口蹄疫表位疫苗的研究进展 被引量：7

1

作者 汪肖肖 孙普 +3 位作者 王省 谯雨 卢曾军 刘在新 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期499-505,共7页

口蹄疫表位疫苗既不存在病毒复制风险,又能同时展示多个变异株的优势表位,是具有巨大发展潜力的新型疫苗。本文将从口蹄疫病毒的抗原表位,表位疫苗的设计和优化以及表位疫苗的应用等方面进行综述,为合理设计和研发有效的口蹄疫表位疫苗... 口蹄疫表位疫苗既不存在病毒复制风险,又能同时展示多个变异株的优势表位,是具有巨大发展潜力的新型疫苗。本文将从口蹄疫病毒的抗原表位,表位疫苗的设计和优化以及表位疫苗的应用等方面进行综述,为合理设计和研发有效的口蹄疫表位疫苗提供参考。 展开更多

关键词 口蹄疫 表位疫苗 防控

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B细胞永生化方法的研究进展 被引量：6

2

作者 王省 李坤 +4 位作者 卢曾军 汪肖肖 谯雨 刘在新 曹轶梅 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期743-749,共7页

B细胞永生化是一个历久弥新的研究课题,如何维持B细胞体外连续传代增殖并表达抗体的特性,对于研制治疗和诊断用抗体类药物和制品具有重要的意义。B细胞永生化的方法包括杂交瘤技术,EB病毒或SV40感染永生化以及遗传修饰法。永生化B细胞... B细胞永生化是一个历久弥新的研究课题,如何维持B细胞体外连续传代增殖并表达抗体的特性,对于研制治疗和诊断用抗体类药物和制品具有重要的意义。B细胞永生化的方法包括杂交瘤技术,EB病毒或SV40感染永生化以及遗传修饰法。永生化B细胞能快速有效的产生单克隆抗体,这种抗体能克服异源抗体产生的免疫排斥,是制备单克隆抗体的理想来源,成为研制治疗性单抗的重要方法。本文主要概述了B细胞永生化方法的研究进展与未来的发展方向,以供从事这方面研究的人员参考。 展开更多

关键词 B细胞 单克隆抗体 永生化

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基于CFD商用车热保护仿真与验证 被引量：5

3

作者 张建华 唐荣江 +2 位作者 张成 陆增俊 韦尚军 《液压与气动》 北大核心 2019年第10期39-43,共5页

为了研究某款商用车在最大扭矩工况下悬架气囊与挡泥板表面温度超标的原因。采用CFD软件建立了商用车发动机舱CAD模型,并进行有限元网格划分和设置舱内温度边界条件,求解在最大扭矩工况下舱内温度情况。通过流场和温度场分析获得的排气... 为了研究某款商用车在最大扭矩工况下悬架气囊与挡泥板表面温度超标的原因。采用CFD软件建立了商用车发动机舱CAD模型,并进行有限元网格划分和设置舱内温度边界条件,求解在最大扭矩工况下舱内温度情况。通过流场和温度场分析获得的排气管热量对气囊和挡泥的热害影响范围与表面温度,对其分别采取增加隔热罩和隔热套的优化措施以降低热害,并结合实验进行验证。最终结果表明:优化后气囊表面温度平均下降了11.95℃,优化后挡泥板表面温度平均下降了9.2℃。改进措施取得了显著成果,为后续车辆设计提供了参考。 展开更多

关键词 热辐射 数值模拟 优化改进

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重型商用车冷却系统性能优化 被引量：5

4

作者 唐荣江 王青青 +2 位作者 肖飞 陆增俊 刘威亚 《液压与气动》 北大核心 2020年第5期96-102,共7页

针对某商用车冷却系统散热性能不足,发动机出水温度偏高问题,运用数值模拟仿真方法对该车发动机机舱内的流场与温度进行仿真分析。经过分析发现冷却余量不足主要由冷却风量不足和散热器部分热风回流所导致。分别对冷却系统重要部件散热... 针对某商用车冷却系统散热性能不足,发动机出水温度偏高问题,运用数值模拟仿真方法对该车发动机机舱内的流场与温度进行仿真分析。经过分析发现冷却余量不足主要由冷却风量不足和散热器部分热风回流所导致。分别对冷却系统重要部件散热器、风扇和导风罩进行优化改进,并加以匹配分析得到最优组合方案,有效解决了问题。仿真结果显示,组合方案有效提高了冷却系统的冷却性能,通过实车测试验证模型可靠性误差率为1.1%,散热器冷却常数K值较原型降低了8.3℃,有效改善了发动机舱的散热环境。 展开更多

