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Cortactin在应力诱导的气道黏液分泌过程中的介导作用 被引量：2
1
作者 吴海丰 李琪 +3 位作者 juliy M perelman Victor P Kolosov Andrei Shpakou 周向东 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1354-1357,共4页
目的:探讨皮层肌动蛋白结合肽(Cortactin)对剪应力(SS)诱导的气道黏液高分泌的影响及其关键靶点。方法:体外培养气道上皮细胞Beas-2B,并随机分为6组:空白对照组、SS组、SS+Wild-Cortactin组、SS+pcDNA3-Cortactin 421 -MU组、SS+pcDNA3-... 目的:探讨皮层肌动蛋白结合肽(Cortactin)对剪应力(SS)诱导的气道黏液高分泌的影响及其关键靶点。方法:体外培养气道上皮细胞Beas-2B,并随机分为6组:空白对照组、SS组、SS+Wild-Cortactin组、SS+pcDNA3-Cortactin 421 -MU组、SS+pcDNA3-Cortactin 466 -MU组、SS+pcDNA3-Cortactin 482 -MU组。用Western blot法检测Cortactin蛋白、p-Cortactin蛋白表达水平,RT-PCR、ELISA法分别检测MUC5AC 转录水平和MUC5AC的分泌量。结果:转染Cortactin各型重组表达载体后细胞Cortactin蛋白明显增加,提示转染成功。转染Wild-Cortactin后再予剪应力处理,细胞的p-Cortactin蛋白、MUC5AC mRNA及蛋白表达显著增加。而转染pcDNA3-Cortactin 466 -MU后,细胞p-Cortactin蛋白、细胞培养上清液MUC5AC的相对分泌量显著下降,但MUC5AC的转录水平无明显影响。结论:在剪应力刺激诱导的气道上皮细胞MUC5AC高分泌过程中,Cortactin具有重要的介导作用,且Y466为其介导该过程的潜在关键作用靶点。 展开更多
关键词 皮层肌动蛋白结合肽 黏蛋白5AC 气道剪应力
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白细胞介素-1受体相关激酶通过TLR-4/MyD88信号通路调控内毒素诱导的气道黏液高分泌 被引量：3
2
作者 何明欣 张华 +3 位作者 周向东 尤列·皮尔曼 维克多·科罗索夫 李琪 《中国呼吸与危重监护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期50-54,共5页
目的探讨白细胞介素-1受体相关激酶(interleukin-1 receptor associated kinase,IRAK)在细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的气道黏液高分泌中的作用及其机制。方法采用特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染,下调Tol... 目的探讨白细胞介素-1受体相关激酶(interleukin-1 receptor associated kinase,IRAK)在细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的气道黏液高分泌中的作用及其机制。方法采用特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染,下调Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)-4、IRAK在人气道上皮细胞株BEAS-2B中的表达,采用逆转录–聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测细胞内黏蛋白5AC(mucin 5AC,MUC5AC)mRNA转录水平,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞上清液中MUC5AC分泌量。利用蛋白印迹法检测胞内信号蛋白IRAK磷酸化水平及核因子(nuclear factor,NF)-κB p65的核转位情况。结果经LPS刺激后BEAS-2B细胞内IRAK磷酸化水平显著增高,使用siRNA下调TLR-4表达,可部分降低IRAK磷酸化水平(P<0.05);经LPS刺激,NF-κB p65趋向核内分布,使用siRNA下调TLR-4或IRAK可部分削弱NF-κB p65核内分布(P<0.05);RT-PCR及ELISA结果也显示,经LPS刺激后TLR-4缺陷株MUC5AC mRNA转录水平(0.36±0.05)、分泌量[(0.33±0.04)μg/L],IRAK缺陷株MUC5AC mRNA转录水平(0.48±0.05)、分泌量[(0.42±0.05)μg/L],IRAK激酶抑制剂组MUC5AC mRNA转录水平(0.57±0.07)、分泌量[(0.51±0.06)μg/L]均分别低于野生型BEAS-2B组[0.82±0.09,(0.76±0.09)μg/L;均P<0.05]。结论IRAK作为TLR受体依赖信号通路上游的重要调控蛋白,参与LPS诱导的气道黏液高分泌。 展开更多
