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氮依赖型甲烷厌氧氧化菌的整合 被引量：2
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作者 江丽珍 刘江 +3 位作者 向兴 刘仁菊 王锐诚 龚林锋 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1407-1419,共13页
氮依赖型甲烷厌氧氧化菌(nitrite-dependent anaerobic methane oxidation bacteria,n-damo细菌,属于NC10门)是最近10年来微生物生态学领域的研究热点。然而,对该类群基于现有数据的生态分布、群落结构和系统进化的整合分析还未见报道... 氮依赖型甲烷厌氧氧化菌(nitrite-dependent anaerobic methane oxidation bacteria,n-damo细菌,属于NC10门)是最近10年来微生物生态学领域的研究热点。然而,对该类群基于现有数据的生态分布、群落结构和系统进化的整合分析还未见报道。【目的】为了更好地将近年来针对该类群的研究做一次全面梳理,本文通过整合前人已有发表数据和结合自身实验数据两方面进行。【方法】一方面,利用NCBI数据库(数据搜集到2016年11月)中所有n-damo细菌序列对其进行生物信息学分析;另一方面,对大九湖泥炭地表层泥炭利用16S rRNA二代测序技术对该类群进行检测,并同前人数据进行对比。【结果】n-damo细菌主要在沉积物、湿地和水稻土检出;基于pmo A基因的n-damo细菌的平均检出率是基于16S rRNA基因检出率的7倍,但是这两类基因分子标记物所得到的多样性指数保持相对稳定(1.4-3.4);贫氮的大九湖泥炭其NC10的丰度仅为0.067%。【结论】n-damo类群种群相对稳定,暗示其行使的生态功能相对单一;贫氮的大九湖泥炭其极低的NC10丰度暗示氮对NC10是限制因子;具有真正氮依赖型甲烷厌氧氧化细菌的Group A可能只占很少的一部分(小于20%),暗示出该类群真正的生态潜能需要进一步评估。本次整合分析为更好的理解n-damo细菌的生活环境、评估不同基因分子标记物下n-damo细菌的检出率、不同亚类群比如Group A和Group B等的丰度和真正的潜在生态功能提供参考。 展开更多
关键词 氮依赖型甲烷厌氧氧化菌 整合分析 群落结构 系统发育分析
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利用CRISPR/Cas9技术构建微RNA-155基因敲除小鼠模型孙瑞成
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作者 张冬 孙瑞成 +7 位作者 崔永春 王佩合 张宝杰 张会东 张宏 刘晓鹏 罗晓康 唐跃 《中华生物医学工程杂志》 CAS 2016年第6期445-450,共6页
目的 探讨利用CRISPR/Cas9技术构建微RNA-155（miR-155）基因敲除小鼠模型.方法 选择健康C57BL/6J小鼠,首先进行小鼠基因组靶序列的扩增和测序,明确miR-155序列及位点,然后设计并构建Cas9载体质粒（Cas9 RNA）及打靶载体单导向RNA（sgRN... 目的 探讨利用CRISPR/Cas9技术构建微RNA-155（miR-155）基因敲除小鼠模型.方法 选择健康C57BL/6J小鼠,首先进行小鼠基因组靶序列的扩增和测序,明确miR-155序列及位点,然后设计并构建Cas9载体质粒（Cas9 RNA）及打靶载体单导向RNA（sgRNA）,随后将体外转录的Cas9 RNA及sgRNA显微注射入小鼠的受精卵,并将受精卵体外培养.将培养合格的胚胎移植到代孕小鼠的输卵管中,待小鼠生育后得到F0代小鼠.通过对F0代小鼠基因型检测确定基因敲除情况,进而繁育并建立基因敲除小鼠模型.结果 利用CRISPR/Cas9技术构建模型小鼠得到F0代小鼠18只,其中4号小鼠出现DNA单链碱基片段缺失,且基因型可以稳定传代.对其进行繁育后,得到F1代杂合子小鼠3只.杂合子小鼠交配繁育,得到F2代纯合子基因敲除小鼠,电泳及测序结果证实其缺失114 bp碱基序列,成功敲除miR-155基因.miR-155基因敲除小鼠在清洁级动物饲养环境中可以正常繁育.结论 CRISPR/Cas9技术能够快速、有效地构建miR-155基因敲除小鼠模型. 展开更多
关键词 微RNA-155 CRISPR/Cas9 模型 动物 小鼠 基因敲除
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