关键词 冷却系统 散热器 性能优化 CFD

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B细胞分离方法的研究进展 被引量：4

5

作者 王省 李坤 +2 位作者 卢曾军 刘在新 曹轶梅 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1031-1037,共7页

B细胞是重要的免疫细胞,如何筛选和分离分泌抗体的抗原特异性B细胞,对于研制一些特殊功能的抗体具有重要的方法学意义。本文阐述了不同发育阶段B细胞的表面分子特征与种属差异,以及基于这些表面分子的不同B细胞分离方法的原理与优缺点,... B细胞是重要的免疫细胞,如何筛选和分离分泌抗体的抗原特异性B细胞,对于研制一些特殊功能的抗体具有重要的方法学意义。本文阐述了不同发育阶段B细胞的表面分子特征与种属差异,以及基于这些表面分子的不同B细胞分离方法的原理与优缺点,旨在为抗原特异性B细胞的分离提供参考。 展开更多

关键词 B细胞 分离方法 抗体

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猪圆环病毒3型研究进展 被引量：3

6

作者 曹旭阳 袁红 +7 位作者 孙普 李坤 杨宇轩 邓欣雨 焦云娟 白兴文 卢曾军 权富生 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第9期1-7,共7页

猪圆环病毒(PCV)是圆环病毒科圆环病毒属的单股环状闭合DNA病毒,是引起猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)的主要病原,目前包括4个基因型:PCV1、PCV2、PCV3和PCV4。其中,PCV3是近年来新发的一种严重危害养猪业的基因型,已经在全球范围呈现广泛... 猪圆环病毒(PCV)是圆环病毒科圆环病毒属的单股环状闭合DNA病毒,是引起猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)的主要病原,目前包括4个基因型:PCV1、PCV2、PCV3和PCV4。其中,PCV3是近年来新发的一种严重危害养猪业的基因型,已经在全球范围呈现广泛流行趋势,引起了国内外学者的广泛关注。本文主要从病原学、流行病学、临床症状、致病机理、免疫反应和诊断方法对PCV3近年来研究情况进行了综述,为PCV3后期的各方面研究提供参考。 展开更多

关键词 猪圆环病毒3型(PCV3) 病原学 流行病学 临床症状 致病机理 免疫反应 诊断方法

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发动机冷却系统的热风回流分析与优化 被引量：3

7

作者 肖飞 唐荣江 +3 位作者 张淼 童浙 陆增俊 李申芳 《装备制造技术》 2018年第6期9-12,共4页

针对某商用车发动机冷却系统不合格问题,使用CFD软件对卡车发动机流场进行分析,并通过对进风温度的监测,确定热风回流是导致水温不合格的主要因素。通过对发动机舱的结构分析,对其不合理之处进行改进优化,并进行实验验证,结果表明,优化... 针对某商用车发动机冷却系统不合格问题,使用CFD软件对卡车发动机流场进行分析,并通过对进风温度的监测,确定热风回流是导致水温不合格的主要因素。通过对发动机舱的结构分析,对其不合理之处进行改进优化,并进行实验验证,结果表明,优化改进后冷却常数K值(℃)由65.1℃降至56.8℃,有效地提升了发动机冷却性能。 展开更多

关键词 冷却系统 优化改进 热风回流 数值模拟

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猪繁殖与呼吸综合征病毒一步法多重RT-PCR检测方法的建立和应用 被引量：2

8

作者 王方洲 张婧 +10 位作者 马雪青 李平花 包慧芳 王健 赵志荀 李娇阳 李国秀 刘在新 卢曾军 曾巧英 孙普 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期805-814,共10页

