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Changes in expression and secretion patterns of fibroblast growth factor 8 and Sonic Hedgehog signaling pathway molecules during murine neural stem/progenitor cell differentiation in vitro 被引量:4
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作者 Jiang lu kehuan lu Dongsheng Li 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2012年第22期1688-1694,共7页
In the present study, we investigated the dynamic expression of fibroblast growth factor 8 and Sonic Hedgehog signaling pathway related factors in the process of in vitro hippocampal neural stem/progenitor cell differ... In the present study, we investigated the dynamic expression of fibroblast growth factor 8 and Sonic Hedgehog signaling pathway related factors in the process of in vitro hippocampal neural stem/progenitor cell differentiation from embryonic Sprague-Dawley rats or embryonic Kunming species mice, using fluorescent quantitative reverse transcription-PCR and western blot analyses. Results demonstrated that the dynamic expression of fibroblast growth factor 8 was similar to fibroblast growth factor receptor 1 expression but not to other fibroblast growth factor receptors. Enzyme-linked immunosorbent assay demonstrated that fibroblast growth factor 8 and Sonic Hedgehog signaling pathway protein factors were secreted by neural cells into the intercellular niche. Our experimental findings indicate that fibroblast growth factor 8 and Sonic Hedgehog expression may be related to the differentiation of neural stem/progenitor cells. 展开更多
关键词 neural stem cells neural progenitor cells fibroblast growth factor 8 Sonic Hedgehog signalpathway SECRETION dynamic DIFFERENTIATION NEURONS neural regeneration
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Distribution and localization of fibroblast growth factor-8 in rat brain and nerve cells during neural stem/progenitor cell differentiation 被引量:4
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作者 Jiang lu Dongsheng Li kehuan lu 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2012年第19期1455-1462,共8页
