利用Cas9TX实现非病毒TRAC定点整合制备T细胞

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作者 崔海洋 谭淼 +3 位作者 全壮 陈红利 董艳敏 唐立春 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期190-197,共8页

【目的】Cas9TX是Cas9的变体,能够显著降低基因编辑过程中染色体易位,大幅提升基因编辑的安全性。研究Cas9TX替换Cas9实现基因定点敲入的可行性。【方法】首先,利用His标签蛋白纯化技术制备Cas9TX蛋白,并在细胞水平上通过绘制EC50和核... 【目的】Cas9TX是Cas9的变体,能够显著降低基因编辑过程中染色体易位,大幅提升基因编辑的安全性。研究Cas9TX替换Cas9实现基因定点敲入的可行性。【方法】首先,利用His标签蛋白纯化技术制备Cas9TX蛋白,并在细胞水平上通过绘制EC50和核酸酶裂解动力学曲线等进行功能验证。其次,以RNP和dsDNA混合物电转的方式编辑体外激活的T细胞,流式检测定点敲入的效率。最后,探讨了供体模板进行稳定性修饰提升定点敲入效率的可行性。【结果】制备的Cas9TX在T细胞TRAC基因的A、R和S靶点的敲除效率分别为71.8%、81.0%和79.9%,具有与Cas9相当的基因敲除效率。在TRAC 1号外显子分别设计的dsDNA供体模板(2A-GFP编码序列)和ssDNA供体模板(+GTC bp),发现Cas9TX RNP定点敲入两种模板的效率均显著低于Cas9RNP。通过DNA修饰制备防TREX2核酸外切酶降解的供体模板,不能提升Cas9TXRNP定点敲入的效率。【结论】Cas9TX RNP在TRAC三个靶点的基因敲除方面可以替代Cas9RNP使用,但定点整合外源基因的效率约为Cas9RNP的一半。为Cas9TX应用于基因定点敲入提供了重要参考。 展开更多

关键词 Cas9TX 定点整合 RNP DSDNA CRISPR/Cas9

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新疆伊犁鹅繁殖周期生殖激素变化及卵巢卵泡发育规律的研究 被引量：9

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作者 程元 赵晓钰 +4 位作者 李园园 赵全庄 朱建平 艾山江 李海英 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第11期3264-3269,共6页

为探究新疆伊犁鹅繁殖周期中血浆主要生殖激素、卵巢形态及卵泡发育的变化规律,试验以健康状况良好、体重相近的2岁伊犁鹅为试验对象,分别在产蛋期、就巢期及休产期各随机选取32只,采集1次血样,测定激素水平;在各时期分别选取5只采集卵... 为探究新疆伊犁鹅繁殖周期中血浆主要生殖激素、卵巢形态及卵泡发育的变化规律,试验以健康状况良好、体重相近的2岁伊犁鹅为试验对象,分别在产蛋期、就巢期及休产期各随机选取32只,采集1次血样,测定激素水平;在各时期分别选取5只采集卵巢组织,观测卵巢及卵泡发育情况。结果表明,在产蛋期,伊犁鹅的GnRH分别极显著高于就巢期和休产期16.78%和58.29%(P<0.01);PRL显著低于就巢期13.00%(P<0.05),极显著高于休产期28.94%(P<0.01);FSH高于就巢期6.98%(P>0.05),极显著高于休产期21.12%(P<0.01);LH极显著低于就巢期8.38%(P<0.01),极显著高于休产期16.84%(P<0.01);E2水平分别极显著高于就巢期和休产期29.80%和112.40%(P<0.01);P4水平分别极显著高于就巢期和休产期28.89%和30.34%(P<0.01)。产蛋期伊犁鹅的卵巢体积和重量均极显著大于就巢期和休产期(P<0.01)。产蛋期伊犁鹅成熟卵泡与就巢期和休产期相比明显较大,次级卵泡数量较多,初级卵泡数量较少;就巢期卵巢上生长及成熟卵泡发生闭锁,颗粒胞层收缩,向内凹陷,胞质出现空腔,各级卵泡出现萎缩;与就巢期相比,休产期卵巢上卵泡胞质空腔变大,向内凹陷程度进一步加深,大量原始卵泡均匀排列。由此可见,在产蛋期,伊犁鹅的GnRH、E2、LH反应活跃,对卵巢卵泡发育起主导作用;在就巢期,PRL、LH维持较高的分泌水平,协同维持就巢。 展开更多

