背景:肿瘤坏死因子受体相关蛋白1(TRAP1)是线粒体特异性热休克蛋白90家族的同源基因。大量研究表明其过量表达与多种癌症的发生密切相关。但其在喉鳞癌发生中的作用及作用机制目前还不清楚。目的:探讨RNA干扰能否靶向抑制TRAP1过表达以...背景:肿瘤坏死因子受体相关蛋白1(TRAP1)是线粒体特异性热休克蛋白90家族的同源基因。大量研究表明其过量表达与多种癌症的发生密切相关。但其在喉鳞癌发生中的作用及作用机制目前还不清楚。目的:探讨RNA干扰能否靶向抑制TRAP1过表达以及对人喉癌干细胞增殖和凋亡的作用效果。方法:采用免疫磁珠技术从人喉癌Hep-2细胞系中分选出CD133^+CD44^+喉癌干细胞。设计及合成TRAP1的sh RNA序列,Lipofectamine^(TM) 2000转染CD133^+CD44^+喉癌干细胞。CCK-8增殖实验、集落形成实验、流式细胞术检测干扰TRAP1基因表达对CD133^+CD44^+喉癌干细胞增殖和凋亡的影响,采用分光光度法检测细胞内caspase-3,caspase-8,caspase-9活性。结果与结论:(1)TRAP1 sh RNA转染的CD133^+CD44^+喉癌干细胞内TRAP1基因和蛋白表达明显下调(P<0.01);(2)与空白对照组和转染空质粒阴性对照组比较,TRAP1表达下调抑制了CD133^+CD44^+喉癌干细胞增殖和集落形成能力(P<0.05);(3)与空白对照组和转染空质粒阴性对照组比较,TRAP1表达下调增加CD133^+CD44^+喉癌干细胞凋亡率(P<0.05);(4)TRAP1 sh RNA介导细胞凋亡与caspase-3,caspase-8和caspase-9激活有关;(5)结果提示RNA干扰TRAP1表达可抑制CD133^+CD44^+喉癌干细胞生长并促进细胞凋亡。TRAP1可能为喉鳞癌治疗的基因靶点。展开更多
文摘背景:肿瘤坏死因子受体相关蛋白1(TRAP1)是线粒体特异性热休克蛋白90家族的同源基因。大量研究表明其过量表达与多种癌症的发生密切相关。但其在喉鳞癌发生中的作用及作用机制目前还不清楚。目的:探讨RNA干扰能否靶向抑制TRAP1过表达以及对人喉癌干细胞增殖和凋亡的作用效果。方法:采用免疫磁珠技术从人喉癌Hep-2细胞系中分选出CD133^+CD44^+喉癌干细胞。设计及合成TRAP1的sh RNA序列,Lipofectamine^(TM) 2000转染CD133^+CD44^+喉癌干细胞。CCK-8增殖实验、集落形成实验、流式细胞术检测干扰TRAP1基因表达对CD133^+CD44^+喉癌干细胞增殖和凋亡的影响,采用分光光度法检测细胞内caspase-3,caspase-8,caspase-9活性。结果与结论:(1)TRAP1 sh RNA转染的CD133^+CD44^+喉癌干细胞内TRAP1基因和蛋白表达明显下调(P<0.01);(2)与空白对照组和转染空质粒阴性对照组比较,TRAP1表达下调抑制了CD133^+CD44^+喉癌干细胞增殖和集落形成能力(P<0.05);(3)与空白对照组和转染空质粒阴性对照组比较,TRAP1表达下调增加CD133^+CD44^+喉癌干细胞凋亡率(P<0.05);(4)TRAP1 sh RNA介导细胞凋亡与caspase-3,caspase-8和caspase-9激活有关;(5)结果提示RNA干扰TRAP1表达可抑制CD133^+CD44^+喉癌干细胞生长并促进细胞凋亡。TRAP1可能为喉鳞癌治疗的基因靶点。
