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海藻糖快速检测方法的建立与初步应用 被引量：6
1
作者 苗佳 王彩喆 +5 位作者 牛丹丹 nokuthula peace mchunu 田康明 Suren Singh Kugenthiren Permaul 王正祥 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第23期227-231,共5页
海藻糖是生物体合成的、具有抗逆保护作用的天然二糖,在食品加工与贮藏、微生物发酵过程具有重要作用。该文采用前期获得的专一性海藻糖酶,建立了一种定量测定海藻糖的快速方法。该方法对海藻糖的检测限为0.019 mg/m L,定量限为0.1 mg/m... 海藻糖是生物体合成的、具有抗逆保护作用的天然二糖,在食品加工与贮藏、微生物发酵过程具有重要作用。该文采用前期获得的专一性海藻糖酶,建立了一种定量测定海藻糖的快速方法。该方法对海藻糖的检测限为0.019 mg/m L,定量限为0.1 mg/m L;海藻糖的线性检测范围为0.1 mg/m L^150.0 mg/m L,回收率为98.80%~101.33%。该方法操作简便快捷、特异性高、重复性好,在菌种改良与食品原料营养筛查等海藻糖快速定量检测中具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 海藻糖 快速检测 海藻糖酶
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高转苷活性乳糖酶编码基因的克隆与酶学特征研究 被引量：1
2
作者 田康明 赵继华 +3 位作者 牛丹丹 nokuthula peace mchunu 王彩喆 王正祥 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2020年第15期8-13,共6页
运用鸟枪克隆术,从环状芽胞杆菌B2301基因组中克隆出乳糖酶编码基因,其完整读框大小为5133 bp,编码1710个氨基酸残基,不含典型细菌信号肽序列,与已有报道的β-半乳糖苷酶的最高一致性为93.6%。初步表达和纯化了此乳糖酶,重组乳糖酶在50... 运用鸟枪克隆术,从环状芽胞杆菌B2301基因组中克隆出乳糖酶编码基因,其完整读框大小为5133 bp,编码1710个氨基酸残基,不含典型细菌信号肽序列,与已有报道的β-半乳糖苷酶的最高一致性为93.6%。初步表达和纯化了此乳糖酶,重组乳糖酶在50℃(ONPG)/60℃(乳糖)和pH 6.0~6.5下表现出最高催化活性,Zn 2+、Fe 2+、Cu 2+、EDTA和SDS对重组酶表现出不同程度的抑制作用;该酶在50和55℃下催化合成低聚半乳糖的V max分别为2.21和2.47 g/(L·h),K m分别为10.46和14.37 g/L。所获得的乳糖酶具有以乳糖为底物酶法合成低聚半乳糖的优良应用属性,可为后续针对此酶的高效表达与工业化应用奠定基础。 展开更多
关键词 乳糖酶 转半乳糖基活性 克隆 酶学性质 低聚半乳糖
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高转苷活性乳糖酶快速筛选方法的建立与初步应用 被引量：1
3
作者 赵继华 牛丹丹 +3 位作者 nokuthula peace mchunu 田康明 苗佳 王正祥 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期17-20,共4页
具有良好半乳糖基转移酶活性的乳糖酶是工业制备低聚半乳糖(galacto-oligosaccharides,GOS)的主要酶制剂。通过筛选获得了以GOS为唯一碳源生长良好,在乳糖-葡萄糖-半乳糖中生长不良的长双歧杆菌B1172,确立了其GOS-生物量相关关系,进一... 具有良好半乳糖基转移酶活性的乳糖酶是工业制备低聚半乳糖(galacto-oligosaccharides,GOS)的主要酶制剂。通过筛选获得了以GOS为唯一碳源生长良好,在乳糖-葡萄糖-半乳糖中生长不良的长双歧杆菌B1172,确立了其GOS-生物量相关关系,进一步基于GOS-生物量相关关系建立起乳糖酶转苷活性的高通量筛选方法。运用此方法,从菌种库中筛选获得了5株具有较高转苷活性的乳糖酶产生菌株,可为后续此酶的克隆与分子进化奠定基础。 展开更多
关键词 乳糖酶 转半乳糖基活性 乳糖酶生产菌 高通量筛选
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耐热嗜碱蛋白酶基因的克隆、表达及其酶学性质分析
4
作者 谢爱连 林碧瑜 +2 位作者 牛丹丹 nokuthula peace mchunu 叶秀云 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第20期101-106,共6页
碱性蛋白酶是一类重要的工业酶制剂。为进一步提高碱性蛋白酶在高温碱性条件下的活力,增强其工业应用价值,本文从地衣芽胞杆菌CCTCC M2018539中首先通过PCR扩增获得碱性蛋白酶编码基因aprE539并克隆入表达载体pND-113中,在枯草芽胞杆菌W... 碱性蛋白酶是一类重要的工业酶制剂。为进一步提高碱性蛋白酶在高温碱性条件下的活力,增强其工业应用价值,本文从地衣芽胞杆菌CCTCC M2018539中首先通过PCR扩增获得碱性蛋白酶编码基因aprE539并克隆入表达载体pND-113中,在枯草芽胞杆菌WB600中实现碱性蛋白酶AprE539的表达;重组酶AprE539经硫酸铵沉降(30%~70%)、透析、DEAE阴离子交换和超滤获得纯酶,并以SDS-PAGE电泳测定AprE539的分子量大小。结果表明,AprE539的分子量大小为30 kDa。进一步对其酶学性质研究表明:AprE539的最适作用pH为11.0,最适作用温度为65~70℃;在pH6.0~12.0范围内具有较好的稳定性;在60℃保温1 h后酶活剩余70%;Cu^2+、Mn^2+、Ca^2+和Mg^2+对酶活有明显促进作用。AprE539在氨基酸序列上仅有2个氨基酸残基与碱性蛋白酶2709存在差异,但其酶学特征差异明显,为后续进一步探究其酶学性质差异性奠定基础。 展开更多
关键词 地衣芽胞杆菌 耐热嗜碱性蛋白酶 克隆与表达 酶学性质
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