关键词 新疆伊犁鹅 繁殖周期 生殖激素 卵泡 发育规律

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TIPE3干扰质粒对SW480结肠癌细胞生长的作用及相关机制探讨 被引量：2

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作者 叶宇涵 刘忠臣 +2 位作者 齐忠权 庄国洪 殷平 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期378-383,共6页

目的:通过TIPE3干扰质粒转染SW480结肠癌细胞,验证干扰TIPE3表达对SW480结肠癌细胞生长的影响并探讨相关机制。方法:构建TIPE3-shRNA-p SIREN-Retro Q干扰质粒,通过脂质体转染法成功将干扰质粒导入SW480细胞,通过RT-PCR、Western blot... 目的:通过TIPE3干扰质粒转染SW480结肠癌细胞,验证干扰TIPE3表达对SW480结肠癌细胞生长的影响并探讨相关机制。方法:构建TIPE3-shRNA-p SIREN-Retro Q干扰质粒,通过脂质体转染法成功将干扰质粒导入SW480细胞,通过RT-PCR、Western blot检测重组质粒的干扰效率。应用CCK-8方法检测SW480细胞生存率。Annexin V-FITC/PI流式细胞法检测细胞凋亡。使用Western blot检测细胞增殖、凋亡相关分子的表达情况。结果:成功设计、构建和筛选具有生物活性且干扰效率最佳的TIPE3-shRNA-p SIREN-Retro Q干扰质粒。CCK-8检测证实干扰SW480结肠癌细胞TIPE3表达可以抑制细胞生长。流式结果显示,TIPE3-shRNA3干扰组的凋亡率为(27.99±1.087)%,显著高于正常细胞组(12.10±2.213)%及转染空载质粒组(11.44±0.277 0)%。证实了降低TIPE3表达可以增加SW480对a DR5Sc Fv所诱导的细胞凋亡敏感性。Western blot结果显示干扰TIPE3表达可以活化caspase3蛋白,降低p-AKT、p-PDK1、PCNA等分子的表达。结论:干扰TIPE3的表达对SW480结肠癌细胞具有促进凋亡,抑制增殖的作用。 展开更多

关键词 TIPE3shRNA 结肠癌 凋亡 增殖

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2018年广西碘缺乏病监测结果分析 被引量：10

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作者 王芬芬 刘军 +3 位作者 廖敏 宁锐军 罗兰英 陆皓泉 《中国地方病防治》 CAS 2019年第5期506-508,共3页

目的了解广西居民碘营养水平及碘缺乏病现状,为科学补碘防治碘缺乏病提供科学依据。方法依据《2016-2018年广西碘缺乏病监测方案》,在广西109个县(市、区)开展人群碘营养监测及碘缺乏病病情监测。结果 2018共调查8~10岁儿童22 407名、孕... 目的了解广西居民碘营养水平及碘缺乏病现状,为科学补碘防治碘缺乏病提供科学依据。方法依据《2016-2018年广西碘缺乏病监测方案》,在广西109个县(市、区)开展人群碘营养监测及碘缺乏病病情监测。结果 2018共调查8~10岁儿童22 407名、孕妇10 949名,碘盐中位数为24.30 mg/kg,合格碘盐食用率为92.64%。儿童甲肿率为0.44%,尿碘中位数为184.7μg/L,各县(市、区)儿童尿碘中位数在131.9~222.4μg/L之间;孕妇尿碘中位数为134.9μg/L,各县(市、区)孕妇尿碘中位数在75.9~155.2μg/L之间。结论 2018年广西8~10岁儿童碘营养水平适宜,孕妇碘营养水平略显不足;应加强广西区内碘盐质量控制工作,提高市售合格碘盐率,探索提高特殊人群碘营养水平的办法。 展开更多

