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题名番茄褪绿病毒CP基因克隆、序列分析及原核表达
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作者
韩磊
迟胜起
张剑峰
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机构
青岛农业大学农学与植物保护学院
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出处
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2016年第4期57-62,共6页
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基金
山东现代农业产业技术体系薯类创新团队项目(SDAIT-10-011-06)
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文摘
为制备番茄褪绿病毒（Tomato chlorosis virus,To CV）抗血清,以番茄病叶为试验材料,提取总RNA,根据To CV CP基因设计特异性引物,利用RT-PCR方法克隆目的基因,构建原核表达载体p ET32a-To CVCP,在大肠杆菌Rosetta（DE3）菌株中表达CP蛋白。结果表明：To CV CP基因（Gen Bank登录号：KT809400）全长774 bp,编码257个氨基酸,与Gen Bank中其他地区分离物核苷酸序列同源性为97.2%～99.6%,推导的氨基酸序列同源性为97.3%～100.0%。核苷酸序列保守位点占全部位点的91.3%,氨基酸序列保守位点占全部位点的88.3%,表明不同地理来源的番茄褪绿病毒的CP基因保守性较高。将To CV CP基因克隆到原核表达载体p ET-32a（＋）上,并在体外条件下诱导表达出融合蛋白。SDS-PAGE分析表明,转p ET32a-To CVCP载体的大肠杆菌Rosetta（DE3）菌株表达了分子量约33 k Da的重组蛋白。该重组蛋白在37℃,1.0 mmol/L IPTG、诱导6 h,表达量最大。
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关键词
番茄褪绿病毒
外壳蛋白基因
原核表达
基因克隆
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Keywords
Tomato chlorosis virus
Coat protein gene
Prokaryotic expression
Gene cloning
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分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
S641.03
[农业科学—蔬菜学]
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