废旧磷酸铁锂电池回收技术研究进展 被引量：42

1

作者 陈永珍 黎华玲 +2 位作者 宋文吉 涂小琳 冯自平 《储能科学与技术》 CAS CSCD 2019年第2期237-247,共11页

纯电动客车用电池以磷酸铁锂电池为主,电池寿命结束后将产生大量的废旧电池,如何处理废旧电池是人们关心的重要问题。基于此,本文介绍了国家目前对于废旧电池回收的相关政策以及废旧Li Fe PO4电池的主要有价成分。详细介绍了废旧Li Fe ... 纯电动客车用电池以磷酸铁锂电池为主,电池寿命结束后将产生大量的废旧电池,如何处理废旧电池是人们关心的重要问题。基于此,本文介绍了国家目前对于废旧电池回收的相关政策以及废旧Li Fe PO4电池的主要有价成分。详细介绍了废旧Li Fe PO4材料的多种回收、再利用方法,包括化学沉淀法回收、高温固相修复技术、高温固相再生技术、生物浸出技术以及机械活化处理回收技术等;并分别介绍了高温热解处理、有机溶剂萃取回收、超临界CO2回收的电解液回收处理技术以及负极材料的分选回收技术、石墨修复改性技术。沉淀法回收产物为含锂、铁的工业原料,该类方法易于实现规模化应用,但是会产生大量酸碱废液;高温固相修复、再生方法工艺流程短,除杂将会是该工艺规模化应用的难点。对不同类型的回收材料提出不同回收处理方法,为废旧磷酸铁锂电池的回收提供参考。 展开更多

关键词 废旧锂离子电池 磷酸铁锂 电解液 负极材料 回收 再生

下载PDF 职称材料

骨细胞Wnt/β-Catenin通过Notch信号促进BMSCs成骨分化 被引量：19

2

作者 任磊 代光明 +6 位作者 林枭 张东力 田冕 贺尧 许文娟 涂小林 黄伟 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期600-605,共6页

目的探讨骨细胞Wnt信号通路对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的作用及其分子机制。方法采用条件性基因敲出Cre/loxp技术制备特异性激活骨细胞Wnt/β-Catenin信号通路的小鼠;体外分离其和野生对照组小鼠的骨细胞,并分别与野生型小鼠骨... 目的探讨骨细胞Wnt信号通路对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的作用及其分子机制。方法采用条件性基因敲出Cre/loxp技术制备特异性激活骨细胞Wnt/β-Catenin信号通路的小鼠;体外分离其和野生对照组小鼠的骨细胞,并分别与野生型小鼠骨髓间充质干细胞共培养;碱性磷酸酶(ALP)染色及活性定量、茜素红(Alizarin red)染色检测共培养早期成骨分化和晚期钙盐沉积;Real-Time PCR检测骨细胞Notch信号配体Jag1、Jag2、Dll1、Dll4及共培养后成骨分化特异标志物Runx2、ALP、Osteocalcin的mRNA表达水平。随后于共培养中加入Notch信号通路化学抑制剂DAPT(对照组加DMSO),再次行碱性磷酸酶(ALP)染色及活性定量和Real-Time PCR检测成骨分化特异标志物表达水平。结果 Wnt/β-Catenin激活的骨细胞其自身Jag1、Jag2、Dll4 mRNA表达较对照组骨细胞明显升高(P<0.05),与BMSCs共培养后成骨转录因子Runx2,成骨分化特异标志物ALP、Osteocalcin mRNA的表达较野生型明显升高(P<0.05),钙盐沉积增加。加入DAPT后,骨细胞Wnt激活组成骨转录因子Runx2、ALP、Osteocalcin mRNA的表达明显下降(P<0.05)。结论骨细胞调控骨的代谢,激活其Wnt/β-Catenin信号通路将通过上调Notch信号而促进BMSCs的成骨分化。 展开更多