关键词 碘缺乏病 甲状腺肿大率 盐碘 尿碘

原文传递

伊犁鹅生长发育规律及其生长曲线拟合分析的研究 被引量：5

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作者 曹妍 吴盈萍 +5 位作者 李海英 赵晓钰 赵全庄 赵敏学 梅志勇 周培磊 《饲料研究》 CAS 北大核心 2021年第9期41-45,共5页

研究通过饲养试验,探究伊犁鹅的生长发育规律,挖掘伊犁鹅的生长潜力。试验选取同批次、0日龄健康的伊犁鹅雏鹅150只,公、母各半。测定并计算各周龄平均体重,采用Logistic、Gompertz和Bertalanffy 3种非线性生长曲线模型对0~10周龄伊犁... 研究通过饲养试验,探究伊犁鹅的生长发育规律,挖掘伊犁鹅的生长潜力。试验选取同批次、0日龄健康的伊犁鹅雏鹅150只,公、母各半。测定并计算各周龄平均体重,采用Logistic、Gompertz和Bertalanffy 3种非线性生长曲线模型对0~10周龄伊犁鹅体重数据进行拟合和分析。结果显示,伊犁鹅母鹅的平均体重在0~4周龄大于公鹅,但差异不显著(P>0.05)。4周龄以后,公鹅体重显著高于母鹅(P<0.05)。3种模型均能很好地拟合伊犁鹅的生长曲线,拟合度均在0.991 0以上,其中Gompertz模型对伊犁鹅的体重数据拟合效果最佳,公鹅拟合度为1.000 0,母鹅的拟合度为0.998 0,且伊犁鹅体重实际观测值与Gompertz模型拟合估计值最为接近。该模型是研究伊犁鹅生长发育规律的理想模型。结果表明,伊犁鹅的生长曲线呈近"S"形,符合家禽生长发育的一般规律,Gompertz模型适合对伊犁鹅体重数据的预测。 展开更多

关键词 伊犁鹅 生长曲线 体重 拟合分析

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国家Ⅱ级重点保护野生植物四药门花研究进展 被引量：3

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作者 缪绅裕 黄华章 +4 位作者 戴文坛 陶文琴 黄金玲 张毅 关权壮 《亚热带植物科学》 2019年第2期204-208,共5页

通过对文献和多个网络资源数据库(植物志、标本、图像库等)分析考证,及赴部分产地野外实地考察,对国家II级重点保护野生植物四药门花Loropetalum subcordatum的分类学地位、研究进展、标本记录、产地与生境、濒危因素及保护建议等进行综... 通过对文献和多个网络资源数据库(植物志、标本、图像库等)分析考证,及赴部分产地野外实地考察,对国家II级重点保护野生植物四药门花Loropetalum subcordatum的分类学地位、研究进展、标本记录、产地与生境、濒危因素及保护建议等进行综述,以期为该保护物种的生存、发展和保护提供参考。四药门花自1857年在香港采到标本和1861年被命名以来,其研究已有160多年的历史,分布区范围从最初的香港,扩展至广西、贵州和广东。2019年1月作者等在广东台山上川岛发现的四药门花种群,是迄今发现的分布最南、海拔相对较低的野生种群。四药门花濒危的主要原因是间断分布、自身繁殖力低、生境的人为干扰等,文中就其保护措施提出了建议。 展开更多

关键词 四药门花 金缕梅科 分布区 保护植物 保护建议

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集中荷载作用下弹性支撑浅拱屈曲特性求解 被引量：2

7

作者 潘权 易壮鹏 +1 位作者 曾有艺 颜东煌 《长安大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第4期112-118,共7页

