2017-2020年我国部分地区PRRSV流行毒株变异情况分析 被引量：16

1

作者 吴瑕 劳梦琴 +9 位作者 谭祥梅 陈鹏飞 于家荣 朱钧锐 张玉娇 虞凌雪 高飞 姜一峰 童光志 周艳君 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2021年第5期64-74,共11页

为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的遗传变异情况,本研究对采集自上海市、浙江省、江苏省等地区的566份临床样品进行RT-PCR检测,结果显示,其中246份样品呈现PRRSV阳性。对31株Nsp2基因、21株ORF5基因和12株Nsp9基因进行序... 为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的遗传变异情况,本研究对采集自上海市、浙江省、江苏省等地区的566份临床样品进行RT-PCR检测,结果显示,其中246份样品呈现PRRSV阳性。对31株Nsp2基因、21株ORF5基因和12株Nsp9基因进行序列测定和比对分析,发现不同地区流行的PRRSV其Nsp2基因片段大小存在明显差异,大部分毒株保持了HP-PRRSV类毒株Nsp2基因“1+29 aa”缺失模式,同时,检测到“111+5+1+19 aa”和“1+29+14 aa”两种新的氨基酸缺失模式。ORF5基因主要分布在谱系L8、L3和L1中,氨基酸突变主要位于GP5的信号肽区域和高变区,部分毒株在中和性抗原表位区域存在L39/I39的氨基酸突变,有1株存在H38L39/Y38S39的氨基酸突,另外,部分毒株在毒力相关位点出现了R13/Q13和R151/K151的氨基酸突变,而Nsp9与毒力相关的氨基酸位点则相对保守。本研究表明上述发病猪场中流行的PRRS毒株复杂多样,其中HP-PRRSV类毒株和NADC30类毒株仍然是主要流行毒株,养猪场有必要持续监测PRRSV流行毒株的变异动态,为PRRS的科学防控提供参考依据。 展开更多

关键词 PRRSV NSP2 ORF5 遗传变异

下载PDF 职称材料

1株重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的基因组特征 被引量：6

2

作者 谭祥梅 吴瑕 +9 位作者 陈鹏飞 赵雄伟 周书亭 虞凌雪 童武 高飞 姜一峰 于海 童光志 周艳君 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期3181-3186,共6页

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)不断发生变异,其防控难度也逐渐增加。为了及时监测PRRSV在自然感染背景下的遗传进化特点,本研究从上海某发病猪场的临床样品中分离获得1株PRRSV毒株,命名为SHpd1/2018株,并对其生物学特性和基因组序列进... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)不断发生变异,其防控难度也逐渐增加。为了及时监测PRRSV在自然感染背景下的遗传进化特点,本研究从上海某发病猪场的临床样品中分离获得1株PRRSV毒株,命名为SHpd1/2018株,并对其生物学特性和基因组序列进行分析。结果表明,该毒株基因组全长为15018 bp(不含poly A),不能被针对HP-PRRSV强毒HuN4株的Nsp2的单抗所识别,但其增殖特性与强毒HuN4株相似。序列分析表明,SHpd1/2018株与HP-PRRSV强毒株的相似性最高(与HuN4相似性为94.3%)。重组分析结果显示,SHpd1/2018株是以HP-PRRSV-like为主要亲本毒株,NADC30-like为次要亲本毒株的重组病毒,两个重组断点nt 2002和nt 3205均位于Nsp 2基因的高变区。研究证实SHpd1/2018株是1株发生变异重组的PRRSV分离株,该毒株是上海某猪场保育猪发病的主要原因。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 SHpd1/2018 生物学特性 基因重组分析

下载PDF 职称材料

猪源盖塔病毒的分子生物学研究进展 被引量：6

3

作者 朱世强 王帅勇 +8 位作者 王娟 姚云 虞凌雪 单同领 周艳君 童武 郑浩 童光志 于海 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第2期216-222,共7页