The present study explored the distribution and localization of fibroblast growth factor-8 and its potential receptor, fibroblast growth factor receptor-3, in adult rat brain in vivo and in nerve cells during differen... The present study explored the distribution and localization of fibroblast growth factor-8 and its potential receptor, fibroblast growth factor receptor-3, in adult rat brain in vivo and in nerve cells during differentiation of neural stem/progenitor cells in vitro. Immunohistochemistry was used to examine the distribution of fibroblast growth factor-8 in adult rat brain in vivo. Localization of fibroblast growth factor-8 and fibroblast growth factor receptor-3 in cells during neural stem/progenitor cell differentiation in vitro was detected by immunofluorescence. Flow cytometry and immunofluorescence were used to evaluate the effect of an anti-fibroblast growth factor-8 antibody on neural stem/progenitor cell differentiation and expansion in vitro. Results from this study confirmed that fibroblast growth factor-8 was mainly distributed in adult midbrain, namely the substantia nigra, compact part, dorsal tier, substantia nigra and reticular part, but was not detected in the forebrain comprising the caudate putamen and striatum. Unusual results were obtained in retrosplenial locations of adult rat brain. We found that fibroblast growth factor-8 and fibroblast growth factor receptor-3 were distributed on the cell membrane and in the cytoplasm of nerve cells using immunohistochemistry and immunofluorescence analyses. We considered that the distribution of fibroblast growth factor-8 and fibroblast growth factor receptor-3 in neural cells corresponded to the characteristics of fibroblast growth factor-8, a secretory factor. Addition of an anti-fibroblast growth factor-8 antibody to cultures significantly affected the rate of expansion and differentiation of neural stem/progenitor cells. In contrast, addition of recombinant fibroblast growth factor-8 to differentiation medium promoted neural stem/progenitor cell differentiation and increased the final yields of dopaminergic neurons and total neurons. Our study may help delineate the important roles of fibroblast growth factor-8 in brain activities and neural stem/proge 展开更多
关键词 fibroblast growth factor-8 fibroblast growth factor receptor-3 neural stem/progenitor celldifferentiation dopaminergic neurons MIDBRAIN neural regeneration
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不同树龄楸树种质资源的嫁接成活影响因素 被引量:1
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作者 辛建华 许庆标 +10 位作者 刘建军 李建新 李莹 郁国强 楚克欢 鲁仪增 孙涛 张连合 张学勇 张现祥 贺燕 《山东林业科技》 2021年第4期71-74,共4页