关键词 骨细胞 WNT/Β-CATENIN 骨髓间充质干细胞 NOTCH 成骨分化

下载PDF 职称材料

TGF-βⅡ型受体小分子抑制剂ITD-1对骨髓基质细胞成骨分化和血管形成的作用 被引量：9

3

作者 曾继涛 涂小林 刘宏 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期384-391,共8页

目的探讨TGF-βⅡ型受体(transforming growth factor beta receptorⅡ,TGFBR2)的小分子抑制剂ITD-1对小鼠骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)成骨分化和血管形成的影响。方法将C57/BL6小鼠BMSCs分为3组:不经药物处理为空白... 目的探讨TGF-βⅡ型受体(transforming growth factor beta receptorⅡ,TGFBR2)的小分子抑制剂ITD-1对小鼠骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)成骨分化和血管形成的影响。方法将C57/BL6小鼠BMSCs分为3组:不经药物处理为空白组;1‰DMSO处理为DMSO组;10μmol/L ITD-1处理为ITD-1组。采用CCK-8检测细胞增殖变化;流式细胞仪检测凋亡细胞比例;实时荧光定量PCR(qPCR)测定成骨标志物碱性磷酸酶(ALP)、ostrix(OSX)、Ⅰ型胶原(collagen1,COL1)和骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)及成血管相关标志物血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、血管生成素1(angiopoietin1,ANGPT1)mRNA的表达;碱性磷酸酶染色检测ALP表达情况;茜素红染色检测成骨晚期矿化水平;免疫荧光染色检测成骨标志物OPN及成血管标志物VEGF的表达;小鼠组织培养实验检测体外培养小鼠肱骨骨密度。结果碱性磷酸酶染色显示ITD-1组染色变浅,茜素红染色结果提示ITD-1组钙盐结节显著减少;与DMSO组比较,ITD-1组BMSCs增殖水平显著降低;流式细胞仪检测显示10μmol/L的ITD-1不导致细胞凋亡;与DMSO组比较,ITD-1组成骨标志物ALP、OSX、COL1及OCN的mRNA相对表达量均显著降低(P<0.01),但成血管标志物VEGF和ANGPT1的mRNA相对表达量显著升高(P<0.05),OPN表达降低而VEGF表达升高(P<0.05),肱骨骨密度也显著降低(P<0.05)。结论TGFBR2的小分子抑制剂ITD-1可抑制骨髓基质细胞增殖,在不影响细胞凋亡的情况下对成骨分化具有显著抑制作用,但显著增强血管形成。 展开更多

关键词 骨髓基质细胞 转化生长因子&beta Ⅱ型受体 成骨分化 血管生成 小分子抑制剂

下载PDF 职称材料

储存环中有效鉴别衰变事件的方法及在^(94m)Ru^(44+)寿命测量中的应用

4

作者 彭婷微 曾奇 +9 位作者 王猛 张玉虎 涂小林 付超义 李宏福 孙铭泽 邢元明 颜鑫亮 赵剑锟 周旭 《原子核物理评论》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期276-281,共6页

兰州重离子加速器冷却储存环上的等时性质量谱仪是开展高电荷态、短寿命同核异能态衰变研究的理想装置。在短寿命高电荷态离子^(94m)Ru^(44+)的寿命测量实验中,我们直接观测到了^(94)Ru的8^(+)态isomer衰变到基态的过程。在观测时间窗口... 兰州重离子加速器冷却储存环上的等时性质量谱仪是开展高电荷态、短寿命同核异能态衰变研究的理想装置。在短寿命高电荷态离子^(94m)Ru^(44+)的寿命测量实验中,我们直接观测到了^(94)Ru的8^(+)态isomer衰变到基态的过程。在观测时间窗口(20μs,180μs)范围内,鉴别出了49个衰变事件。为了能够鉴别出更多的衰变事件,研究了一种基于频谱幅度来指认衰变事件的方法。基于模拟结果,该方法可以有效鉴别(15μs,185μs)内的衰变事件。将新的鉴别方法应用到实验数据处理中,在(15μs,185μs)内,鉴别出了54个衰变事件。基于这54个衰变事件,计算得到^(94m)Ru^(44+)在实验室坐标系下的寿命为194(121)μs。新的寿命结果与之前的结果218(148)μs在误差范围内一致。 展开更多

关键词 兰州重离子加速器冷却储存环 等时性质量谱仪 全剥离离子 ^(94m)Ru 寿命测量

原文传递

FSHβ在BMP9诱导间充质干细胞成骨分化中的作用研究 被引量：3

5

作者 成亚琳 曾继涛 +3 位作者 黄敏 刘俊银 涂小林 刘宏 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期775-782,共8页

目的探讨卵泡刺激素β亚基(follicle-stimulating hormoneβ-subunit,FSHβ)在骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成骨分化中的作用及可能的机制。方法利用细胞化学染... 目的探讨卵泡刺激素β亚基(follicle-stimulating hormoneβ-subunit,FSHβ)在骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成骨分化中的作用及可能的机制。方法利用细胞化学染色方法检测处理因素(重组腺病毒或γ促分泌酶抑制剂DAPT)作用于间充质干细胞5 d后细胞中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色的变化。通过实时定量PCR(quantitative real-time PCR,Q-PCR)检测BMP9 mRNA、FSHβmRNA和Notch信号通路靶基因(Hey1) mRNA的表达水平。利用茜素红S(alizarin red S,ARS)染色检测腺病毒感染间充质干细胞21 d后细胞中钙盐的沉积情况。结果 FSHβ处理组ALP表达较GFP对照组无明显改变,BMP9处理组ALP表达较GFP对照组明显增加,而BMP9与FSHβ联合处理组ALP表达较BMP9处理组显著增加。另外,BMP9处理组晚期成骨标志物钙盐结节、Notch信号靶基因Hey1 mRNA表达水平较GFP对照组显著增加(P<0.01),而BMP9与FSHβ联合处理组较BMP9处理组表达显著增加(P<0.01)。使用药物DAPT抑制Notch信号后,BMP9与DAPT联合处理组较BMP9单独处理组,ALP染色、Hey1 mRNA表达显著降低(P<0.05);且BMP9+FSHβ+DAPT联合处理组较BMP9+FSHβ联合处理组ALP染色、Hey1 mRNA表达也显著降低(P<0.05)。结论 FSHβ可增强BMP9诱导的间充质干细胞成骨分化,Notch信号通路可能在其中发挥重要作用。 展开更多