盖塔病毒(GETV)属于披膜病毒科甲病毒属。GETV属于虫媒病毒,可以通过蚊虫感染低等脊椎动物。猪群感染GETV后可发生轻微症状,主要导致怀孕母猪繁殖障碍。目前,GETV在世界范围内流行较为广泛,近年来逐步在猪群中暴发,导致部分猪场经济损... 盖塔病毒(GETV)属于披膜病毒科甲病毒属。GETV属于虫媒病毒,可以通过蚊虫感染低等脊椎动物。猪群感染GETV后可发生轻微症状,主要导致怀孕母猪繁殖障碍。目前,GETV在世界范围内流行较为广泛,近年来逐步在猪群中暴发,导致部分猪场经济损失严重。因此,加强对猪源GETV的病原、致病机制和疫苗的研究,对于该病的防控具有更重要的意义。本文对猪源GETV分子结构和病毒复制以及近年来研究进展进行了综述和展望。 展开更多

关键词 盖塔病毒 基因组 结构蛋白 病毒复制

下载PDF 职称材料

A型塞内卡病毒VP1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备 被引量：1

4

作者 秦文珍 李挺 +11 位作者 赵欣 董苏洁 翟焕杰 叶晨倩 叶曼青 童武 郑浩 于海 单同领 童光志 兰道亮 孔宁 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第2期195-200,共6页

A型塞内卡病毒(SVA)是一种新兴的猪病原体,可引起母猪水泡样病变和仔猪急性死亡。本研究将SVA的VP1基因分别克隆到原核表达载体pCold-I和pCold-TF,并将测序正确的重组质粒VP1-pCold-I、VP1-pCold-TF转化BL21(DE3)大肠杆菌中,诱导表达重... A型塞内卡病毒(SVA)是一种新兴的猪病原体,可引起母猪水泡样病变和仔猪急性死亡。本研究将SVA的VP1基因分别克隆到原核表达载体pCold-I和pCold-TF,并将测序正确的重组质粒VP1-pCold-I、VP1-pCold-TF转化BL21(DE3)大肠杆菌中,诱导表达重组蛋白。结果显示:VP1-pCold-I表达的目的蛋白在沉淀(包涵体)中,VP1-pCold-TF表达的蛋白为可溶性蛋白。分别纯化上述表达的蛋白,并免疫BALB/c小鼠,经四次免疫后得到多克隆抗体。经Western blot和间接免疫荧光(IFA)鉴定,制备的多克隆抗体具有良好的Western blot效价和IFA效价,为相关基础研究和应用研究提供了工具。 展开更多

关键词 A型塞内卡病毒 VP1 原核表达 多克隆抗体

下载PDF 职称材料

猪流行性腹泻病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：1

5

作者 董苏洁 孔宁 +9 位作者 秦文珍 翟焕杰 翟雪滢 杨心雨 童武 郑浩 于海 童光志 李有文 单同领 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第2期174-180,共7页

为了建立高效、灵敏的猪流行性腹泻病毒(PEDV)检测方法,本研究从GenBank数据库中获取PEDV N基因序列,扩增出PEDV N基因标准质粒,并在N基因的保守区域内设计了一对特异性荧光定量引物,成功建立了SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法。... 为了建立高效、灵敏的猪流行性腹泻病毒(PEDV)检测方法,本研究从GenBank数据库中获取PEDV N基因序列,扩增出PEDV N基因标准质粒,并在N基因的保守区域内设计了一对特异性荧光定量引物,成功建立了SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法。经过一系列试验表明,该检测方法线性关系良好,R^(2)值为0.99;特异性强,敏感性高,最低可检测至2.23 copies/μL,比普通PCR灵敏约100倍;重复性好,组内变异系数为0.25%~0.43%,组间变异系数为0.67%~0.97%;对于各地区96份临床样品检测出PEDV阳性率为25%。本研究建立的实时荧光定量PCR检测方法为PEDV的临床诊断、流行病学调查以及定量研究提供了有效的检测工具。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 N基因 SYBR Green I 荧光定量PCR

下载PDF 职称材料

非洲猪瘟病毒pE248R蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备 被引量：1

6

作者 杜楠楠 陈金霞 +6 位作者 曹云雷 张宽 童武 李丽薇 赵冉 童光志 高飞 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第2期188-194,共7页

