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内皮素-1对大鼠血管平滑肌细胞一氧化氮及硫化氢体系的影响 被引量:7
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作者 田小雨 张清友 +6 位作者 黄娅茜 张达 汤新景 金红芳 杜军保 唐朝枢 孙燕 《中华实用儿科临床杂志》 CSCD 北大核心 2018年第13期1013-1017,共5页
目的探讨不同浓度内皮素-1(ET-1)对大鼠血管平滑肌细胞(A7r5细胞株)内源性一氧化氮(NO)及硫化氢(H2S)体系的影响。方法将A7r5细胞分为对照组和实验组,在实验组中分别加入浓度为10-8~10-6 mol/L的ET-1,对照组加入等体积的... 目的探讨不同浓度内皮素-1(ET-1)对大鼠血管平滑肌细胞(A7r5细胞株)内源性一氧化氮(NO)及硫化氢(H2S)体系的影响。方法将A7r5细胞分为对照组和实验组,在实验组中分别加入浓度为10-8~10-6 mol/L的ET-1,对照组加入等体积的无菌磷酸盐缓冲液(PBS),48 h后分别应用NO和H2S探针原位检测A7r5细胞中NO及H2S水平,分别采用NO测定试剂盒和敏感硫电极法检测细胞上清中NO及H2S水平,应用Western blot法检测A7r5细胞中诱导型一氧化氮合酶(NOS2)、内皮型一氧化氮合酶(NOS3)、胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)、胱硫醚-β-合成酶(CBS)及细胞增殖核抗原(PCNA)的表达。结果10-8、10-7及10-6 mol/L ET-1处理的A7r5细胞内NO水平的相对荧光强度(0.078±0.080、0.075±0.002、0.056±0.009)均低于对照组(0.094±0.061),差异有统计学意义(F=15.248,P〈0.05);细胞上清中NO水平[(1.391±0.134) μmol/L、(1.219±0.280) μmol/L、(1.116±0.181) μmol/L]均明显低于对照组[(2.131±0.484) μmol/L],差异有统计学意义(F=20.833,P〈0.01);NOS2 (0.457±0.097、0.462±0.116、0.438±0.180)明显低于对照组(0.721±0.222),差异有统计学意义(F=6.196,P〈0.05);NOS3蛋白表达差异无统计学意义(F=2.669,P〉0.05)。10-8、10-7、10-6 mol/L ET-1组A7r5细胞内H2S水平的相对荧光强度(0.063±0.002、0.056±0.008、0.042±0.009)低于对照组(0.082±0.006),差异有统计学意义(F=16.297,P〈0.01);细胞上清中H2S水平[(19.961±3.428) μmol/L、(17.516±5.144) μmol/L、(14.481±4.885) μmol/L]均明显低于对照组[(29.439±4.236) μmol/L],差异有统计学意义(F=12.518,P〈0.01);CBS蛋白表达(0.359±0.096、0.270±0.038、0.174±0.051)均低于对照组(0.707±0.107),差异有统计学意义(F=20.833,P〈0.01),CSE蛋白表达差异无统计学意义(F=0 展开更多
关键词 内皮素-1 一氧化氮 硫化氢 血管平滑肌细胞 大鼠
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内源性二氧化硫对氯化钴诱导人肺动脉内皮细胞凋亡的影响 被引量:1
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作者 刘欣 张达 +5 位作者 李坤 余孝其 唐朝枢 杜军保 金红芳 黄娅茜 《中华实用儿科临床杂志》 CSCD 北大核心 2018年第13期999-1003,共5页
目的研究内源性二氧化硫(SO2)对氯化钴(CoCl2)诱导人肺动脉内皮细胞(HPAECs)凋亡的调节作用。方法采用CoCl2诱导原代HPAECs制备低氧刺激细胞凋亡模型,采用慢病毒转染过表达内源性SO2生成关键酶天冬氨酸氨基转移酶1(AAT1),HPA... 目的研究内源性二氧化硫(SO2)对氯化钴(CoCl2)诱导人肺动脉内皮细胞(HPAECs)凋亡的调节作用。方法采用CoCl2诱导原代HPAECs制备低氧刺激细胞凋亡模型,采用慢病毒转染过表达内源性SO2生成关键酶天冬氨酸氨基转移酶1(AAT1),HPAECs分为4组:空载体(vehicle)组、vehicle+CoCl2组、AAT1组及AAT1+CoCl2组。采用Western blot法检测AAT1、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)、Caspase-3蛋白和活化的Caspase-3(cleaved Caspase-3)的表达,采用比色法检测AAT活性,采用荧光探针原位检测HPAECs中SO2水平,采用依赖于末端脱氧核苷酸转移酶的dUTP末端标记法(TUNEL)测定细胞凋亡。结果4组HPAECs中SO2含量、AAT1和bcl-2蛋白表达及cleaved Caspase-3/Caspase-3比值差异均有统计学意义(F=147.364、23.738、6.521、64.884,均P〈0.05),但bax蛋白表达差异无统计学意义(F=1.620,P〉0.05)。与vehicle组相比,vehicle+CoCl2组HPAECs中AAT活性[(0.96±0.24) Carmen′s unit/μg比(2.21±0.60) Carmen′s unit/μg]、SO2水平(40.71±7.72比105.60±16.20)和bcl-2蛋白表达(0.59±0.19比1.02±0.20)均显著下降,细胞凋亡和cleaved Caspase-3/Caspase-3比值(1.56±0.25比0.95±0.13)明显增加,差异均有统计学意义(均P〈0.05);但AAT1蛋白表达差异无统计学意义(0.50±0.12比0.53±0.11,P〉0.05)。与vehicle组相比,AAT1组HPAECs中SO2水平(351.50±42.43比105.60±16.20)和AAT1蛋白表达(1.22±0.33比0.53±0.11)均显著升高,差异均有统计学意义(均P〈0.05)。与AAT1组相比,AAT1+CoCl2组HPAECs中SO2水平(333.50±46.22比351.50±42.43)、AAT1蛋白表达(1.26±0.36比1.22±0.33)和bcl-2蛋白表达(1.14±0.38比1.03±0.27)差异无统计学意义,细胞凋亡和cleaved Caspase-3/Caspase-3比值(0.51±0.17比0.50±0.11)差异无统计学意义(均P〉0.05)。结论内源性SO2可抑制CoCl2诱导HPA 展开更多
关键词 二氧化硫 天冬氨酸氨基转移酶1 氯化钴 人肺动脉内皮细胞 凋亡
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