关键词 骨形态蛋白9 卵泡刺激素 间充质干细胞 NOTCH DAPT

下载PDF 职称材料

激活BMP信号的骨细胞对骨髓基质细胞成骨及成脂分化的作用研究 被引量：1

6

作者 赵怡心 曾继涛 +1 位作者 涂小林 刘宏 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期694-698,708,共6页

目的激活骨细胞系MLO-Y4细胞中BMP信号检测培养上清对骨髓基质细胞系ST2成骨、成脂分化的影响,进一步探讨其机制。方法0.5‰DMSO,0.5μmol/L BMP激动剂FK506分别处理MLO-Y424 h后,使用CCK-8检测细胞活力变化,实时荧光定量PCR检测BMP下... 目的激活骨细胞系MLO-Y4细胞中BMP信号检测培养上清对骨髓基质细胞系ST2成骨、成脂分化的影响,进一步探讨其机制。方法0.5‰DMSO,0.5μmol/L BMP激动剂FK506分别处理MLO-Y424 h后,使用CCK-8检测细胞活力变化,实时荧光定量PCR检测BMP下游靶基因ID1及ID2 mRNA表达变化;用20%MLO-Y4培养上清与80%新鲜培养基混合后培养ST2细胞,分为DMSO组、FK506组。碱性磷酸酶染色代表其成骨分化能力,通过实时荧光定量PCR检测碱性磷酸酶(ALP)、骨钙蛋白(OCN)、骨唾液酸蛋白(BSP)、Runx2等成骨细胞标志基因,过氧化物酶体增殖剂激活受体γ(PPARγ)和C/EBP成脂分化标志基因。免疫印迹试验(Western blotting)检测ST2细胞内Wnt信号下游β-catenin、BMP信号下游p-smad5蛋白表达水平。结果与DMSO作用的MLO-Y4细胞相比,FK506激动的MLOY4细胞内BMP信号靶基因ID1、ID2上调,但不影响细胞活力。FK506组ST2细胞同DMSO组对比,成骨分化相关标志物,包括ALP、OCN、BSP、Runx2(P<0.001)均显著升高;成脂分化标志物PPARγ及C/EBP表达则显著降低(P<0.001);ST2细胞内β-catenin蛋白表达量上调(P<0.05)。结论BMP信号激动后MLO-Y4细胞上清可以促进ST2细胞成骨分化、抑制成脂分化,其成骨能力增强与细胞内Wnt信号增强有关。 展开更多

关键词 骨形态发生蛋白 成骨分化 WNT 成脂分化

下载PDF 职称材料

缺中子核素101In低位同核异能态的首次观测

7

作者 刘君豪 张玉虎 +20 位作者 邢元明 徐星 帅鹏 王猛 涂小林 张鹏 曾奇 陈瑞九 陈相成 付超义 李宏福 孙铭泽 颜鑫亮 高丙水 杨建成 原有进 Yu.A.Litvinov K.Blaum S.Naimi 周小红 徐瑚珊 《原子核物理评论》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期439-444,共6页

在兰州重离子加速器冷却储存环(HIRFL-CSR)上,用初级束流112Sn35+轰击了靶厚约10 mm的Be靶,产生了101In的基态和低位同核异能态。这些实验产生的碎片每25 s经过放射性束流线RIBLL2的筛选后注入到实验环CSRe中,利用飞行时间探测器测量离... 在兰州重离子加速器冷却储存环(HIRFL-CSR)上,用初级束流112Sn35+轰击了靶厚约10 mm的Be靶,产生了101In的基态和低位同核异能态。这些实验产生的碎片每25 s经过放射性束流线RIBLL2的筛选后注入到实验环CSRe中,利用飞行时间探测器测量离子在CSRe中的回旋周期。在此次实验中,磁场晃动会导致离子在环内的循环周期发生改变,传统的离子鉴别方法难以完成大部分离子的鉴别。通过发展和运用单次注入离子鉴别这一新的离子鉴别方法,有效地消除了磁场晃动对于离子鉴别的影响,并清楚地将101In基态和低位同核异能态鉴别出来,从而首次在实验中观测到101In的低位同核异能态。实验得到的激发能与理论外推值在112 keV的误差范围内一致,其低位同核异能态的寿命大于200μs。 展开更多

关键词 HIRFL-CSR 等时性质量谱仪 单次注入离子鉴别 原子核质量测量

原文传递

放射性核素寿命计算方法的模拟研究

8

作者 曾奇 王宁 +16 位作者 王猛 张玉虎 涂小林 徐星 陈瑞九 陈相成 付超义 刘君豪 李宏福 司敏 帅鹏 孙铭泽 邢元明 颜鑫亮 赵剑锟 周旭 周小红 《原子核物理评论》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期611-616,共6页