为提高实验室诊断猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的准确性,本研究分析了近几年国内流行的PRRSV毒株序列,针对主要流行的美洲型和欧洲型毒株设计合成特异性引物,建立PRRSV一步法多重RT-PCR检测方法,通过特异性、敏感性和重复性试验,与实... 为提高实验室诊断猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的准确性,本研究分析了近几年国内流行的PRRSV毒株序列,针对主要流行的美洲型和欧洲型毒株设计合成特异性引物,建立PRRSV一步法多重RT-PCR检测方法,通过特异性、敏感性和重复性试验,与实时荧光RT-PCR对比检测田间样品,评价该方法的检测能力。结果显示,本研究筛选出了3对特异性引物,成功建立了PRRSV一步法多重RT-PCR检测方法,扩增目的片段大小分别为408 bp、548 bp、689 bp,至少扩增出任意一条特异性条带即可判为阳性;对口蹄疫病毒、猪瘟病毒、塞内卡病毒、非洲猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒均无特异性条带扩增;检测美洲型经典毒株VR-2332、高致病性毒株GSWW15株和NADC30样毒株GSWW18的最低病毒量范围为25~50 TCID_(50)/mL;45份田间临床样品的比对检测结果显示,本研究建立的多重RT-PCR检测方法检出阳性率为33.3%,与实时荧光RT-PCR方法的检测结果符合率为95.6%。结果表明,本研究建立的PRRSV一步法多重RT-PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,可用于PRRSV流行病学的调查,具有良好的应用前景。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 一步法多重RT-PCR 建立 应用

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猪繁殖与呼吸综合征病毒的纯化与形态观察 被引量：2

9

作者 魏德陇 张婧 +7 位作者 李坤 孙普 白兴文 包慧芳 李冬 刘在新 卢曾军 曹轶梅 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1519-1524,共6页

为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)全病毒抗原,用于免疫学研究,本研究在Marc-145细胞上繁殖了PRRSV基因Ⅱ型VR2332株,经聚乙二醇浓缩后,用蔗糖密度梯度离心法纯化PRRSV病毒粒子。用电子显微镜观察病毒粒子形态结构,并用SDS-PAGE、免... 为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)全病毒抗原,用于免疫学研究,本研究在Marc-145细胞上繁殖了PRRSV基因Ⅱ型VR2332株,经聚乙二醇浓缩后,用蔗糖密度梯度离心法纯化PRRSV病毒粒子。用电子显微镜观察病毒粒子形态结构,并用SDS-PAGE、免疫印迹等方法分析了纯化效果。结果显示,电子显微镜观察到PRRSV形状呈球形或椭圆形,囊膜表面有微绒毛样突起,病毒粒子大小不一,大多数直径在50~80 nm之间,有极少数直径超过120 nm。SDS-PAGE可见病毒的多个结构蛋白条带,利用感染康复猪血清进行免疫印迹检测显示,M蛋白的印迹条带最深,显示纯化病毒具有良好的反应活性,为后续免疫学研究奠定了基础。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 纯化 形态学 蔗糖密度梯度

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A型口蹄疫病毒衣壳蛋白主要抗原表位区的原核表达及免疫效果分析 被引量：2

10

作者 汪肖肖 孙普 +8 位作者 贾怀杰 李冬 付元芳 陈应理 曹轶梅 景志忠 白兴文 卢曾军 刘在新 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1207-1215,共9页

为了探索更有效的A型口蹄疫(FMD)表位疫苗,根据已鉴定的A型口蹄疫病毒(FMDV)主要抗原位点,结合基因序列比对分析,选择了A型FMDV流行毒株的主要抗原位点区进行表位蛋白分子的设计表达。所用表位序列包括A/QH/CHA/2013的VP2 70~81位、118~... 为了探索更有效的A型口蹄疫(FMD)表位疫苗,根据已鉴定的A型口蹄疫病毒(FMDV)主要抗原位点,结合基因序列比对分析,选择了A型FMDV流行毒株的主要抗原位点区进行表位蛋白分子的设计表达。所用表位序列包括A/QH/CHA/2013的VP2 70~81位、118~140位,VP1 G-H环131~157位、C末端188~212位,A/WH/CHA/09 VP1 43~48位、VP3 55~72位,以及非结构蛋白3A中的T细胞表位和通用性T细胞表位,构建免疫原蛋白分子命名为ANX2和ANX3,其中ANX2采用了表位序列反向串联的方式进行设计,用大肠杆菌表达免疫原基因,纯化表位蛋白免疫小鼠和猪,分析特异性体液免疫和细胞免疫应答水平,并对免疫猪进行了攻毒保护试验,评价表位疫苗的保护效果。结果显示,ANX2、ANX3重组蛋白以包涵体表达为主,蛋白大小约为41 ku和39 ku,均能与A型FMDV阳性血清发生特异性反应;免疫小鼠和猪后都能产生抗A型FMDV特异性抗体;用表位蛋白刺激免疫小鼠脾淋巴细胞,细胞因子IFN-γ和IL-4均有明显的升高;攻毒后对猪有一定的保护作用,ANX2的免疫效果略优于ANX3,证明表位序列反向串联更有利于抗原表位的展示,从而增强其免疫效果。本研究为A型FMDV表位疫苗的研究积累了经验。 展开更多