为高效繁育保存楸树优树和古树种质资源,对来自4省22地市楸树母树的接穗嫁接成活率进行系统调查分析。研究表明,楸树优树和古树种质资源的平均嫁接成活率为30.4%,相应嫁接成活率均与其树龄和胸径呈极显著负相关,楸树接穗的年龄效应十分... 为高效繁育保存楸树优树和古树种质资源,对来自4省22地市楸树母树的接穗嫁接成活率进行系统调查分析。研究表明,楸树优树和古树种质资源的平均嫁接成活率为30.4%,相应嫁接成活率均与其树龄和胸径呈极显著负相关,楸树接穗的年龄效应十分明显。在开展其种质资源收集保存时,应尽可能采集基部萌条。 展开更多
关键词 楸树 树龄 嫁接成活率
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镇江市学龄前儿童生长发育和龋齿患病情况分析 被引量:1
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作者 汪科换 张燕 +4 位作者 李曼丽 唐华 陆玲 金龙涛 陈佳 《现代医药卫生》 2017年第23期3543-3545,共3页
目的了解镇江市城区学龄前儿童的生长发育和龋齿患病情况,为进一步改善学龄前儿童营养状况及保健重点提供指导依据。方法对2016年镇江市9所城区幼儿园3 105名学龄前儿童体检资料进行生长发育和龋齿患病情况分析。结果学龄前儿童的生长... 目的了解镇江市城区学龄前儿童的生长发育和龋齿患病情况,为进一步改善学龄前儿童营养状况及保健重点提供指导依据。方法对2016年镇江市9所城区幼儿园3 105名学龄前儿童体检资料进行生长发育和龋齿患病情况分析。结果学龄前儿童的生长发育总体水平良好,肥胖检出率为6.80%(211/3 105),低体质量检出率为0.39%(12/3 105),发育迟缓检出率为0.23%(7/3 105),龋齿检出率为51.76%(1 607/3 105),患龋齿儿童龋均数为5.40颗(8 680/1 607),肥胖、龋齿检出率随年龄增加呈上升趋势。结论镇江市城区学龄前儿童生长发育和营养状况较好,但需重视肥胖和龋齿问题。 展开更多
关键词 龋齿/流行病学 患病率 体格检查 生长和发育 儿童 学龄前 抽样研究 江苏
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添加小分子化合物CHIR99021维持水牛精原细胞的体外培养
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作者 刘亚茹 赵鹏伟 +4 位作者 卢克焕 陆阳清 梁兴伟 许惠艳 杨小淦 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期1169-1179,共11页
目前,水牛精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)体外培养系统因尚无法支持水牛(Bubalus bubalis)SSCs体外长久培养而限制了水牛雄性遗传资源的高效利用。通过添加合适小分子化合物优化水牛SSCs体外培养系统是一个可选方案。本研... 目前,水牛精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)体外培养系统因尚无法支持水牛(Bubalus bubalis)SSCs体外长久培养而限制了水牛雄性遗传资源的高效利用。通过添加合适小分子化合物优化水牛SSCs体外培养系统是一个可选方案。本研究推测GSK3β特异性抑制剂CHIR99021能促进水牛精原细胞的体外增殖和自我更新。为了验证此假说,本研究探索了添加不同浓度CHIR99021对水牛精原细胞体外培养效果的影响。分别将不同浓度CHIR99021(0,5,10,20μmol/L)添加到水牛精原细胞体外培养细胞培养液中,设置4个试验组,体外培养7 d后收集细胞,进行实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)和免疫荧光染色细胞计数。RT-qPCR结果表明,添加10、20μmol/L的CHIR99021显著提高了SSCs特异性表达基因(PLZF,Nanos2)和增殖相关基因(CCND1,CCNE1)的表达水平;显著降低了分化相关基因(DMRT1,DAZL)和氧化相关基因(CAT,SOD3)的表达水平。通过免疫荧光染色进行DDX4^(+)和PGP9.5^(+)细胞计数,发现添加10μmol/L CHIR99021显著增加了精原细胞数量。以上结果说明,在体外培养系统中添加CHIR99021能有效维持水牛精原细胞的SSCs分子特征,促进其体外增殖,显著改善了水牛精原细胞体外培养条件。本研究能为利用小分子化合物优化水牛SSCs体外培养系统提供重要参考。 展开更多
关键词 水牛 精原细胞 体外培养 CHIR99021
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广西巴马小香猪体细胞克隆 被引量:2
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作者 朱向星 孙俊丽 +4 位作者 谢炳坤 廖玉英 卢克焕 梁世忠 卢晟盛 《生物资源》 CAS 2018年第5期383-390,共8页