根据几种常用放射性核素的寿命计算方法,通过模拟数据研究了直接拟合法、对数时间法、极大似然法、观测时间受限时的极大似然法等四种寿命计算方法的适用范围。当观测时间不受限时,研究了在不同计数下寿命计算方法的适用范围。当观测时... 根据几种常用放射性核素的寿命计算方法,通过模拟数据研究了直接拟合法、对数时间法、极大似然法、观测时间受限时的极大似然法等四种寿命计算方法的适用范围。当观测时间不受限时,研究了在不同计数下寿命计算方法的适用范围。当观测时间受限时,研究了在不同观测时间窗口下寿命计算方法的适用范围。模拟中选用全剥离离子^(94m)Ru^(44+)作为目标核素,得到了不同计数及不同观测时间窗口下的寿命及其误差,并给出了四种方法的适用范围。^(94m)Ru^(44+)寿命的模拟结果与在兰州等时性质量谱仪上获得的实验结果在一倍标准偏差范围内一致,从而进一步验证了寿命计算方法的适用范围及模拟数据的可靠性。该模拟结果可为寿命测量实验设计提供理论依据和参考。 展开更多

关键词 兰州重离子加速器冷却储存环 等时性质量谱仪 全剥离离子 寿命模拟 94mRu

原文传递

全反式维甲酸与VEGF联合应用诱导小鼠胚胎成纤维细胞定向成骨分化 被引量：5

9

作者 冯玮 涂小林 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期246-255,共10页

目的研究全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)与VEGF联合应用对于小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)定向成骨分化的影响。方法取NIH孕鼠(孕12~15 d)子宫内的胎鼠,去掉头、心、肝等器官后,采用胰蛋白酶消化... 目的研究全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)与VEGF联合应用对于小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)定向成骨分化的影响。方法取NIH孕鼠(孕12~15 d)子宫内的胎鼠,去掉头、心、肝等器官后,采用胰蛋白酶消化贴壁法分离培养MEFs。利用HEK-293细胞采用反复冻融法扩增重组腺病毒红色荧光蛋白(recombinant adenovirus-red fluorescent protein,Ad-RFP)及Ad-VEGF。采用ALP染色和ALP定量检测法检测单独ATRA或VEGF以及ATRA和VEGF联合应用培养MEFs第3、5天ALP活性变化。将第3~4代MEFs分为A、B、C、D 4组,分别加入DMSO+Ad-RFP、ATRA、Ad-VEGF、ATRA+Ad-VEGF。实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)检测第3、7天成骨相关标志物ALP、Ⅰ型胶原、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨钙素(osteocalcin,OCN)及成血管相关标志物VEGF、血管生成素1(angiopoietin 1,ANGPT1)、内皮黏蛋白(endomucin,EMCN)mRNA表达;免疫组织化学染色检测各组第3、5、7天OPN、VEGF蛋白表达;茜素红染色检测各组成骨诱导14、21 d钙盐沉积水平。取15只4~6周龄无胸腺雌性裸鼠,随机分为3组,每组5只,分别于背侧与腹侧皮下注射经ATRA、Ad-VEGF、ATRA+Ad-VEGF处理后的MEFs。植入后5周行X线片观察、大体观察及组织学染色(Masson、HE及番红O-固绿染色),观察各组裸鼠体内异位成骨情况。结果成功分离培养MEFs;扩增后的Ad-RFP及Ad-VEGF成功转染MEFs,转染效率约为50%和20%。ALP活性检测示,单独使用ATRA或VEGF均能增强MEFs中ALP活性,且ATRA作用较VEGF强;ATRA和VEGF联合使用较单独使用显著增强了MEFs中ALP活性(P<0.05)。qRT-PCR检测示,ATRA联合Ad-VEGF使用上调了早期成骨分化相关标志物ALP、OPN、Ⅰ型胶原mRNA相对表达量(P<0.05);7 d时成血管相关标志物VEGF、EMCN及ANGPT1 mRNA相对表达量有所上升(P<0.05)。免疫组织化学染色示,ATRA联合Ad-VEGF不仅增强了OPN蛋白表达,VEGF蛋白表达在第7天也有所� 展开更多

关键词 全反式维甲酸 VEGF 小鼠胚胎成纤维细胞 成骨分化 成血管

原文传递

Smad4促进成骨分化的机制研究 被引量：5

10

作者 刘俊银 冯玮 涂小林 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期600-605,655,共7页