本研究利用PCR方法从非洲猪瘟病毒的灭活样品中扩增出747 bp的E248R基因全长序列,利用同源重组法构建原核表达质粒pCold I-pE248R,经1 mmol/L的IPTG诱导1 h后,利用SDS-PAGE对重组蛋白进行表达鉴定和反应原性分析,表达蛋白的分子量约为32... 本研究利用PCR方法从非洲猪瘟病毒的灭活样品中扩增出747 bp的E248R基因全长序列,利用同源重组法构建原核表达质粒pCold I-pE248R,经1 mmol/L的IPTG诱导1 h后,利用SDS-PAGE对重组蛋白进行表达鉴定和反应原性分析,表达蛋白的分子量约为32 kDa,利用纯化后得到pE248R重组蛋白作为免疫原经过4次免疫后制备鼠源抗pE248R多克隆抗体。利用该多克隆抗体检测实验室构建并拯救的已证明能够稳定表达ASFV pE248R蛋白的重组病毒rPRRSV-E248R,结果显示制备的抗pE248R的多克隆抗体能够与rPRRSV-E248R发生特异性结合反应,证明利用本试验中原核表达的pE248R蛋白制备的多克隆抗体具有抗pE248R蛋白的特异性,为进一步针对ASFV E248R基因建立快速,特异性的血清学检测方法奠定了基础,也为针对pE248R蛋白的功能性研究提供了研究基础。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 E248R基因 pE248R蛋白 多克隆抗体

下载PDF 职称材料

猪圆环病毒3型Cap蛋白的原核表达 被引量：5

7

作者 王帅勇 汪琪 +11 位作者 朱世强 姚云 虞凌雪 刘晓敏 单同领 郑浩 周艳君 童武 李国新 高飞 童光志 于海 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2021年第5期59-63,共5页

为获得具有良好抗原性的猪圆环病毒3型(PCV3)Cap重组蛋白,根据本实验室已测序获得的1株全基因组序列设计特异性引物,以阳性病料中提取的病毒DNA基因组为模板,通过PCR方法扩增得到PCV3的去核定位信号的Cap蛋白基因,将目的片段插入到pCold... 为获得具有良好抗原性的猪圆环病毒3型(PCV3)Cap重组蛋白,根据本实验室已测序获得的1株全基因组序列设计特异性引物,以阳性病料中提取的病毒DNA基因组为模板,通过PCR方法扩增得到PCV3的去核定位信号的Cap蛋白基因,将目的片段插入到pCold TF载体中构建pCold TF-dPCV3-Cap重组质粒,然后将其转化至表达宿主菌BL21(DE3)中,通过优化表达和纯化条件,最终获得纯度较高的Cap重组蛋白。SDS-PAGE分析表明,该蛋白能够在上清液中大量表达,并且在IPTG终浓度为1 mmol/mL、16℃诱导20 h的条件下表达量最高;Western blot结果证实通过磁珠纯化后的目的蛋白与PCV3阳性血清能够发生特异性反应。因此,重组Cap蛋白具有良好的反应原性和特异性,可以作为研制PCV3多表位基因工程疫苗和血清抗体诊断方法的候选靶抗原。 展开更多

关键词 猪圆环病毒3型 原核表达 CAP蛋白

下载PDF 职称材料

非洲猪瘟病毒CP312R基因编码蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备与应用

8

作者 刘佳晨 郭子强 +9 位作者 陈金霞 曹云雷 童武 乔思娜 刘长龙 赵冉 郑海红 童光志 李丽薇 高飞 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期1-6,共6页