本研究旨在检验新生广西巴马小香猪肾脏成纤维细胞支持克隆胚胎完全的体内发育潜能,亦即能通过其构建出存活的克隆猪,从而为克隆技术在广西巴马小香猪资源保存和开发上的应用奠定基础。首先制备新生雄性广西巴马小香猪肾脏成纤维细胞,... 本研究旨在检验新生广西巴马小香猪肾脏成纤维细胞支持克隆胚胎完全的体内发育潜能,亦即能通过其构建出存活的克隆猪,从而为克隆技术在广西巴马小香猪资源保存和开发上的应用奠定基础。首先制备新生雄性广西巴马小香猪肾脏成纤维细胞,用其制备体细胞核移植胚胎,追踪观察体细胞核移植胚胎体外发育潜能,最后通过胚胎移植检验其完全的体内发育潜能。实验结果表明,制备的新生雄性广西巴马小香猪肾脏成纤维细胞具有良好的细胞增殖活性,用其制备的体细胞核移植胚胎分裂率和囊胚率分别为77.7%(334/430)和16.5%(71/430),将1 658枚克隆胚胎移植给6头代孕母猪,其中2头妊娠并最终产下8头存活雄性克隆小猪和3头死胎,整体克隆效率为0.66%,存活克隆猪健康状况良好。本研究表明,新生猪肾脏成纤维细胞是一种理想的用于生产体细胞克隆广西巴马小香猪的细胞资源。 展开更多
关键词 广西巴马小香猪 体细胞核移植 体细胞克隆 肾脏成纤维细胞 胚胎移植
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鸡输卵管上皮细胞体外分离培养的研究 被引量:2
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作者 杨文豪 孙娟娟 +10 位作者 莫丽芬 谢龙 陈东阳 濮黎萍 彭腊如 黄振文 杨小淦 许惠艳 张明 卢克焕 陆阳清 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期1089-1093,共5页
鸡输卵管上皮细胞是卵清蛋白的主要分泌细胞,是研究输卵管特异表达蛋白调控的重要工具。在以往的研究中,多采用普通DMEM培养液对鸡输卵管上皮细胞进行分离与培养,容易造成其自身特性在体外培养过程中的改变。本研究我们优化了细胞分离方... 鸡输卵管上皮细胞是卵清蛋白的主要分泌细胞,是研究输卵管特异表达蛋白调控的重要工具。在以往的研究中,多采用普通DMEM培养液对鸡输卵管上皮细胞进行分离与培养,容易造成其自身特性在体外培养过程中的改变。本研究我们优化了细胞分离方法,发现从输卵管漏斗部组织分离的输卵管上皮细胞增殖较快;用鸡输卵管上皮细胞培养基相比DMEM更适合促进细胞生长;与胰酶相比,用Accutase消化酶进行细胞传代,有利于输卵管上皮细胞特性维持。对所获得的输卵管上皮细胞鉴定发现,己烯雌酚能促进卵清蛋白的表达,说明分离培养的细胞保持了鸡输卵管上皮细胞特性。本研究建立的方法为输卵管特异表达蛋白调控以及家禽生物反应器的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 输卵管上皮细胞 卵清蛋白 家禽生物反应器
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低氧对体外培养鸡原始生殖细胞凋亡的影响 被引量:1
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作者 莫丽芬 孙娟娟 +7 位作者 杨文豪 谢龙 陈东阳 濮黎萍 黄振文 彭腊如 卢克焕 陆阳清 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期1573-1578,共6页
本研究的目的是通过低氧处理体外培养的鸡原始生殖细胞(Primordial germ cell)优化培养系统,降低细胞凋亡率,提高细胞活力,为高效生产转基因鸡提供科学依据。研究采用低氧气体(1%O2)分别处理鸡PGCs 6 h、12 h、24 h,随后用q-PCR检测凋... 本研究的目的是通过低氧处理体外培养的鸡原始生殖细胞(Primordial germ cell)优化培养系统,降低细胞凋亡率,提高细胞活力,为高效生产转基因鸡提供科学依据。研究采用低氧气体(1%O2)分别处理鸡PGCs 6 h、12 h、24 h,随后用q-PCR检测凋亡相关基因Caspase3的表达。与常氧组(21%O2)相比,1%O2-24h低氧组Caspase3显著下调(p<0.05)。进一步检测1%O2-24 h低氧组p53和Bcl2的表达情况,结果显示p53表达显著下调(p<0.05),Bcl2表达无显著差异。采用流式细胞术检测细胞凋亡比例,低氧组((13.5±0.8)%)凋亡比例低于常氧组((21.8±2.1)%)。采用q-PCR,免疫荧光染色,细胞迁移鉴定低氧处理后的鸡PGCs生物学特性,发现其仍保持生殖细胞的生物学特性。本研究表明,在体外培养条件下,1%O2低氧处理鸡PGCs 24 h能抑制细胞凋亡,且不改变其生物学特性。 展开更多
关键词 原始生殖细胞 低氧 细胞凋亡
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芍药主根短截分株繁殖试验初探 被引量:1
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作者 刘天裕 邢广萍 +6 位作者 吴全宇 张颖 孙凯 宋雨篷 楚克欢 段冰冰 卢洁 《山东林业科技》 2021年第3期48-49,56,共3页