目的探讨Smad4基因促进成骨分化的作用机制。方法采用条件性基因敲除技术Cre/loxp,制备骨细胞特异性敲除Smad4小鼠(Smad4^(ot)cko),小鼠胚胎骨骼透明染色分析胚胎期小鼠长骨生长状况;待小鼠成长至1月龄,X-ray检测突变小鼠与对照组小鼠... 目的探讨Smad4基因促进成骨分化的作用机制。方法采用条件性基因敲除技术Cre/loxp,制备骨细胞特异性敲除Smad4小鼠(Smad4^(ot)cko),小鼠胚胎骨骼透明染色分析胚胎期小鼠长骨生长状况;待小鼠成长至1月龄,X-ray检测突变小鼠与对照组小鼠的骨密度差异;静态骨组织形态学分析检测突变鼠及对照鼠的骨量变化、成骨细胞数量变化等差异;实时荧光定量PCR检测Smad4突变鼠股骨成骨细胞相关因子Runx2、ALP、OSX及OCN;qPCR检测突变鼠股骨破骨吸收标志基因RANKL、OPG,并计算RANKL/OPG比率。结果 Smad4基因敲除小鼠在胚胎期未出现骨生长异常。X线结果显示,1月龄时,与对照组小鼠相比,Smad4突变鼠的骨密度降低(P<0.05),静态骨组织形态学分析表明突变鼠松质骨减少,皮质骨变薄,骨小梁数量减少(P<0.05);Smad4突变鼠成骨细胞标志基因表达量显著降低,成骨细胞的数量明显减少(P<0.05);RANKL作为破骨吸收标志物表达上调、作为其拮抗剂的OPG表达量下调,RANKL/OPG比率增高(P<0.05)。结论 Smad4基因通过促进成骨分化维持骨稳态。 展开更多

关键词 骨细胞 SMAD4 成骨分化 骨稳态

下载PDF 职称材料

骨再生修复中的骨形态发生蛋白信号通路:精准调节与治疗靶点 被引量：4

11

作者 刘俊银 冯玮 +4 位作者 谢映春 李豫皖 曾继涛 刘子铭 涂小林 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第4期606-612,共7页

背景:骨的修复再生是治疗骨类疾病的难点,骨形态发生蛋白具有强大的调控骨量的功能,是调控骨稳态及骨再生的重要蛋白分子。目的:对骨形态发生蛋白信号通路在骨再生修复中的研究进展进行综述。方法:以"骨形态发生蛋白,Smad分子,组... 背景:骨的修复再生是治疗骨类疾病的难点,骨形态发生蛋白具有强大的调控骨量的功能,是调控骨稳态及骨再生的重要蛋白分子。目的:对骨形态发生蛋白信号通路在骨再生修复中的研究进展进行综述。方法:以"骨形态发生蛋白,Smad分子,组织工程,骨缺损,骨修复,骨类疾病,研究进展,bone morphogenetic protein,Smads,Tissue engineering,Bone defect,bone repair,bone disease,Progress in research"为关键词,检索CNKI、PubMed、Elsevier ScienceDirect、Web of Science等数据库1990至2018年发表的与骨形态发生蛋白信号通路及骨再生修复中相关的文献,将所有文章进行初筛后,对保留的文献进一步的归纳和总结分析。结果与讨论:骨形态发生蛋白分子在长骨、软骨、关节以及肌腱的生长发育中均发挥着重要的作用,骨形态发生蛋白2、7已投入临床上应用,用来治疗骨折不愈合、延迟愈合骨不连以及脊柱融合手术等,但骨形态发生蛋白对于骨再生修复中的强大的调控功能仍然值得进行更深一步的研究。骨形态发生蛋白及其相关分子在促进骨再生中取得了巨大进展,实现对骨形态发生蛋白信号的精准调节可能成为治疗骨类疾病的潜在治疗靶点。 展开更多

关键词 骨形态发生蛋白质类 信号传导 组织工程 骨缺损 骨修复 骨稳态 软骨再生 骨形态发生蛋白 BMP 骨不连 骨迟连

下载PDF 职称材料

过表达Notch配体Delta-like基因的MLO-Y4骨细胞株的建立及其对骨髓基质细胞成骨分化的作用 被引量：4

12

作者 冯玮 谢正松 +1 位作者 罗岑 涂小林 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期899-907,共9页