为制备ASFV CP312R基因编码蛋白的多克隆抗体,利用PCR方法从非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的灭活样品中扩增出924 bp的CP312R基因全长序列,利用同源重组法构建出原核表达质粒pCold-Ⅰ-ASFV-CP312R,将其转化至原核表达... 为制备ASFV CP312R基因编码蛋白的多克隆抗体,利用PCR方法从非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的灭活样品中扩增出924 bp的CP312R基因全长序列,利用同源重组法构建出原核表达质粒pCold-Ⅰ-ASFV-CP312R,将其转化至原核表达感受态细胞BL21中,经1 mmol/L的IPTG低温条件下诱导表达CP312R编码蛋白并经过镍柱亲和层析纯化后,利用SDS-PAGE对重组蛋白进行表达鉴定和反应原性分析,表达蛋白的相对分子质量约为34 kDa,通过Western blot分析,该蛋白能被ASFV抗体特异性识别。将所得的蛋白经处理纯化后免疫小鼠3次,得到含多克隆抗体的血清。利用该抗体检测实验室构建并拯救的表达ASFV CP312R基因编码蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV),结果显示该多抗具有良好的反应原性和特异性,并且证明了ASFV CP312R基因编码蛋白可在PRRSV活载体中稳定表达。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 CP312R基因 原核表达 多克隆抗体

原文传递

伪狂犬病病毒UL36蛋白单克隆抗体的制备和鉴定

9

作者 陈玲超 王兴娅 +11 位作者 李俊波 李佳佳 王晨 李松楠 王安铖 孟鑫 童武 孔宁 于海 单同领 童光志 郑浩 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期373-378,共6页

伪狂犬病病毒UL36基因编码的皮层蛋白VP1/2在病毒粒子组装过程中发挥重要作用。本试验以UL36基因为研究对象,将截短的UL36基因克隆入载体pCold I,构建了重组原核表达质粒pCold I-UL36。经诱导表达,将包涵体形式表达的重组蛋白经过变性... 伪狂犬病病毒UL36基因编码的皮层蛋白VP1/2在病毒粒子组装过程中发挥重要作用。本试验以UL36基因为研究对象,将截短的UL36基因克隆入载体pCold I,构建了重组原核表达质粒pCold I-UL36。经诱导表达,将包涵体形式表达的重组蛋白经过变性、亲和层析及复性后获得了纯度较高的蛋白。将纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合和间接ELISA方法筛选出1株能稳定分泌针对UL36蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,被命名为UL36-6,抗体亚型鉴定结果为Ig G1和κ,制备的腹水抗体中和效价及纯度高,Western-blot和间接免疫荧光试验结果表明单克隆抗体具有很好的特异性。综上所述,本研究成功制备出1株针对PRV UL36蛋白的单克隆抗体,为深入研究UL36蛋白的生物学功能奠定了基础。 展开更多

关键词 伪狂犬病病毒 UL36基因 VP1/2 单克隆抗体

原文传递

AIFM1分子与猪伪狂犬病病毒UL16蛋白互作抑制病毒的增殖机制研究

10

作者 徐晶晶 高飞 +7 位作者 武吉强 程雪飞 刘宇婷 傅欣玲 郑浩 童武 童光志 李国新 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第1期9-17,共9页

凋亡诱导因子1(AIFM1)是一个结构复杂的线粒体蛋白,能优化线粒体呼吸链的功能、参与氧化还原代谢,是第一个被发现的caspase非依赖性的凋亡蛋白。本研究发现AIFM1能与猪伪狂犬病病毒(PRV)pUL16相互作用,过表达以及RNA干扰试验结果表明,AI... 凋亡诱导因子1(AIFM1)是一个结构复杂的线粒体蛋白,能优化线粒体呼吸链的功能、参与氧化还原代谢,是第一个被发现的caspase非依赖性的凋亡蛋白。本研究发现AIFM1能与猪伪狂犬病病毒(PRV)pUL16相互作用,过表达以及RNA干扰试验结果表明,AIFM1能抑制PRV的增殖,且pUL16能减弱这种抑制作用。激光共聚焦和流式试验表明,PRV感染细胞时,AIFM1从线粒体易位至细胞核,且AIFM1增强了PRV引起的细胞凋亡。本研究通过对PRV pUL16和宿主蛋白相互作用机制研究,部分地解析了这两种蛋白在PRV复制、包装以及与宿主互作中发挥的作用,为进一步阐明PRV感染机制奠定了基础。 展开更多

关键词 伪狂犬病病毒 独特长区16蛋白 凋亡诱导因子1

下载PDF 职称材料

针对非洲猪瘟病毒K205R基因实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

11

作者 乔思娜 李丽薇 +8 位作者 赵款 高飞 周艳君 姜一峰 童武 赵冉 童光志 李国新 董世山 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第4期67-72,共6页