关键词 A型口蹄疫病毒 表位疫苗 体液免疫 细胞免疫

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PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞后对Ⅲ型干扰素应答的调控 被引量：2

11

作者 刘伟 张婧 +4 位作者 甘利鹏 孙普 刘在新 卢曾军 刘霞 《动物医学进展》 北大核心 2019年第2期1-8,共8页

Ⅲ型干扰素(IFN-λ)是一种新发现的抗病毒因子,在天然免疫和获得性免疫应答方面具有多重功能;猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染后造成猪的免疫抑制状态,Ⅰ型和Ⅱ型干扰素的应答受到抑制,IFN-λ的应答情况还不清楚。为揭示PRRSV感染猪... Ⅲ型干扰素(IFN-λ)是一种新发现的抗病毒因子,在天然免疫和获得性免疫应答方面具有多重功能;猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染后造成猪的免疫抑制状态,Ⅰ型和Ⅱ型干扰素的应答受到抑制,IFN-λ的应答情况还不清楚。为揭示PRRSV感染猪后IFN-λ的应答情况与调控机制,以期进一步揭示PRRSV抑制宿主抗病毒免疫应答的分子机理。利用PRRSV强毒与弱毒株感染猪肺泡巨噬细胞(PAM),通过实时荧光定量PCR(real-time PCR)和Western blot检测IFN-λ在mRNA与蛋白水平的差异,并检测了不同非结构蛋白(NSP)对IFN-λ的调控作用。结果发现PRRSV感染PAM细胞后均在mRNA水平上诱导IFN-λ1和IFN-λ3表达上调,且IFN-λ3比IFN-λ1上调更明显;然而在蛋白水平上二者均为表达下调。人源IFN-λ3比IFN-λ1显示出更强的抑制PRRSV复制的作用,且对强毒株GSWW/15的抑制效果更明显。PRRSV NSP7b和NSP9转染PK-15细胞后能使IFN-λ3的mRNA上调表达,但蛋白水平无变化;而NSP7a对IFN-λ3的mRNA和蛋白水平均无影响,提示NSP7b和NSP9可能通过某种机制抑制IFN-λ3的应答。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 Ⅲ型干扰素 λ3干扰素

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基于CFD和试验的商用车高位引气管预滤性能的分析与优化 被引量：2

12

作者 唐荣江 胡宾飞 +3 位作者 张淼 陆增俊 肖飞 赖凡 《工程设计学报》 CSCD 北大核心 2019年第4期403-408,415,共7页

为延长恶劣工况下某商用车进气系统空气滤清器滤芯的使用寿命,避免频繁更换滤芯,提出了增加旋流扇的高位引气管方案,并通过优化旋流扇夹角来提高进气系统预滤灰尘和液雾的效率,达到降低成本的目的。首先,采用计算流体力学(computational... 为延长恶劣工况下某商用车进气系统空气滤清器滤芯的使用寿命,避免频繁更换滤芯,提出了增加旋流扇的高位引气管方案,并通过优化旋流扇夹角来提高进气系统预滤灰尘和液雾的效率,达到降低成本的目的。首先,采用计算流体力学(computational fluid dynamics,CFD)方法,对进气过程中高位引气管的内部流场进行数值模拟,分析了3款高位引气管的速度流线图和速度梯度云图,得到了高位引气管预滤灰尘和液雾的机理,并基于高位引气管速度流场的变化规律,提出了旋流扇夹角优化方向;其次,利用台架试验对优化后的高位引气管进行灰尘和液雾的预滤试验,并计算出灰尘和液雾的预滤效率;最后,对比不同高位引气管预滤灰尘和液雾的效率,根据两预滤效率的变化趋势,选择旋流扇最优夹角为75°。仿真和试验结果表明:旋流扇夹角对进气系统工作过程中高位引气管的流场及预滤效率有重要影响,优化旋流扇夹角有助于提高进气系统的预滤性能,从而减少进入空气滤清器的灰尘和液雾,达到延长空气滤清器滤芯寿命的目的。 展开更多