目的建立稳定表达外源Dll1、Dll3、Dll4基因的MLO-Y4骨细胞株,研究骨细胞Notch信号Delta-like配体Dll1、Dll3、Dll4对骨髓基质细胞成骨分化的影响。方法用过表达Dll1、Dll3、Dll4基因的重组慢病毒液感染MLO-Y4样骨细胞,嘌呤霉素筛选分... 目的建立稳定表达外源Dll1、Dll3、Dll4基因的MLO-Y4骨细胞株,研究骨细胞Notch信号Delta-like配体Dll1、Dll3、Dll4对骨髓基质细胞成骨分化的影响。方法用过表达Dll1、Dll3、Dll4基因的重组慢病毒液感染MLO-Y4样骨细胞,嘌呤霉素筛选分别稳定表达Dll1、Dll3及Dll4基因的MLO-Y4骨细胞株。采用实时荧光定量PCR(real time fluorescence quantitative,qPCR)对筛选出来的MLO-Y4骨细胞株中Dll1、Dll3及Dll4基因的表达进行鉴定。将3种细胞株分别与野生型小鼠骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)进行共培养,采用碱性磷酸酶(ALP)染色及ALP定量检测共培养3 d ALP活性变化;qPCR检测共培养3 d成骨相关标志基因及Notch信号靶基因的表达水平,在使用Notch信号抑制剂DAPT后检测上述指标。结果与阴性对照组相比,Dll1、Dll3及Dll4转染组中Dll1、Dll3及Dll4 mRNA的水平显著增加(P<0.05)。共培养3 d后,骨细胞中Dll4基因的过表达促进了BMSC的ALP活性,与阴性对照组相比有统计学差异(P<0.05)。qPCR结果显示,MLO-Y4-Dll4组的ALP、Runx2、OPN及CollagenⅠ成骨相关标志基因的表达均有所升高(P<0.05),Notch信号靶基因Hey1、HeyL、Hes1及Hes7的表达也有所升高(P<0.05)。而在加入DAPT后,MLO-Y4-Dll4组的ALP活性下降,成骨相关标志基因及Notch信号靶基因的表达有所下降(P<0.05)。结论建立了稳定表达外源Dll1、Dll3或Dll4基因的MLO-Y4骨细胞株,在骨细胞中过表达Dll4能促进骨髓基质细胞的早期成骨分化,经典Notch信号通路在其中可能发挥了重要作用。 展开更多

关键词 慢病毒 Delta-like基因 过表达 小鼠骨样细胞 骨髓基质细胞 成骨分化 DAPT

下载PDF 职称材料

体外激活骨细胞Notch信号对骨髓基质细胞成骨分化的影响 被引量：3

13

作者 谢映春 涂小林 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期891-898,共8页

目的探究体外激活骨细胞Notch信号对骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)成骨分化的影响。方法设置Cre重组腺病毒(Ad-Cre)及对照腺病毒GFP(Ad-GFP),分别转染RosaNotch小鼠骨细胞后与野生C57BL/6小鼠BMSCs共培养为Ad-Cre组及A... 目的探究体外激活骨细胞Notch信号对骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)成骨分化的影响。方法设置Cre重组腺病毒(Ad-Cre)及对照腺病毒GFP(Ad-GFP),分别转染RosaNotch小鼠骨细胞后与野生C57BL/6小鼠BMSCs共培养为Ad-Cre组及Ad-GFP组,设置仅BMSCs为Blank组。碱性磷酸酶染色及生化定量测定碱性磷酸酶(ALP);qPCR检测转染后骨细胞Notch信号靶基因及共培养产物成骨相关标志物、Notch信号配体及成血管相关标志物,茜素红染色检测成骨诱导21 d钙盐沉积水平。结果Ad-Cre成功激活RosaNotch小鼠骨细胞Notch信号,ALP染色及生化定量结果显示Ad-Cre组ALP表达相较Ad-GFP组及Blank组显著降低(P<0.05),Ad-GFP组与Blank组间无统计学差异;qPCR结果显示Ad-Cre组共培养产物成骨标志物ALP、核心结合因子a1(Runx2)、特异性骨转化因子(Ostrix)及Notch配体Dll4 mRNA转录水平相较Ad-GFP组及Blank组显著降低(P<0.05),Jag1 mRNA转录水平显著降低(P<0.05);血管内皮生长因子(VEGF)、低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor 1α,HIF1α)、血小板内皮细胞黏附分子(platelet endothelial cell adhesion molecule-1,CD31/PECAM-1)及内皮粘蛋白(endomucin,EMCN)mRNA转录水平相较Ad-GFP组及Blank组显著增高(P<0.05);茜素红染色结果显示Ad-Cre组在成骨诱导培养基作用21 d后钙盐沉积水平相较Ad-GFP组及Blank组显著降低。结论体外激活骨细胞Notch信号抑制骨髓基质细胞成骨分化。 展开更多

关键词 骨细胞 NOTCH信号 骨髓基质细胞 成骨分化

下载PDF 职称材料

铁过载对Wnt信号诱导的ST2细胞成骨分化的作用及机制 被引量：2

14

作者 罗岑 武异洵 +1 位作者 刘忻钰 涂小林 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2021年第5期932-938,共7页

该研究探究铁过载对Wnt信号诱导的小鼠骨髓基质细胞(ST2)成骨分化的作用及其可能的机制。采用柠檬酸铁铵(FAC)模拟铁过载微环境,用碱性磷酸酶(ALP)染色及生化定量检测成骨分化水平,qRT-PCR检测成骨分化标志基因Alp、Runx2、Osx、Col1以... 该研究探究铁过载对Wnt信号诱导的小鼠骨髓基质细胞(ST2)成骨分化的作用及其可能的机制。采用柠檬酸铁铵(FAC)模拟铁过载微环境,用碱性磷酸酶(ALP)染色及生化定量检测成骨分化水平,qRT-PCR检测成骨分化标志基因Alp、Runx2、Osx、Col1以及Wnt信号靶基因Smad6、CyclinD1、Lef1、BMP4的mRNA表达水平,免疫荧光法检测β-catenin入核情况。结果显示,铁过载剂量依赖性抑制Wnt信号诱导的ST2成骨分化,同时显著降低Wnt信号诱导的成骨分化标志基因及Wnt信号靶基因的表达(P<0.05),且铁过载抑制Wnt信号诱导的β-catenin入核。综上所述,铁过载抑制Wnt信号诱导的ST2细胞成骨基因和Wnt靶基因的表达,并通过抑制β-catenin入核而抑制ST2细胞成骨分化。 展开更多