为了快速、准确检测非洲猪瘟病毒(African swin fever virus,ASFV),本文根据我国流行毒株ASFV SY18(GenBank ID:MH766894.1)已公布的K205R基因序列设计并合成特异性引物及探针,建立针对K205R基因的TaqMan荧光定量PCR检测方法。经过特异... 为了快速、准确检测非洲猪瘟病毒(African swin fever virus,ASFV),本文根据我国流行毒株ASFV SY18(GenBank ID:MH766894.1)已公布的K205R基因序列设计并合成特异性引物及探针,建立针对K205R基因的TaqMan荧光定量PCR检测方法。经过特异性试验、敏感性试验、重复性试验和临床样品检测试验分析显示,本文建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法Ct值与标准品在1×10^(11)~1×10^(2)copies/μL范围内具有很好的线性关系,相关系数为0.998,斜率为-2.797,检测下限为10^(2)copies/μL,与其他能引起相似临床症状的猪源病毒无交叉反应。重复性试验结果显示,组间与组内变异系数均小于1.53774%,重复性好。本方法适用于临床样品及本实验室构建的表达ASFV K205R基因的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的鉴定及检测,对ASFV快速检测及ASF早期诊断有重要意义。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒(ASFV) K205R基因 荧光定量PCR 检测方法

下载PDF 职称材料

猪圆环病毒2型Cap蛋白的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的初步建立

12

作者 严杰聪 王帅勇 +11 位作者 王曼茱 王娟 荣新利 邢燕茹 虞凌雪 周艳君 单同领 童武 郑浩 刘长龙 童光志 于海 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第4期79-84,共6页

Cap蛋白作为猪圆环病毒2型(PCV2)的主要结构蛋白,构成病毒的核衣壳,是PCV2的主要免疫保护性抗原,在PCV2血清学诊断中具有重要意义。本研究根据PCV2的ORF2基因序列设计特异性引物,通过PCR方法扩增得到去核定位信号肽的ORF2基因,并通过同... Cap蛋白作为猪圆环病毒2型(PCV2)的主要结构蛋白,构成病毒的核衣壳,是PCV2的主要免疫保护性抗原,在PCV2血清学诊断中具有重要意义。本研究根据PCV2的ORF2基因序列设计特异性引物,通过PCR方法扩增得到去核定位信号肽的ORF2基因,并通过同源重组将其克隆至原核表达载体pCold-Ⅰ中,经测序鉴定成功获得重组质粒pCold-Ⅰ-Cap。将重组质粒转化至感受态细胞BL21中进行表达,通过考马斯亮蓝染色以及免疫印迹试验检测Cap蛋白的表达,同时将纯化后的重组蛋白通过优化反应条件建立检测PCV2血清抗体的间接ELISA方法。结果表明:重组去核定位信号肽Cap蛋白可溶性表达且可以与PCV2阳性血清特异性结合,通过探索不同蛋白包被浓度以及不同一抗孵育浓度初步建立了间接ELISA检测方法,进而为PCV2抗体的有效监测奠定基础。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 CAP蛋白 同源重组 表达纯化 ELISA

下载PDF 职称材料

非洲猪瘟病毒F334L基因编码蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

13

作者 刘佳晨 李丽薇 +7 位作者 郭子强 陈金霞 曹云雷 乔思娜 刘长龙 赵冉 童光志 高飞 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第4期173-178,共6页