关键词 滤芯寿命 旋流扇 高位引气管 计算流体力学 预滤效率

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口蹄疫O型重组病毒的构建及其生物学特性分析 被引量：1

13

作者 龚婷 李平花 +6 位作者 孙普 马雪青 白兴文 杨孝朴 卢曾军 曾巧英 刘在新 《动物医学进展》 北大核心 2019年第11期18-23,共6页

传统灭活疫苗的免疫接种是预防和控制口蹄疫的重要手段,但口蹄疫病毒极易发生变异而常导致新突变株的产生,从而使现有疫苗不能有效防控当前流行的口蹄疫,经常需要筛选与当前流行毒株抗原匹配性好、免疫原性和复制特性优良的疫苗候选毒... 传统灭活疫苗的免疫接种是预防和控制口蹄疫的重要手段,但口蹄疫病毒极易发生变异而常导致新突变株的产生,从而使现有疫苗不能有效防控当前流行的口蹄疫,经常需要筛选与当前流行毒株抗原匹配性好、免疫原性和复制特性优良的疫苗候选毒株。在比对分析Cathay和Pan-Asia谱系不同时间经典疫苗毒株和我国当前主要流行毒株(SEA-Mya98谱系)VP1结构蛋白的基础上,借助反向遗传操作技术,在已构建含当前流行毒株VP1基因全长感染性克隆的骨架上,引入2个氨基酸的替换(VP1 H28Q+S47Q),构建重组全长质粒,并通过转染表达T7RNA聚合酶的BSR/T7细胞成功拯救到活的重组病毒。重组病毒具有和亲本病毒相似的噬斑表型和一步生长曲线,却降低热稳定性,增强了对乳鼠的致病力。研究结果为进一步开发与当前流行毒株抗原匹配性好、免疫原性和复制特性优良的FMD疫苗候选毒株奠定了基础。 展开更多

关键词 O型口蹄疫 突变 重组病毒 生物学特性

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A型口蹄疫病毒与中和性抗体的复合物结构解析

14

作者 张泽林 武山权 +4 位作者 李凤娟 泽让扎西 卢曾军 李坤 雷东升 《电子显微学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期39-48,共10页

口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)是感染猪、牛、羊等偶蹄动物的烈性病原,严重危害畜牧业的发展以及相关产品的对外贸易。FMDV包含七个血清型,其中A型FMDV抗原结构变异最大,因此解析A型FMDV保守抗原结构对广谱疫苗分子设... 口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)是感染猪、牛、羊等偶蹄动物的烈性病原,严重危害畜牧业的发展以及相关产品的对外贸易。FMDV包含七个血清型,其中A型FMDV抗原结构变异最大,因此解析A型FMDV保守抗原结构对广谱疫苗分子设计具有重要指导意义。据此,本文作者利用冷冻电镜技术解析了A型FMDV与中和性抗体P22C复合物的三维结构。发现P22C结合于A型FMDV颗粒的三重轴附近,接触面多数氨基酸位于衣壳蛋白VP2 B-C环,其次是E-F/H-I环以及VP3 B-B“结节”上不连续的少量氨基酸。其中,VP2的72、77与195位氨基酸通过氢键与抗体相互作用,可能是影响结合的关键位点。进一步的结合自由能分析支持该猜测,提示72位点是组成抗原表位的关键决定簇,而H77W和S195L突变则可进一步降低结合自由能从而提高与抗体的亲和力。结合自由能分析也说明了P22C具有较高的成熟度。研究结果揭示了A型FMDV的抗原结构信息,为FMDV疫苗分子设计提供了一个重要靶点。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 中和性抗体 冷冻电镜 结合自由能

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口蹄疫病毒VP1结构蛋白多个氨基酸的替换对病毒生物学特性和小鼠免疫保护的影响 被引量：1

15

作者 黄书伦 龚婷 +7 位作者 孙普 白兴文 马雪青 袁红 李坤 卢曾军 刘在新 李平花 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1504-1511,共8页

