、NetMHCⅡPAN 4.0server预测蛋白的CTL细胞表位,综合运用SYFPEITHI、RANKPEP、NetMHCⅡpan 3.2server预测蛋白的Th细胞表位。 结果pET-32a-Rv1787重组质粒测序结果与目的基因完全一致;SDS-PAGE分析表明,该融合蛋白以包涵体形式存在,相对分子质量为56×10^3,与预期大小相符。生物信息学分析结果显示,PPE25蛋白为疏水性蛋白,含多个跨膜结构域,无信号肽。二级结构主要由α-螺旋和无规则卷曲构成,结构比较松散。综合多种表位预测软件分析结果,筛选出3个优势B细胞抗原表位,7个CTL优势抗原表位和9个Th优势抗原表位。 结论成功构建结核分枝杆菌PPE25蛋白编码基因Rv1787重组原核表达质粒,并利用生物信息学筛选出多个优势抗原表位,为进一步研究PPE25蛋白在结核病发生发展中的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 Rv1787基因 PPE25蛋白 结核分枝杆菌 原核表达 生物信息学

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鸟-胞内分枝杆菌复合群鸟和胞内分枝杆菌亚种对20种药物的敏感性特征及亚种间药物敏感性比较 被引量：6

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作者 肖士林 赵秀芹 +6 位作者 刘志广 刘海灿 李马超 蒋毅 赵丽丽 李桂莲 万康林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期448-455,共8页

目的分析鸟-胞内分枝杆菌复合群鸟分枝杆菌亚种和胞内分枝杆菌亚种对20种药物的敏感性特征及比较2个亚种间的药物敏感性差异。方法用微孔板Alamar blue显色法分别检测97株鸟分枝杆菌和172株胞内分枝杆菌对克拉霉素、卷曲霉素和利福布丁... 目的分析鸟-胞内分枝杆菌复合群鸟分枝杆菌亚种和胞内分枝杆菌亚种对20种药物的敏感性特征及比较2个亚种间的药物敏感性差异。方法用微孔板Alamar blue显色法分别检测97株鸟分枝杆菌和172株胞内分枝杆菌对克拉霉素、卷曲霉素和利福布丁等20种药物的最小抑菌浓度,判断其敏感性,分析2个亚种菌株对20种药物的敏感性特征以及对利福霉素类、氨基糖苷类和大环内酯类内药物的交叉耐药性,并比较2个亚种对20种药物的敏感性差异。结果对鸟分枝杆菌敏感率高于80%的药物依次是卷曲霉素(100%,97/97)、阿米卡星(97.9%,95/97)、利福布丁(96.9%,94/97)、利福平和卡那霉素(83.5%,81/97)及克拉霉素(82.5%,80/97);对胞内分枝杆菌敏感率高于80%的药物依次是阿米卡星(99.4%,171/172)、卡那霉素(95.9%,165/172)、利福布丁(95.4%,164/172)、克拉霉素(94.2%,162/172)、氯法齐明(87.2%,150/172)、卷曲霉素和罗红霉素(86.1%,148/172)及利福喷丁(82.6%,142/172)。97株鸟分枝杆菌分别有1株、1株和17株而172株胞内分枝杆菌中分别有0株、7株和6株同时对氨基糖苷类、利福霉素类和大环内酯类内各种药物同时耐药或中度敏感。鸟分枝杆菌对利福平和卷曲霉素的敏感率明显高于胞内分枝杆菌。胞内分枝杆菌对利福喷丁、妥布霉素、卡那霉素、乙胺丁醇、莫西沙星、克拉霉素、阿奇霉素和罗红霉素的敏感率均高于鸟分枝杆菌。结论鸟和胞内分枝杆菌均对卷曲霉素、阿米卡星、利福布丁和克拉霉素敏感性较高,对胞内分枝杆菌敏感的药物多于鸟分枝杆菌,利福喷丁仅对胞内分枝杆菌抗菌性较好,而利福平仅对鸟分枝杆菌抗菌性较好,乙胺丁醇对两个亚种敏感性均较差;对同一种类的药物做药物敏感性试验可为临床医生治疗鸟或胞内分枝杆菌感染选择合适的替代药物做依据。 展开更多

关键词 鸟分枝杆菌 胞内分枝杆菌 药物敏感性

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23株非结核分枝杆菌药物敏感性试验分析 被引量：6

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作者 王斌 李群 +4 位作者 刘海灿 张正东 宁柱 邓建平 万康林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期372-375,381,共5页

目的对自贡市临床分离鉴定的23株非结核分枝杆菌分别进行26种抗生素的药物敏感试验,了解非结核分枝杆菌对不同抗生素的耐药性,为非结核分枝杆菌病临床治疗提供依据。方法采用微孔板阿尔玛蓝测定法(microplate Alamarblue assay,MABA)测... 目的对自贡市临床分离鉴定的23株非结核分枝杆菌分别进行26种抗生素的药物敏感试验,了解非结核分枝杆菌对不同抗生素的耐药性,为非结核分枝杆菌病临床治疗提供依据。方法采用微孔板阿尔玛蓝测定法(microplate Alamarblue assay,MABA)测试每种药物对每株非结核分枝杆菌的最低抑菌浓度(MIC值),通过MIC值判断该菌对此种抗生素是否耐药。结果非结核分枝杆菌对大部分抗结核药物耐药,并且对部分药物的耐药存在种间差异。其中脓肿分枝杆菌耐药率达84.6%,鸟分枝杆菌与胞内分枝杆菌分别达53.8%与52.3%,堪萨斯分枝杆菌耐药率最低为38%。结论对临床非结核分枝杆菌肺病,快速菌株鉴定及药敏试验是治疗的关键。 展开更多