为了找到一种针对任意荷载作用下任意拱轴线弹性支撑拱的非线性稳定性研究方法,对集中荷载作用下任意轴线两端竖向弹性支撑浅拱的面内屈曲特性开展研究,推导了量纲一化的非线性平衡方程,并通过算例分析了屈曲路径和临界荷载的分布特点,... 为了找到一种针对任意荷载作用下任意拱轴线弹性支撑拱的非线性稳定性研究方法,对集中荷载作用下任意轴线两端竖向弹性支撑浅拱的面内屈曲特性开展研究,推导了量纲一化的非线性平衡方程,并通过算例分析了屈曲路径和临界荷载的分布特点,并将其结果与有限元解进行了对比验证。推导过程中采用具有相同弹性支撑梁的屈曲模态作为形函数,不截断地展开拱轴线、外部荷载和结构位移,得到基本平衡状态以及极值点屈曲、分岔屈曲的平衡方程;建立了外荷载、结构位移与结构内力之间的对应关系,进而得到2种屈曲形式的平衡路径和临界荷载;分析了弹性刚度参数对2种屈曲条件下平衡路径与极限荷载分布规律的影响。研究结果表明:采用给出的方法计算的结果与有限元解吻合良好,可以追踪结构发生屈曲的全过程;极值点屈曲和分岔屈曲同时存在,当弹性支撑参数由对称变为不对称时,极值点屈曲路径在特定位置分成基本路径和独立的分离路径,某些位置的分岔屈曲路径变成极值点屈曲路径,并伴随相应临界荷载点的出现和消失;临界荷载仅在量纲一的弹性约束参数较小时随之发生变化,当约束刚度增至一定程度时临界荷载不再随约束刚度的变化而改变。推导的集中荷载下任意拱轴线形竖向弹性支撑浅拱面内屈曲求解公式,可为最终实现任意荷载下任意轴线弹性支撑拱非线性稳定性的解析求解提供参考。 展开更多

关键词 桥梁工程 浅拱 竖向弹性支撑 非线性稳定 平衡路径 临界荷载

原文传递

白藜芦醇对长期贮存锂离子电池电解液性能的影响 被引量：1

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作者 张蕾 张绪平 +1 位作者 张思维 庄全超 《电化学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期83-91,共9页

锂离子电池电解液从制造完成到使用,一般都会经历灌装、运输和贮存的过程,了解长期贮存过程对锂离子电池电解液性能的影响,对锂离子电池的生产具有一定的理论指导意义。本文运用电化学阻抗谱(EIS)测试并结合循环伏安法(CV)测试、充放电... 锂离子电池电解液从制造完成到使用,一般都会经历灌装、运输和贮存的过程,了解长期贮存过程对锂离子电池电解液性能的影响,对锂离子电池的生产具有一定的理论指导意义。本文运用电化学阻抗谱(EIS)测试并结合循环伏安法(CV)测试、充放电测试、扫描电子显微镜(SEM)等研究了1 mol·L^(-1) LiPF6-EC:EMC基础电解液中添加不同浓度白藜芦醇(RES)时,在长期贮存过程中对石墨电极性能的影响及机制。研究结果表明,新鲜的基础电解液在经历6个月的贮存后,石墨电极在其中无论是可逆循环容量还是循环稳定性(容量保持率)均出现大幅度的下降。这主要是由于在经历6个月贮存后的基础电解液中,石墨电极表面形成的SEI膜较厚,进而导致锂离子嵌入过程的不稳定造成的。在基础电解液中添加不同浓度的白藜芦醇均能有效抑制电解液长期贮存造成的石墨电极在其中电化学性能的下降,当基础电解液中含有200 ppm白藜芦醇经历6个月贮存后,石墨电极无论是可逆容量还是循环性能稳定性甚至优异于在新鲜的电解液中。 展开更多

关键词 锂离子电池 电解液 石墨电极 白藜芦醇

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涡阳干扣面品牌创新策略的研究

9

作者 王全壮 《品牌与标准化》 2022年第S02期55-57,共3页

涡阳干扣面是皖北地区特色美食的重要组成部分,随着社会时代的变迁与发展,涡阳干扣面品牌发展存在着地方局限性,已经无法满足大众的需求。笔者通过实地考察法、访谈法、文献分析法,对涡阳干扣面品牌创新进行分析,提出了融合地域文化、... 涡阳干扣面是皖北地区特色美食的重要组成部分,随着社会时代的变迁与发展,涡阳干扣面品牌发展存在着地方局限性,已经无法满足大众的需求。笔者通过实地考察法、访谈法、文献分析法,对涡阳干扣面品牌创新进行分析,提出了融合地域文化、诉说品牌故事、创新品牌形象来提高品牌知名度,满足社会的需求。 展开更多