为探究口蹄疫病毒基因工程毒株(r-FMDV/MYVP1)VP1蛋白中氨基酸的替换对病毒复制特性及小鼠免疫保护的影响,借助反向遗传技术将多个O型FMD疫苗毒株VP1上保守和(或)特有氨基酸引入嵌合Mya-98毒株VP1基因的全长克隆,构建2个重组质粒并拯救F... 为探究口蹄疫病毒基因工程毒株(r-FMDV/MYVP1)VP1蛋白中氨基酸的替换对病毒复制特性及小鼠免疫保护的影响,借助反向遗传技术将多个O型FMD疫苗毒株VP1上保守和(或)特有氨基酸引入嵌合Mya-98毒株VP1基因的全长克隆,构建2个重组质粒并拯救FMDV,利用间接免疫荧光、电镜观察、序列分析进行鉴定;采用蚀斑试验和一步生长曲线测定病毒的蚀斑表型和复制性能;应用免疫和攻毒试验评价突变体疫苗对小鼠的保护效果。结果显示:成功拯救到2株病毒突变体;其蚀斑表型和一步生长曲线均与亲本病毒相似。结果表明:FMDV VP1蛋白上7个氨基酸的替换不影响病毒的复制能力;2株病毒突变体免疫小鼠后均能诱导产生良好的抗体水平并能保护多谱系病毒株的攻击。本研究为未来通过反向遗传修饰改造优良FMD疫苗候选毒株提供了理论依据。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 VP1 氨基酸替换 生物学特性

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口蹄疫病毒前导蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备 被引量：1

16

作者 李娜 袁红 +10 位作者 李平花 孙普 白兴文 龚婷 余琼 朱国强 李坤 马雪青 卢曾军 包慧芳 刘在新 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期1215-1219,共5页

前导蛋白(Lpro)是口蹄疫病毒(FMDV)编码的重要毒力因子,在拮抗宿主抗病毒反应中发挥多种功能。为了获得抗Lpro的抗体以研究Lpro的功能,本研究将L基因克隆到pET-28a(+)原核表达质粒中,构建了重组表达质粒pET-28a-L,转化至大肠杆菌BL21中... 前导蛋白(Lpro)是口蹄疫病毒(FMDV)编码的重要毒力因子,在拮抗宿主抗病毒反应中发挥多种功能。为了获得抗Lpro的抗体以研究Lpro的功能,本研究将L基因克隆到pET-28a(+)原核表达质粒中,构建了重组表达质粒pET-28a-L,转化至大肠杆菌BL21中进行重组蛋白的诱导表达,所获得重组His-Lpro主要以包涵体形式存在,利用Ni-NTA柱纯化获得了高纯度的His-Lpro,将His-重组Lpro与弗氏佐剂混合乳化后免疫新西兰大白兔,制备了高效价的Lpro兔多克隆抗体血清。通过免疫荧光试验(IFA)、免疫印迹试验(WB)检测Lpro兔多克隆抗体血清的反应原性。结果显示,该多抗血清能够特异性识别FMDV感染BHK21细胞后表达的Lpro,表明本研究制备的Lpro多抗血清具有很好的反应原性,为深入研究Lpro功能及其拮抗宿主天然免疫的作用机理奠定了基础。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 前导蛋白 原核表达 多克隆抗体

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A型塞内卡病毒VP3蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备 被引量：1

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作者 马雪青 孙婕妤 +8 位作者 李平花 付元芳 朵瑞锦 杨林 张婧 白兴文 刘在新 卢曾军 孙普 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期1288-1293,共6页

为了研究A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)VP3蛋白的功能,将SVA的VP3基因克隆至原核表达载体pET-32a(+)构建重组质粒p ET32a-SVA-VP3,转化大肠杆菌BL21(DE3)后进行诱导表达;用纯化复性后的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并用... 为了研究A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)VP3蛋白的功能,将SVA的VP3基因克隆至原核表达载体pET-32a(+)构建重组质粒p ET32a-SVA-VP3,转化大肠杆菌BL21(DE3)后进行诱导表达;用纯化复性后的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并用Western-blot与间接免疫荧光试验鉴定其特异性。结果表明,重组SVA VP3蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)以包涵体形式表达,分子质量约为44 ku;制备的家兔多克隆抗体能与SVA表达的VP3蛋白特异性结合,而不与口蹄疫病毒抗原反应,表明制备的SVA VP3蛋白家兔多抗血清具有良好的反应原性和特异性。重组SVA VP3蛋白及其多克隆抗体的成功制备为SVA血清学检测方法的建立、SVA致病机制及VP3蛋白功能的研究提供了材料支撑。 展开更多