本研究通过将非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的一种非结构蛋白编码基因F334L克隆至原核表达载体pCold-Ⅰ,完成重组表达质粒pCold-Ⅰ-ASFV-F334L的构建。将pCold-Ⅰ-ASFV-F334L转化受体菌感受态细胞,经1 mmol/L的IPTG诱... 本研究通过将非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的一种非结构蛋白编码基因F334L克隆至原核表达载体pCold-Ⅰ,完成重组表达质粒pCold-Ⅰ-ASFV-F334L的构建。将pCold-Ⅰ-ASFV-F334L转化受体菌感受态细胞,经1 mmol/L的IPTG诱导原核表达。SDS-PAGE和Western blot试验检测结果表明,F334L基因得到了良好的表达,将所得的F334L基因编码蛋白纯化后免疫小鼠,获得含多克隆抗体的血清。利用该抗体检测实验室构建并拯救的表达ASFV F334L基因编码蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒rPRRSV-F334L,试验结果显示该多克隆抗体具有良好的反应原性和特异性,证明了ASFV F334L基因可在PRRSV活载体中稳定表达,为ASFV活载体疫苗的研发提供了材料。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 病毒活载体 F334L基因 重组病毒

下载PDF 职称材料

猪源盖塔病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：2

14

作者 王娟 王帅勇 +9 位作者 虞凌雪 张毅峰 严杰聪 王曼茱 周艳君 单同领 童武 郑浩 童光志 于海 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第3期120-126,共7页

猪盖塔病毒感染是由盖塔病毒(GETV)引起母猪妊娠初期胎儿死亡、初生仔猪发病的一种繁殖障碍性疾病。猪是自然界中GETV的主要扩增宿主,可以产生足够高的病毒血症滴度来感染叮咬的蚊子并维持GETV的传播周期,所以定期对猪群进行GETV监测对... 猪盖塔病毒感染是由盖塔病毒(GETV)引起母猪妊娠初期胎儿死亡、初生仔猪发病的一种繁殖障碍性疾病。猪是自然界中GETV的主要扩增宿主,可以产生足够高的病毒血症滴度来感染叮咬的蚊子并维持GETV的传播周期,所以定期对猪群进行GETV监测对于预防潜在的GETV暴发具有重要意义。本研究通过分析GETV E2蛋白基因特征,设计特异性引物和探针,条件优化后建立检测GETV感染的TaqMan实时荧光定量PCR方法。结果表明:以阳性质粒为标准品建立的标准曲线在1×10^(2)~1×10^(7)copies/μL内呈现良好的线性关系,扩增效率为1.61;该检测方法的最低检出限低至3.16 TCID50/mL,远远低于普通PCR的检测限3.16×10^(3)TCID50/mL;组内、组间重复性试验的变异系数均小于2%,具有良好的重复性和稳定性。本研究建立的方法能够快速有效的检测和定量GETV,为猪群中GETV监测提供可靠的检测方法。 展开更多

关键词 猪源盖塔病毒 TaqMan实时荧光定量PCR方法 检测

下载PDF 职称材料

猪源盖塔病毒抗体间接ELISA检测方法的初步建立及其优化 被引量：2

15

作者 朱世强 王帅勇 +9 位作者 王娟 虞凌雪 姚云 张毅峰 周艳君 单同领 郑浩 童武 童光志 于海 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第1期66-71,共6页

为了建立猪源盖塔病毒(GETV)血清学ELISA抗体检测方法,本实验首先在PK-15细胞上增殖猪源盖塔病毒(GETV-SD1),并对病毒进行灭活处理和超离纯化,将纯化的灭活GETV作为包被抗原,经过包被条件的优化,初步建立了GETV特异性抗体检测的间接ELIS... 为了建立猪源盖塔病毒(GETV)血清学ELISA抗体检测方法,本实验首先在PK-15细胞上增殖猪源盖塔病毒(GETV-SD1),并对病毒进行灭活处理和超离纯化,将纯化的灭活GETV作为包被抗原,经过包被条件的优化,初步建立了GETV特异性抗体检测的间接ELISA方法。结果显示:GETV粒子的最佳包被浓度为200 ng/孔,最佳包被条件为4℃孵育过夜,最佳封闭条件4℃封闭2 h,血清最佳孵育条件为37℃孵育2 h,血清最佳稀释比1∶200,临界值为0.181;特异性检测试验结果表明,该检测方法具有GETV特异性;所建立的方法也具有较好的重复性,批内、批间重复率变异系数均小于10%;通过稀释阳性血清表明该方法具有较好的敏感性。本研究建立的猪源盖塔病毒抗体的间接ELISA检测方法为GETV抗体的有效监测奠定了坚实的基础。 展开更多

