人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)基因作为一种抑癌基因,在调控肿瘤方面的作用广为人知。近年来研究发现,PTEN除了在肿瘤防治上发挥作用外,还能通过抑制炎症...人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)基因作为一种抑癌基因,在调控肿瘤方面的作用广为人知。近年来研究发现,PTEN除了在肿瘤防治上发挥作用外,还能通过抑制炎症、氧化应激的发展来减缓动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的进程。同时,PTEN蛋白能够抑制AS中血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)的异常增殖,以及调控巨噬细胞极化的方向、改变巨噬细胞表面清道夫受体的类型来抗AS。而PTEN对于血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VECs)的调控则具有双重性。文章对PTEN的结构、功能与发挥的调控作用做一简要综述,以期为AS防治的基础研究提供新的思路和靶点。展开更多
目的构建重组慢病毒表达载体pCDH-Daxx-EGFP,并探讨Daxx对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导VSMCs增殖的影响。方法基于PAS(PCR-based Accurate Synthesis)的方法构建重组慢病毒表达载体pCDH-Daxx-EGFP。经测序和酶切验证后,用重组慢病毒表达载体...目的构建重组慢病毒表达载体pCDH-Daxx-EGFP,并探讨Daxx对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导VSMCs增殖的影响。方法基于PAS(PCR-based Accurate Synthesis)的方法构建重组慢病毒表达载体pCDH-Daxx-EGFP。经测序和酶切验证后,用重组慢病毒表达载体pCDH-Daxx-EGFP与包装辅助载体共转染293T细胞进行慢病毒包装,收集病毒液纯化后感染VSMCs,Western blot法鉴定过表达Daxx的VSMCs株。然后将pCDH-EGFP病毒液感染的空载体细胞和pCDH-Daxx-EGFP病毒液的感染的过表达Daxx细胞都分成无血清培养基孵育组和AngⅡ孵育组。用MTT法检测细胞活性、流式细胞术观察细胞周期、划痕法检测细胞迁移、Western blot法检测细胞中p-Akt蛋白表达。结果基因测序与双酶切鉴定表明Daxx基因慢病毒表达载体构建成功;与Vector组比,转染Daxx组、蛋白表达水平明显增加(P<0.05);经AngII处理后,转染Daxx组细胞活性、S期细胞比率和与细胞迁移率与Vector组比较显著降低(P<0.05);转染Daxx组细胞中p-Akt蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论成功构建了重组慢病毒表达载体pCDH-Daxx-EGFP和过表达Daxx的VSMCs株;Daxx能显著抑制AngII诱导的VSMCs增殖和迁移,其机制可能与p-Akt蛋白有关。展开更多
文摘目的构建重组慢病毒表达载体pCDH-Daxx-EGFP,并探讨Daxx对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导VSMCs增殖的影响。方法基于PAS(PCR-based Accurate Synthesis)的方法构建重组慢病毒表达载体pCDH-Daxx-EGFP。经测序和酶切验证后,用重组慢病毒表达载体pCDH-Daxx-EGFP与包装辅助载体共转染293T细胞进行慢病毒包装,收集病毒液纯化后感染VSMCs,Western blot法鉴定过表达Daxx的VSMCs株。然后将pCDH-EGFP病毒液感染的空载体细胞和pCDH-Daxx-EGFP病毒液的感染的过表达Daxx细胞都分成无血清培养基孵育组和AngⅡ孵育组。用MTT法检测细胞活性、流式细胞术观察细胞周期、划痕法检测细胞迁移、Western blot法检测细胞中p-Akt蛋白表达。结果基因测序与双酶切鉴定表明Daxx基因慢病毒表达载体构建成功;与Vector组比,转染Daxx组、蛋白表达水平明显增加(P<0.05);经AngII处理后,转染Daxx组细胞活性、S期细胞比率和与细胞迁移率与Vector组比较显著降低(P<0.05);转染Daxx组细胞中p-Akt蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论成功构建了重组慢病毒表达载体pCDH-Daxx-EGFP和过表达Daxx的VSMCs株;Daxx能显著抑制AngII诱导的VSMCs增殖和迁移,其机制可能与p-Akt蛋白有关。