关键词 白细胞介素-1受体相关激酶 脂多糖 气道黏液高分泌
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冷刺激对细颗粒物致气道上皮炎症反应的增敏效应及冷诱导RNA结合蛋白的转录后调控机制 被引量：3
3
作者 曾曼 李琪 +3 位作者 周向东 维克多·科罗索夫 尤立·皮尔曼 安德列·斯帕科 《中国呼吸与危重监护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期195-202,共8页
目的探讨冷刺激对细颗粒物(PM2.5)致气道上皮炎症反应的增敏效应及冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)可能的转录后调控机制。方法采用在体、离体实验,并结合人体手术切除肺组织标本的观察,将动物模型和气道上皮细胞16HBE各分为4组(每组n=8),即空... 目的探讨冷刺激对细颗粒物(PM2.5)致气道上皮炎症反应的增敏效应及冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)可能的转录后调控机制。方法采用在体、离体实验,并结合人体手术切除肺组织标本的观察,将动物模型和气道上皮细胞16HBE各分为4组(每组n=8),即空白对照组、5℃/18℃组、PM2.5组、5℃/18℃+PM2.5组,分别以酶联免疫吸附试验、实时荧光定量聚合酶链反应、蛋白印迹检测各组气道上皮细胞和大鼠支气管/肺组织的代表性炎症因子及CIRP mRNA和蛋白的表达规律,并进一步采用细胞免疫荧光技术观察CIRP变化的时相动力学规律。同时采用免疫组织化学的方法观察各组大鼠及人体支气管/肺组织CIRP的定位和表达规律。结果在体实验中,相较于对照组,5℃组和PM2.5组CIRP、白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α的mRNA及蛋白均呈现表达水平增高的现象(均P<0.05),而5℃组+PM2.5组相应的mRNA及蛋白表达则最为显著(均P<0.01)。在离体实验的各组实验结果中亦出现同样的规律。CIRP主要定位于胞核内,相较于对照组,18℃组和PM2.5组均出现CIRP胞内移位趋势,而18℃+PM2.5组CIRP胞内移位现象最为明显。在大鼠支气管/肺组织的免疫组织化学中,5℃组CIRP的表达高于对照组,PM2.5组CIRP的表达量相较于对照组也有所增加,而5℃+PM2.5组CIRP的表达量变化最为显著。此外,CIRP在正常人群和慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)患者支气管上皮黏膜中均有表达,且主要位于气道黏膜上皮细胞胞核内。其中慢阻肺患者CIRP的表达量较正常人群显著升高。结论冷刺激对PM2.5所致的气道上皮炎症反应有增敏效应,而CIRP由胞核移位至胞浆形成的转录后调控可能是其重要机制。 展开更多
关键词 冷诱导RNA结合蛋白 气道炎症 细颗粒物 冷刺激
原文传递
内质网应激通路需肌醇酶1α/X盒结合蛋白1在中性粒细胞弹力蛋白酶诱导的气道黏液分泌中的作用 被引量：3
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作者 李琪 周向东 +2 位作者 曾曼 Victor P.KOLOSOV juliy M.perelman 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期21-27,共7页
目的·探讨内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)反应在中性粒细胞弹力蛋白酶(neutrophil elastase,NE)诱导人气道上皮细胞黏蛋白5AC(mucin 5AC,MUC5AC)分泌中的作用及机制。方法·培养人气道上皮细胞HBE16,分别给予... 目的·探讨内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)反应在中性粒细胞弹力蛋白酶(neutrophil elastase,NE)诱导人气道上皮细胞黏蛋白5AC(mucin 5AC,MUC5AC)分泌中的作用及机制。方法·培养人气道上皮细胞HBE16,分别给予活性氧(reactive oxygen species,ROS)抑制剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)、ERS抑制剂4-苯基丁酸(4-phenylbutyrate,4-PBA)预处理,或分别转染需肌醇酶1α(inositol-requiring kinase 1α,IRE-1α)小干扰RNA(siRNA)、X盒结合蛋白1(X-boxbinding protein 1,XBP-1)siRNA,再予以NE刺激;同时设单纯NE组和空白对照组。