关键词 非结核分枝杆菌 药物敏感试验 耐药

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结核分枝杆菌及结核疫苗新作用方式的研究

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作者 王瑞欢 李马超 +2 位作者 李桂莲 刘海灿 万康林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期797-804,共8页

结核病主要是由结核分枝杆菌引起的传染性疾病,是严重威胁人类健康的重大公共卫生问题。目前,卡介苗仍是唯一被批准应用于人体的预防性疫苗,其对婴幼儿具有较好的保护效果,但对成年人的保护作用存在巨大争议。巨噬细胞和树突状细胞吞噬... 结核病主要是由结核分枝杆菌引起的传染性疾病,是严重威胁人类健康的重大公共卫生问题。目前,卡介苗仍是唯一被批准应用于人体的预防性疫苗,其对婴幼儿具有较好的保护效果,但对成年人的保护作用存在巨大争议。巨噬细胞和树突状细胞吞噬结核分枝杆菌之后,启动适应性免疫应答,活化的效应性CD4(+)和CD8(+)T细胞通过释放细胞因子和细胞毒作用发挥免疫效应。然而,结核分枝杆菌可通过抑制吞噬溶酶体形成、改变代谢途径、抑制抗原提呈等作用发生免疫逃逸,使其在宿主体内长期存在。近年来,随着多组学的发展,针对结核分枝杆菌感染免疫机制的研究有了一定的进展,但通过接种疫苗对结核病进行防控的结果依然不尽人意。本文重点探讨了结核分枝杆菌和宿主之间的免疫反应以及逃逸机制,并概述了结核疫苗的研发情况,有助于我们利用结核菌感染的免疫学知识对结核病疫苗进行快速高效的研发。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 免疫机制 免疫逃逸 疫苗

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Rv2031c、38kDa及融合蛋白CFP10-ESAT6用于结核病血清学诊断的评价 被引量：3

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作者 余琴 林楠 +3 位作者 张爱洁 徐伟 刘英杰 万康林 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第5期397-401,共5页

目的对Rv2031c、38kDa以及融合蛋白CFP10-ESAT6三种结核分枝杆菌抗原和抗原的混合物进行检测效能评价,筛选最佳抗原并分析其应用价值。方法以结核分枝杆菌标准株H37Rv菌株基因组为模板,PCR扩增目的基因;利用pET-30a、pET-32a载体构建重... 目的对Rv2031c、38kDa以及融合蛋白CFP10-ESAT6三种结核分枝杆菌抗原和抗原的混合物进行检测效能评价,筛选最佳抗原并分析其应用价值。方法以结核分枝杆菌标准株H37Rv菌株基因组为模板,PCR扩增目的基因;利用pET-30a、pET-32a载体构建重组质粒,在宿主E.coli BL21(DE3)细胞中诱导表达,利用His标签亲和镍柱纯化重组蛋白。分别用单种重组蛋白和几种蛋白混合后包被酶标板,采用ELISA对129份血清(39份结核病患者血清和90份健康者血清)进行检测。结合受试者工作特征曲线法计算不同抗原和混合抗原的最佳临界值(Cut-off value)包被浓度,得出检测的灵敏度、特异度和曲线下面积,对其诊断效能和应用价值进行综合评价。结果以Rv2031c、38kDa和CFP10-ESAT6为包被抗原的ELISA法检测相应抗体的灵敏度分别为41.0%,51.3%和46.2%,特异度分别为90.0%、88.9%和79.1%,曲线下面积分别为0.640、0.761和0.690,以3种蛋白混合物为包被抗原的3项指标分别为66.7%、77.8%和0.746。结论 Rv2031c、38kDa以及融合蛋白CFP10-ESAT6 3种抗原混合物的诊断效能较好,具有一定的临床应用价值。 展开更多

关键词 结核病 抗原表达 血清学诊断

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多重交叉置换扩增联合羟基萘酚蓝检测脓肿分枝杆菌方法的建立 被引量：3

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作者 尹树鹏 钱城 +4 位作者 言晨绮 李马超 刘海灿 李相新 万康林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期40-44,49,共6页

目的建立一种可视化的恒温扩增方法用于检测脓肿分枝杆菌(MAB)。方法采用特异性全长erm(41)基因建立基于多交叉置换扩增(MCDA)结合羟基萘酚蓝(HNB)的方法,通过比色法直接检测扩增产物,采用23株脓肿分枝杆菌复合群和8种细菌标准株对该方... 目的建立一种可视化的恒温扩增方法用于检测脓肿分枝杆菌(MAB)。方法采用特异性全长erm(41)基因建立基于多交叉置换扩增(MCDA)结合羟基萘酚蓝(HNB)的方法,通过比色法直接检测扩增产物,采用23株脓肿分枝杆菌复合群和8种细菌标准株对该方法进行初步评价。结果建立的MAB-MCDA-HNB检测限为100 fg的DNA模板。31株细菌菌株中,只有脓肿分枝杆菌检测结果为阳性,其它细菌包括结核分枝杆菌,卡介苗,马赛分枝杆菌、鸟分枝杆菌等非结核分枝杆菌和金黄色葡萄球菌等均为阴性。脓肿分枝杆菌模拟痰标本检测灵敏度为1.7×10~3 CFU/mL(每次反应17 CFU)。结论MAB-MCDA-HNB方法能够快速准确诊断脓肿分枝杆菌的感染。 展开更多

关键词 脓肿分枝杆菌 等温扩增 erm(41)基因

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