关键词 铁过载 WNT信号 成骨分化

原文传递

激活骨髓基质细胞Notch信号体外促进小鼠成骨作用 被引量：1

15

作者 刘忻钰 罗岑 涂小林 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期1097-1103,共7页

目的探究体外激活骨髓基质细胞(BMSC)缺刻基因(Notch)信号对成骨分化的影响。方法使用Cre重组腺病毒(Ad-Cre)以及对照腺病毒(Ad-GFP),分别感染Notch1-NICD^(flox/flox)小鼠BMSC,分为Ad-Cre组和Ad-GFP组。Western blot法检测Notch1-NICD... 目的探究体外激活骨髓基质细胞(BMSC)缺刻基因(Notch)信号对成骨分化的影响。方法使用Cre重组腺病毒(Ad-Cre)以及对照腺病毒(Ad-GFP),分别感染Notch1-NICD^(flox/flox)小鼠BMSC,分为Ad-Cre组和Ad-GFP组。Western blot法检测Notch1-NICD蛋白表达水平;碱性磷酸酶(ALP)染色及生化定量检测早期成骨分化水平,茜素红S染色及矿化定量检测晚期钙盐沉积水平;实时荧光定量PCR检测Notch靶基因发状分裂增强子1(Hes1)、含YRPW基序的bHLH转录因子Hes相关家族1(Hey1)、Hey2、HeyL、成骨标志基因ALP、Runt相关转录因子2(RUNX2)、骨转化因子(Osx)、骨钙素(Ocn)以及促血管生成因子血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达。结果Ad-Cre成功激活Notch1-NICD^(flox/flox)小鼠BMSC中的Notch信号;Ad-Cre组的ALP活性相较Ad-GFP组明显升高,晚期钙盐沉积水平明显升高;ALP、RUNX2、Osx、Ocn和VEGF、HIF-1α的表达显著增加。结论体外激活小鼠BMSC的Notch信号显著促进成骨分化。 展开更多

关键词 骨髓基质细胞(BMSC) NOTCH信号 成骨分化

下载PDF 职称材料

Notch信号介导骨细胞过表达BMP4促进骨髓基质细胞成骨分化 被引量：1

16

作者 谢正松 赵怡心 +2 位作者 吕子灵 刘宏 涂小林 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第16期1550-1558,共9页

目的探究骨细胞MLO-Y4过表达骨形态发生蛋白4(bone morphogenetic protein-4,BMP4)通过Notch信号对骨髓基质细胞ST2成骨分化的影响。方法使用BMP4重组腺病毒(Ad-BMP4)以及阴性对照(Ad-GFP)分别感染MLO-Y4后与ST2共培养,分为GFP组及BMP4... 目的探究骨细胞MLO-Y4过表达骨形态发生蛋白4(bone morphogenetic protein-4,BMP4)通过Notch信号对骨髓基质细胞ST2成骨分化的影响。方法使用BMP4重组腺病毒(Ad-BMP4)以及阴性对照(Ad-GFP)分别感染MLO-Y4后与ST2共培养,分为GFP组及BMP4组;Western blot检测MLO-Y4细胞BMP4蛋白表达;采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测MLO-Y4的BMP4和Notch配体基因、共培养体系中成骨标志基因、Notch靶基因以及促血管生成因子表达;碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色及生化定量检测ALP活性;在共培养体系中加入Notch信号抑制剂DAPT后,再次检测上述指标。结果MLO-Y4过表达BMP4,上调Notch配体Jag1、Jag2、Dll4表达;ALP染色以及生化定量结果显示共培养第1天GFP组和BMP4组ALP活性差异无统计学意义,在第3、5天,BMP4组ALP活性更高(P<0.05);BMP4组成骨标志基因在第1天仅Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)显著升高(P<0.05),第3、5天BMP4组Alp、Runx2、骨钙蛋白(osteocalcin,Ocn)、Ⅰ型胶原(collagenⅠ)均显著增高(P<0.05);第3天BMP4组Notch信号靶基因Hey1、Hey2,血管内皮生长因子(vascular endothlial growth factor,VEGF)、低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor 1α,HIF1α)的表达也显著增高(P<0.05);加入DPAT抑制Notch信号后,BMP4组ALP活性、成骨标志基因以及促血管生成因子表达均显著下降(P<0.05)。结论MLO-Y4过表达BMP4可以促进ST2成骨分化,该过程可能与Notch信号增强有关。 展开更多