试剂盒检测ROS的生成水平;Westernblotting检测干预后ERS相关信号分子葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶(phosphorylated protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase,pPERK)、活化转录因子6(activating transcription factor 6,ATF6)、磷酸化IRE-1α(pIRE-1α)及XBP-1蛋白表达量的变化;实时荧光定量PCR检测剪切的XBP-1(XBP-1s)mRNA水平;ELISA和免疫荧光检测MUC5AC在各组细胞中的蛋白表达情况。结果·与空白对照组相比,NE刺激24 h后细胞ROS含量增加,GRP78、ATF6、pPERK及pIRE-1α蛋白水平均显著升高(均P<0.05),XBP-1s mRNA及蛋白表达也明显增加(均P<0.05),同时MUC5AC蛋白表达增加(均P<0.05);NAC及4-PBA预处理后均使上述ERS相关蛋白表达较单纯NE组降低(均P<0.05),MUC5AC蛋白水平降低(均P<0.05);转染IRE-1αsiRNA或XBP-1 siRNA,细胞中MUC5AC蛋白表达也较单纯NE组明显降低,同时XBP-1s mRNA及蛋白表达也有明显下降(均P<0.05)。结论·NE通过产生ROS引起ERS反应,诱导MUC5AC蛋白表达及分泌增加,ERS通路IRE-1α/XBP-1在其中发挥着一定的作用。 展开更多
关键词 内质网应激 需肌醇酶1α X盒结合蛋白1 中性粒细胞弹力蛋白酶 活性氧 黏蛋白5AC
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皮层肌动结合蛋白不同位点磷酸化对人气道上皮细胞黏蛋白5AC分泌的影响
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作者 李琪 周向东 +3 位作者 曾曼 钟有清 维克多.科罗索夫 尤列.皮尔曼 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期1-8,共8页
目的:了解皮层肌动结合蛋白(cortical actin-binding protein,又称cortactin)在人气道上皮细胞黏蛋白(mucin,MUC)5AC分泌中的作用及不同磷酸化位点对其的影响。方法:培养人气道上皮细胞HBE16,以皮层肌动结合蛋白不同磷酸化位点突变载体... 目的:了解皮层肌动结合蛋白(cortical actin-binding protein,又称cortactin)在人气道上皮细胞黏蛋白(mucin,MUC)5AC分泌中的作用及不同磷酸化位点对其的影响。方法:培养人气道上皮细胞HBE16,以皮层肌动结合蛋白不同磷酸化位点突变载体转染细胞,并分为空白对照组、剪应力刺激组、剪应力+增强绿色荧光蛋白质粒(enhanced greenfluorescentproteinplasmid,p EGFP)-N1组、剪应力+p EGFP-N1-cortactin(Cort)组、剪应力+p EGFP-N1-Cort-Y421A组、剪应力+p EGFP-N1-Cort-Y470A组及剪应力+p EGFP-N1-Cort-Y486A组,剪应力设定为4 dynes/cm^2。采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、real-time PCR法测定转染前后各组细胞及培养上清中MUC5AC蛋白和m RNA水平,Western印迹检测各组皮层肌动结合蛋白及磷酸化皮层肌动结合蛋白含量;异硫氰酸荧光素(fl uorescein isothiocyanate,FITC)标记的鬼笔环肽染色观察丝状肌动蛋白(fi lamentous actin,F-actin)的分布情况。结果:4 dynes/cm^2剪应力刺激30 min后,细胞中磷酸化皮层肌动结合蛋白表达增加,在2 h时表达水平最高;剪应力刺激2 h后,MUC5AC m RNA表达增强,细胞及培养上清中MUC5AC的含量与空白对照组相比,各组均显著增加(均P<0.05);与剪应力刺激组相比,剪应力+p EGFP-N1-cortactin(Cort)组的细胞培养上清液中MUC5AC蛋白含量显著增加,F-actin在胞膜的分布也明显增多(均P<0.05),而胞质内MUC5AC蛋白及MUC5AC m RNA水平变化不大。与剪应力+p EGFP-N1-Cort组相比,剪应力+p EGFP-N1-Cort-Y421A组、剪应力+p EGFP-N1-Cort-Y470A组培养上清液中的MUC5AC蛋白含量有明显降低,F-actin在胞膜的聚集也有所减少(均P<0.05),而剪应力+p EGFP-N1-Cort-Y486A组中MUC5AC含量变化不明显(P>0.05)。结论:皮层肌动结合蛋白参与了剪应力诱导产生的人气道上皮细胞MUC5AC蛋白分泌,Tyr421和Tyr470位点磷酸化在其中可能起重要的作用。 展开更多
关键词 黏蛋白类 分泌 剪应力 皮层肌动结合蛋白 丝状肌动蛋白
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