关键词 猪源盖塔病毒 全病毒蛋白 间接ELISA

下载PDF 职称材料

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗株作为外源基因表达活病毒载体的研究 被引量：2

16

作者 陈金霞 张宽 +9 位作者 张玉娇 杜楠楠 郑海红 李丽薇 周艳君 虞凌雪 童武 郑浩 童光志 高飞 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第3期12-19,共8页

利用反向遗传操作技术,猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)也可以被用作外源基因表达的活载体。前期研究将猪瘟病毒E2蛋白的编码基因插入了高致病性PRRSV弱毒疫苗株HuN4-F112的非结构蛋白和结构蛋白编码间区,所拯救的重组病毒rPRRSV-E2能够... 利用反向遗传操作技术,猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)也可以被用作外源基因表达的活载体。前期研究将猪瘟病毒E2蛋白的编码基因插入了高致病性PRRSV弱毒疫苗株HuN4-F112的非结构蛋白和结构蛋白编码间区,所拯救的重组病毒rPRRSV-E2能够在体外和体内高效表达E2蛋白。能够为猪瘟和HP-PRRS的感染提供100%的免疫保护。本研究利用rPRRSV-E2的全长感染性克隆平台,在PRRSV基因组ORF7和3'非翻译区之间插入了转录调控序列6(TRS6)和绿色荧光蛋白的编码基因,构建并拯救了重组病毒rPRRSV-E2-EGFP,该病毒感染MARC-145细胞后,可以同时表达猪瘟E2蛋白和EGFP。外源序列在载体中能够保持遗传稳定。本研究为开发PRRSV作为病毒活载体疫苗提供了一个新的外源基因插入位点和构建策略,对今后多价疫苗的研发有重要意义。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 3'非翻译区 转录调控序列 外源基因表达

下载PDF 职称材料

宿主天然免疫因子在猪繁殖与呼吸综合征病毒感染中的作用机制研究进展 被引量：2

17

作者 郭子强 刘佳晨 +5 位作者 周艳君 赵冉 郑海红 童光志 李丽薇 高飞 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2023年第8期112-118,共7页

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的急性接触性传染病,给养猪业造成的经济损失巨大。PRRSV感染机体之后,宿主体内的免疫系统识别PRRSV,多种天然免疫因... 猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的急性接触性传染病,给养猪业造成的经济损失巨大。PRRSV感染机体之后,宿主体内的免疫系统识别PRRSV,多种天然免疫因子会与PRRSV蛋白相互作用以对病毒感染产生影响。本文主要综述了宿主体内天然免疫抑制因子影响PRRSV感染的相关机制,为解析PRRSV的致病机制以及研发PRRS防控技术提供理论依据。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 天然免疫因子 结构蛋白 非结构蛋白 干扰素 MICRORNA

下载PDF 职称材料

猪繁殖与呼吸综合征病毒转录调控序列顺式作用元件的鉴定及其在基因转录表达中的机制解析 被引量：1

18

作者 张宽 陈金霞 +9 位作者 张玉娇 杜楠楠 郑浩 姜一峰 李丽薇 虞凌雪 周艳君 童武 童光志 高飞 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第2期13-21,共9页

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)的转录调控序列(TRS)在sg mRNA的合成中起着至关重要的作用。为了深入了解TRS在病毒亚基因组转录和翻译过程中的作用,本研究通过对高致病性PRRSV细胞传代致弱株HuN4-F112的转录调控序列进行鉴定,并构... 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)的转录调控序列(TRS)在sg mRNA的合成中起着至关重要的作用。为了深入了解TRS在病毒亚基因组转录和翻译过程中的作用,本研究通过对高致病性PRRSV细胞传代致弱株HuN4-F112的转录调控序列进行鉴定,并构建了一系列针对TRS6突变以及将TRS6替换为其他Body TRS的全长感染性克隆。结果表明,同时突变TRS6核心寡核苷酸3'端两个碱基或同时缺失5'端和3'端侧翼序列的全长突变体克隆均不能拯救出病毒,而单独缺失TRS65'端或3'端侧翼序列的全长突变体克隆可以拯救出病毒,但侧翼序列缺失后拯救出的病毒相较于原始亲本病毒的滴度有所下降;将HuN4-F112-EGFP的TRS6替换为TRS2、3、7均可以拯救出病毒,并有相似的生长特性,但含有TRS2的重组病毒滴度相对较低,而将TRS6替换为TRS4或TRS5后,无法拯救出病毒。本研究鉴定了HuN4-F112的一系列Body TRS在基因组中的相对位置,同时也证明了ORF1b和ORF2a基因区中4种不同的Body TRS都可以引导基因稳定高效的表达,该研究为今后以PRRSV疫苗株为活病毒载体进行多价重组疫苗的研发奠定了基础。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 转录调控序列 非连续性转录