关键词 骨细胞 骨形态发生蛋白4 骨髓基质细胞 成骨分化 NOTCH信号

下载PDF 职称材料

MLO-Y4来源外泌体对破骨细胞调控机制的研究

17

作者 赵丽洲 勾蓉 +1 位作者 王晨 涂小林 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期1255-1260,共6页

目的探讨骨细胞系MLO-Y4来源的外泌体对破骨细胞的调控机制。方法收集MLO-Y4细胞的培养基,通过超高速离心法获得MLO-Y4细胞外泌体(MLO-Y4-Exo),Western blot和透射电镜鉴定其特征;MLO-Y4-Exo与骨髓巨噬细胞共培养,TRAP染色检测其对破骨... 目的探讨骨细胞系MLO-Y4来源的外泌体对破骨细胞的调控机制。方法收集MLO-Y4细胞的培养基,通过超高速离心法获得MLO-Y4细胞外泌体(MLO-Y4-Exo),Western blot和透射电镜鉴定其特征;MLO-Y4-Exo与骨髓巨噬细胞共培养,TRAP染色检测其对破骨细胞分化的作用;小鼠顶骨皮下注射MLO-Y4-Exo检测其对体内破骨细胞分化的影响;通过小干扰RNA检测MLO-Y4-Exo对促破骨分化的机制。结果MLO-Y4外泌体大小形态满足外泌体特征,高表达CD63和Alix外泌体蛋白;MLO-Y4-Exo在体外和体内均促进破骨细胞分化(P<0.05);RANKL小干扰RNA实验证实MLO-Y4-Exo通过向破骨前体细胞传递RANKL蛋白促进破骨细胞分化(P<0.05)。结论骨细胞系MLO-Y4来源的外泌体通过向破骨前体细胞传递促破骨分化因子RANKL促进破骨细胞生成。 展开更多

关键词 MLOY-4 外泌体 破骨细胞 RANKL

下载PDF 职称材料

孕期母体高糖饮食对成年子代肠系膜动脉功能的影响

18

作者 李大为 屠清 +5 位作者 朱晓琳 仲元 竺迪 伯乐 徐智策 茅彩萍 《中华围产医学杂志》 CAS CSCD 2016年第11期861-866,共6页

目的 研究孕期母体高糖饮食对成年子代鼠肠系膜小动脉功能的影响。方法 将40只妊娠Sprague-Dawley大鼠随机分为高糖组和对照组，每组20只。高糖组孕期每日给予20%蔗糖溶液和标准饲料，对照组孕期每日给予普通饮用水和标准饲料。检测孕... 目的 研究孕期母体高糖饮食对成年子代鼠肠系膜小动脉功能的影响。方法 将40只妊娠Sprague-Dawley大鼠随机分为高糖组和对照组，每组20只。高糖组孕期每日给予20%蔗糖溶液和标准饲料，对照组孕期每日给予普通饮用水和标准饲料。检测孕鼠血糖（孕21 d）、子代大鼠出生体重及5月龄体重。分离成年子代大鼠肠系膜小动脉，利用微血管功能检测系统测定其对血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ，Ang Ⅱ）的反应，观察左旋硝基精氨酸甲酯（L-nitro-arginine methylester，L-NAME）及氯沙坦对AngⅡ介导的离体血管收缩反应的影响。采用蛋白质印迹法测定成年子代鼠肠系膜小动脉组织中血管紧张素Ⅱ的1型受体（angiotensin Ⅱ receptor type 1，AT1R）和内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）的蛋白表达。采用t检验、多因素方差分析和Bonferroni post-hoc等检验方法进行统计学分析。结果 高糖组孕鼠空腹血糖[（8.91±0.21）与（7.78±0.18）mmol/L，t=4.094]、胎鼠出生体重[（4.47±0.10）与（4.19±0.05）g，t=2.372]和成年子代体重均高于对照组[（549.6±8.3）与（517.1±7.6）g，t=2.875]（P值均〈0.05）。高糖组AngⅡ介导的肠系膜小动脉收缩效应强于对照组（P值均〈0.05）。对照组中，L-NAME可增强由AngⅡ介导的肠系膜小动脉的收缩强度（P值均〈0.05），高糖组的收缩强度差异无统计学意义。氯沙坦均能抑制2组AngⅡ引起的收缩。与单独应用AngⅡ所诱发的收缩效应相比，高糖组应用氯沙坦后由AngⅡ引起的收缩效应下降幅度更明显。高糖组中肠系膜小动脉组织中eNOS蛋白表达低于对照组（0.34±0.03与0.56±0.07，t=2.826），AT1R蛋白表达水平高于对照组（1.05±0.12与0.51±0.53，t=4.111），P值均〈0.05。结论 孕期母体高糖饮食可致成年子代肠系膜小动脉肾素-血管紧张素系统介导的血管舒缩功能发生一� 展开更多

关键词 妊娠 膳食蔗糖 肠系膜动脉 血管紧张素Ⅱ 血管舒缩系统 大鼠 Sprague—Dawley

原文传递