为提高芍药繁殖系数,降低繁殖成本,开展了芍药主根短截分株繁殖试验。以‘胭脂点玉’、‘大富贵’、‘兰富士’芍药为试验材料,以不剪根处理为对照,设保留主根长度3 cm、6 cm、9 cm、12 cm 4个处理。试验结果表明,主根长度保留6 cm,能... 为提高芍药繁殖系数,降低繁殖成本,开展了芍药主根短截分株繁殖试验。以‘胭脂点玉’、‘大富贵’、‘兰富士’芍药为试验材料,以不剪根处理为对照,设保留主根长度3 cm、6 cm、9 cm、12 cm 4个处理。试验结果表明,主根长度保留6 cm,能够显著提高主根数量、主枝数量,生长势最强,分株繁殖时分株苗数量可增加100%以上,显著提高了繁殖系数。该方法操作简单,实用性强,便于在生产中试验推广。 展开更多
关键词 芍药 主根短截 分株繁殖 繁殖系数
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桂科Ⅰ号成年公猪体细胞核移植胚胎的体外生产
10
作者 聂骏宇 农素群 +11 位作者 朱向星 谢炳坤 全守能 王雪芳 肖鹏 许惠艳 杨小淦 陆阳清 张明 卢克焕 廖玉英 卢晟盛 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期2329-2335,共7页
目前,关于桂科Ⅰ号猪体细胞核移植胚胎体外发育的研究尚未见报道。本研究结果表明,桂科Ⅰ号成年公猪来源的皮肤成纤维细胞(adult boar fibroblast cell,ABFC)和刚出生小公猪来源的皮肤成纤维细胞(newborn boar fibroblast cell,NBFC)对... 目前,关于桂科Ⅰ号猪体细胞核移植胚胎体外发育的研究尚未见报道。本研究结果表明,桂科Ⅰ号成年公猪来源的皮肤成纤维细胞(adult boar fibroblast cell,ABFC)和刚出生小公猪来源的皮肤成纤维细胞(newborn boar fibroblast cell,NBFC)对体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)胚胎的体外发育没有明显影响;在体外环境培养下,一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂—Scriptaid(SCR)对桂科Ⅰ号公猪SCNT胚胎的囊胚率具有促进作用。研究进行3个实验,实验一结果表明,细胞呈现典型的成纤维细胞形态,且生长呈现S型;实验二结果表明,通过将ABFC与NBFC注射到去核的卵母细胞制作SCNT胚胎,ABFC和NBFC来源的桂科Ⅰ号公猪SCNT胚胎的融合率、分裂率、囊胚率和囊胚细胞数没有明显的差异(53.2%vs 61.7%,p>0.05;72.3%vs 75.7%,p>0.05;11.9%vs 11.7%,p>0.05;60.7 vs 57.5,p>0.05);实验三结果表明,通过500 nmol/L SCR处理ABFC来源的SCNT胚胎,与对照组相比,处理组的分裂率和囊胚细胞数没有明显的差异(82.6%vs 80.1%,p>0.05;42.9 vs 41.4,p>0.05);但添加500 nmol/L SCR的ABFC来源的SCNT胚胎的囊胚率明显比对照组的高(21.6%vs 11.5%,p<0.05)。数据表明桂科Ⅰ号成年公猪体细胞可作为供体细胞生产克隆胚胎,并且在体外环境培养下,通过500 nmol/L SCR处理极大地提高克隆胚胎的囊胚率,本研究可为下一步生产存活的桂科Ⅰ号SCNT猪奠定基础。 展开更多
关键词 桂科Ⅰ号 体细胞核移植 胚胎 组蛋白去乙酰化酶抑制剂
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转基因诱导永生化鸡细胞系的建立
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作者 朱姿英 卢克焕 +1 位作者 SteveLStice 陆阳清 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期3498-3505,共8页
传统上从鸡胚中分离病毒用于疫苗的生产常常不能满足需求,研究从体外培养的细胞中分离病毒的途径成为当前疫苗生产领域的迫切需要。本研究利用体细胞诱导重编程技术建立永生化细胞系,为应用于疫苗制备等研究和生产奠定基础。通过慢病毒... 传统上从鸡胚中分离病毒用于疫苗的生产常常不能满足需求,研究从体外培养的细胞中分离病毒的途径成为当前疫苗生产领域的迫切需要。本研究利用体细胞诱导重编程技术建立永生化细胞系,为应用于疫苗制备等研究和生产奠定基础。通过慢病毒载体转染转录调控因子(NANOG, LIN28和C-MYC)重编程鸡成纤维细胞,并稳定培养至100代,获得永生化的细胞,而后逐步去除细胞因子、血清等添加物,优化细胞系培养体系,并对细胞驯化实现悬浮生长,以获得单位体积最大密度的细胞。研究结果表明:通过转基因将NANOG,LIN28和C-MYC 3个因子整合入细胞中表达,细胞系对碱性磷酸酶染色呈阳性反应,端粒逆转录酶(cTERT)基因在细胞系中显著上调,并稳定培养至100代,使得这些细胞具有自我更新特性和永生化的潜能。确定了培养基中的血清替代物KSR浓度为20%,并撤除了培养基中bFGF等生长因子,为细胞大规模培养应用提供了可能。永生细胞实现悬浮生长,细胞生长倍增时间为21.71 h,最大密度为1.3×106 cells/m L。因此,我们通过重编程技术建立了一株稳定的永生化细胞系,并且使它能在低浓度KSR中悬浮培养,这为疫苗制备等研究和生产提供科学依据。 展开更多
关键词 诱导型重编程 鸡永生化细胞系 无血清培养 慢病毒转染 悬浮培养
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