下载PDF 职称材料

非洲猪瘟病毒p17蛋白的哺乳动物细胞表达及鉴定 被引量：1

19

作者 乔思娜 赵款 +7 位作者 刘佳晨 李国新 童武 周艳君 赵冉 童光志 高飞 李丽薇 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2023年第3期68-73,共6页

研究旨在利用哺乳动物细胞悬浮培养系统表达非洲猪瘟病毒(ASFV)p17蛋白,纯化并免疫小鼠,制备针对ASFV p17蛋白的特异性多克隆抗体。根据GenBank中公布的ASFV SY18毒株p17蛋白编码基因序列,设计特异性引物扩增p17基因片段,构建重组真核... 研究旨在利用哺乳动物细胞悬浮培养系统表达非洲猪瘟病毒(ASFV)p17蛋白,纯化并免疫小鼠,制备针对ASFV p17蛋白的特异性多克隆抗体。根据GenBank中公布的ASFV SY18毒株p17蛋白编码基因序列,设计特异性引物扩增p17基因片段,构建重组真核表达质粒pCDNA3.1-p17-strep。将其瞬时转染293i细胞,并利用下游strep标签进行蛋白纯化。纯化后的重组p17蛋白配合MnJ(β)胶体锰佐剂免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体血清。利用Western blot、间接免疫荧光试验鉴定该多克隆抗体的反应原性和特异性。结果显示:本试验成功构建pCDNA3.1-p17-strep真核表达质粒,转染293i细胞后纯化获得重组p17蛋白。免疫小鼠后制备的多克隆抗体与真核表达的p17蛋白及表达ASFV p17蛋白的猪繁殖与呼吸综合征病毒均有良好的特异性免疫反应。本试验为深入探讨ASFV p17蛋白的生物学功能奠定了基础。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 p17蛋白 293i细胞 多克隆抗体

下载PDF 职称材料

抗猪PABPC1蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：2

20

作者 焦亚娟 王桦 +10 位作者 孔宁 孙大格 董苏洁 陈晓勇 翟焕杰 童武 郑浩 于海 虞凌雪 童光志 单同领 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第5期135-139,共5页

细胞质聚腺苷酸结合蛋白1(PABPC1)是一种mRNA poly A结合蛋白,在维持mRNA稳定和蛋白翻译方面起着重要作用。本研究中将猪源PABPC1基因克隆并插入原核表达载体pCold-Ⅰ中,构建重组表达质粒pCold-pPABPC1。将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感... 细胞质聚腺苷酸结合蛋白1(PABPC1)是一种mRNA poly A结合蛋白,在维持mRNA稳定和蛋白翻译方面起着重要作用。本研究中将猪源PABPC1基因克隆并插入原核表达载体pCold-Ⅰ中,构建重组表达质粒pCold-pPABPC1。将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并经过IPTG诱导表达重组猪PABPC1蛋白。然后,用纯化的rpPABPC1蛋白免疫BALB/c小鼠以制备PABPC1的单克隆抗体。Western blot结果表明,PABPC1单克隆抗体与PK1细胞和HEK293T细胞中的PABPC1蛋白发生了特异性反应。猪PABPC1特异性单克隆抗体为进一步研究PABPC1的功能提供了有价值的工具。 展开更多

关键词 PABPC1 克隆 表达 单克隆抗体

下载PDF 职称材料