关键词 涡阳干扣面 地域文化 品牌故事 品牌形象

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0~70日龄伊犁鹅及其杂交鹅生长性能和体重体尺相关性的比较研究

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作者 赵敏学 赵晓钰 +7 位作者 李海英 曹妍 梅志勇 吴盈萍 潘璐 李家辉 王玲 赵全庄 《新疆农业大学学报》 CAS 2020年第3期191-198,共8页

探究伊犁鹅(Anser)公鹅与其杂交鹅公鹅(父本为伊犁鹅,母本为豁眼鹅)在生长性能、体尺性状上的差异,为伊犁鹅品种的杂交利用、肉用价值开发及早期选育提供参考依据。选取同批次孵化、健康状况良好、体重相近的0日龄伊犁鹅公鹅及其杂交鹅... 探究伊犁鹅(Anser)公鹅与其杂交鹅公鹅(父本为伊犁鹅,母本为豁眼鹅)在生长性能、体尺性状上的差异,为伊犁鹅品种的杂交利用、肉用价值开发及早期选育提供参考依据。选取同批次孵化、健康状况良好、体重相近的0日龄伊犁鹅公鹅及其杂交鹅公鹅各75只,在相同条件下饲养70 d,按期测定其生长性能及体尺性状,并对相关指标进行相关性分析。在生长性能方面,在整个试验过程中,伊犁鹅公鹅的体重显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于杂交鹅公鹅的体重。伊犁鹅公鹅的日增重在28、42和70日龄时,显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于杂交鹅公鹅的日增重,在56日龄时,显著低于杂交鹅公鹅(P<0.05)。伊犁鹅公鹅的料重比在生长早期(0~28日龄)显著低于杂交鹅公鹅(P<0.05),在生长后期(42~70日龄)显著高于杂交鹅公鹅(P<0.05)。在体尺性状方面,伊犁鹅公鹅的绝大多数体尺性状的增长速度快于杂交鹅公鹅,并存在显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)差异。在体重与体尺性状的相关性分析方面,伊犁鹅公鹅、杂交鹅公鹅分别在14日龄、28日龄后,其体重与各个体尺性状之间均存在显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)相关。在生长性能方面,伊犁鹅公鹅的生长性能总体优于杂交鹅公鹅,伊犁鹅公鹅较杂交鹅公鹅提前1~2周达到3 kg的上市体重。伊犁鹅公鹅、杂交鹅公鹅的快速生长阶段分别在28~56日龄、42~56日龄。在体尺性状方面,伊犁鹅公鹅的大多数体尺性状的发育速度均快于杂交鹅公鹅。伊犁鹅公鹅14~28日龄的体斜长和半潜水长可以作为其体重早期选择的指标。 展开更多

关键词 伊犁鹅 杂交鹅 生长性能 体尺性状 相关性分析

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地面条件下分离结晶生长CdZnTe晶体的稳定性控制

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作者 李震 张全壮 《人工晶体学报》 EI CAS 北大核心 2019年第1期28-33,共6页

本文采用四阶龙格-库塔法对地面分离结晶生长CdZnTe晶体过程中气液界面形状及熔体-坩埚气缝宽度进行了模拟,讨论了α_e+θ_c<180°和α_e+θ_c> 180°时影响气液界面形状及气缝宽度的控制因素。采用线性回归方法对模拟结... 本文采用四阶龙格-库塔法对地面分离结晶生长CdZnTe晶体过程中气液界面形状及熔体-坩埚气缝宽度进行了模拟,讨论了α_e+θ_c<180°和α_e+θ_c> 180°时影响气液界面形状及气缝宽度的控制因素。采用线性回归方法对模拟结果进行了分析,得到了地面条件下分离结晶稳定生长的影响因素和控制条件。即:只有满足熔体冷-热端气压调节与结晶速率成线性变化,才能维持稳定的分离结晶。 展开更多

关键词 地面条件下分离结晶 气液界面形状 稳定性控制 龙格-库塔法

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