关键词 A型塞内卡病毒 VP3蛋白 原核表达 多克隆抗体

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硫酸乙酰肝素的组成及其对病毒感染的影响

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作者 黄磊 袁红 +11 位作者 宫晓华 包慧芳 王利豪 王涛 高洁 李平花 孙普 李冬 陈应理 刘在新 卢曾军 白兴文 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2023年第12期1475-1479,共5页

硫酸乙酰肝素(HS)是一类由多个二糖重复单元组成的线性硫酸化异构多糖,广泛存在于哺乳动物细胞表面和细胞外基质中。HS大分子通过相互作用识别并结合呈正电荷特性的病毒粒子,增强其对宿主细胞的感染能力,因此HS可作为病毒感染靶细胞的... 硫酸乙酰肝素(HS)是一类由多个二糖重复单元组成的线性硫酸化异构多糖,广泛存在于哺乳动物细胞表面和细胞外基质中。HS大分子通过相互作用识别并结合呈正电荷特性的病毒粒子,增强其对宿主细胞的感染能力,因此HS可作为病毒感染靶细胞的特异性受体。已有研究证实,HS参与口蹄疫病毒(FMDV)等多种病毒的吸附和入胞过程,在病毒感染中发挥重要作用。本文概述了HS的组成及其对病毒感染的影响,以期为HS的研究提供参考。 展开更多

关键词 硫酸乙酰肝素 受体 病毒感染

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口蹄疫病毒衣壳蛋白氨基酸突变对病毒热稳定性的影响 被引量：1

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作者 高雅 李平花 +7 位作者 马雪青 寻广谨 白兴文 孙普 袁红 卢曾军 刘在新 李冬 《动物医学进展》 北大核心 2019年第7期1-8,共8页

口蹄疫是世界范围内广泛流行的一种偶蹄动物的烈性传染病,其病原为口蹄疫病毒(FMDV),它对热比较敏感,当温度高于30℃时,病毒衣壳容易解离为五聚体亚单位而影响疫苗的免疫保护效果。因此,改善病毒的热稳定性,制备热稳定优良的口蹄疫疫苗... 口蹄疫是世界范围内广泛流行的一种偶蹄动物的烈性传染病,其病原为口蹄疫病毒(FMDV),它对热比较敏感,当温度高于30℃时,病毒衣壳容易解离为五聚体亚单位而影响疫苗的免疫保护效果。因此,改善病毒的热稳定性,制备热稳定优良的口蹄疫疫苗具有重大的应用价值。在实验室建立的口蹄疫病毒型内嵌和全长感染性克隆的基础上,在结构蛋白引入1个或2个氨基酸突变,分别构建了2种基因修饰的口蹄疫病毒全长重组质粒。全长质粒经NotⅠ线化后分别转染表达T7RNA聚合酶的BSR/T7细胞以拯救重组病毒。间接免疫荧光和电镜分析表明,成功拯救到2株口蹄疫重组病毒。重组病毒经RT-PCR和序列测定证实只有1株重组病毒所含的耐热突变可以稳定遗传。热失活试验显示,拯救病毒与亲本病毒的耐热特性基本一致。结果表明在结构蛋白上引入V2090A-S2093F-H30568R的突变,并对口蹄疫病毒的热稳定性并没有明显的影响,为未来发展热稳定的口蹄疫疫苗提供了一定的参考。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 热稳定性 疫苗

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基于计算流体力学的发动机舱热害分析与控制 被引量：1

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作者 陆增俊 唐荣江 +2 位作者 李程 赖凡 肖飞 《装备制造技术》 2020年第3期58-62,共5页

针对某商用车发动机舱内空滤出气管的热害问题,采用计算流体力学方法,建立了发动机舱内流场的k-e湍流模型,对机舱内部的流场及温度场进行仿真分析,并对模型的准确性进行了试验验证。在此基础上,根据空滤出气管的材料耐温试验结果,提出... 针对某商用车发动机舱内空滤出气管的热害问题,采用计算流体力学方法,建立了发动机舱内流场的k-e湍流模型,对机舱内部的流场及温度场进行仿真分析,并对模型的准确性进行了试验验证。在此基础上,根据空滤出气管的材料耐温试验结果,提出了热害优化控制方案。结果表明,热源直对区域的温度降低约37℃,避免了被高温烤化。研究结果对发动机机舱的热害防治具有很好的参考价值。 展开更多

关键词 发动机舱 热害分析 流场分析 优化改进

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