目的 基于Wnt/β-catenin信号通路探讨5-氟尿嘧啶(5-FU)对结直肠癌干细胞(CRC-CSC)活性的影响。方法 流式细胞术分选CD133标记的CRC-CSC,以不同浓度5-FU(6.25、12.50、25.00μmol/L)处理细胞,对照组以等体积培养液处理。药物作用48 h后,...目的 基于Wnt/β-catenin信号通路探讨5-氟尿嘧啶(5-FU)对结直肠癌干细胞(CRC-CSC)活性的影响。方法 流式细胞术分选CD133标记的CRC-CSC,以不同浓度5-FU(6.25、12.50、25.00μmol/L)处理细胞,对照组以等体积培养液处理。药物作用48 h后,CCK-8法检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,流式细胞术检测细胞凋亡,平板克隆实验和球形成实验检测细胞克隆能力及悬浮球形成能力,蛋白免疫印迹法检测Wnt/β-catenin信号通路表达。结果 与对照组比较,高剂量5-FU处理后CRC-CSC细胞增殖能力(24 h、48 h两组分别为0.31±0.03vs. 0.53±0.05;0.37±0.03 vs. 0.61±0.05)和迁移能力(24 h、48 h两组分别为9.63±0.72 vs. 38.69±0.88;16.21±1.17 vs.58.69±1.32)显著增加(P<0.05),细胞凋亡率(24 h、48 h两组分别为46.91±0.94 vs. 18.46±0.88;55.22±1.24 vs. 28.42±1.18)显著降低(P<0.05);48 h时高剂量5-FU组细胞克隆数(50.32±10.15 vs. 102.62±11.36)和悬浮球形成数(29.15±8.42 vs. 96.87±9.33)显著增加(P<0.05),Cyclin D1(0.17±0.03 vs. 0.95±0.02)、C-Myc(0.27±0.03 vs. 1.15±0.12)和β-catenin(0.46±0.03 vs. 0.85±0.02)蛋白相对表达量显著升高,且呈浓度依赖性(P<0.05)。结论 5-FU可通过靶向激活Wnt/β-catenin信号通路,诱导CRC-CSC细胞活化,提高其克隆和悬浮球形成能力,从而促进肿瘤的复发和转移。展开更多
采用标准化的眼刺激性测试替代方法牛角膜浑浊和渗透性实验(bovine corneal opacity and permeability,BCOP)用于化学品和个人护理产品的分类标识、危害识别、市场监督管理和产品评价;同时通过增加测试参数、改变暴露时间等方式建立特...采用标准化的眼刺激性测试替代方法牛角膜浑浊和渗透性实验(bovine corneal opacity and permeability,BCOP)用于化学品和个人护理产品的分类标识、危害识别、市场监督管理和产品评价;同时通过增加测试参数、改变暴露时间等方式建立特殊方案的BCOP,并将其用于原料筛选和安全浓度的确定、配方优化、特殊人群产品测试和口腔黏膜刺激性的评估。结果表明BCOP方法可以单独使用或者作为整合测试策略的核心方法用于区分刺激性/非刺激性和严重刺激/腐蚀性,采用特殊方案还可以满足产品差异化、温和宣称的需要。展开更多
文摘目的 基于Wnt/β-catenin信号通路探讨5-氟尿嘧啶(5-FU)对结直肠癌干细胞(CRC-CSC)活性的影响。方法 流式细胞术分选CD133标记的CRC-CSC,以不同浓度5-FU(6.25、12.50、25.00μmol/L)处理细胞,对照组以等体积培养液处理。药物作用48 h后,CCK-8法检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,流式细胞术检测细胞凋亡,平板克隆实验和球形成实验检测细胞克隆能力及悬浮球形成能力,蛋白免疫印迹法检测Wnt/β-catenin信号通路表达。结果 与对照组比较,高剂量5-FU处理后CRC-CSC细胞增殖能力(24 h、48 h两组分别为0.31±0.03vs. 0.53±0.05;0.37±0.03 vs. 0.61±0.05)和迁移能力(24 h、48 h两组分别为9.63±0.72 vs. 38.69±0.88;16.21±1.17 vs.58.69±1.32)显著增加(P<0.05),细胞凋亡率(24 h、48 h两组分别为46.91±0.94 vs. 18.46±0.88;55.22±1.24 vs. 28.42±1.18)显著降低(P<0.05);48 h时高剂量5-FU组细胞克隆数(50.32±10.15 vs. 102.62±11.36)和悬浮球形成数(29.15±8.42 vs. 96.87±9.33)显著增加(P<0.05),Cyclin D1(0.17±0.03 vs. 0.95±0.02)、C-Myc(0.27±0.03 vs. 1.15±0.12)和β-catenin(0.46±0.03 vs. 0.85±0.02)蛋白相对表达量显著升高,且呈浓度依赖性(P<0.05)。结论 5-FU可通过靶向激活Wnt/β-catenin信号通路,诱导CRC-CSC细胞活化,提高其克隆和悬浮球形成能力,从而促进肿瘤的复发和转移。
文摘采用标准化的眼刺激性测试替代方法牛角膜浑浊和渗透性实验(bovine corneal opacity and permeability,BCOP)用于化学品和个人护理产品的分类标识、危害识别、市场监督管理和产品评价;同时通过增加测试参数、改变暴露时间等方式建立特殊方案的BCOP,并将其用于原料筛选和安全浓度的确定、配方优化、特殊人群产品测试和口腔黏膜刺激性的评估。结果表明BCOP方法可以单独使用或者作为整合测试策略的核心方法用于区分刺激性/非刺激性和严重刺激/腐蚀性,采用特殊方案还可以满足产品差异化、温和宣称的需要。
