【目的】研究旨在对努比亚山羊大脑富集Ras同源物(Ras homolog enriched in brain,Rheb)基因进行克隆和分析,并构建其真核表达载体,为进一步揭示Rheb对努比亚山羊骨骼肌调控的分子机理奠定基础。【方法】试验采用RT-PCR方法从努比亚山...【目的】研究旨在对努比亚山羊大脑富集Ras同源物(Ras homolog enriched in brain,Rheb)基因进行克隆和分析,并构建其真核表达载体,为进一步揭示Rheb对努比亚山羊骨骼肌调控的分子机理奠定基础。【方法】试验采用RT-PCR方法从努比亚山羊背最长肌组织中扩增Rheb基因,经琼脂糖凝胶电泳及测序验证正确后进行生物信息学分析,同时构建该基因真核表达载体,转染细胞后进行实时荧光定量PCR检测来验证所构建载体的正确性。【结果】努比亚山羊Rheb基因编码区序列长度为555 bp,编码184个氨基酸,Rheb蛋白分子式为C 910 H 1456 N 236 O 279 S 6,分子质量为20359.34 u,原子总数为2887,理论等电点为5.93。Rheb蛋白属于稳定的亲水性蛋白,不包含跨膜结构域。蛋白二级结构预测结果显示,努比亚山羊Rheb蛋白中α-螺旋、β-转角、延伸链和无规则卷曲分别占40.76%、7.07%、22.83%和29.35%。构建的真核表达载体pcDNA3.1-Rheb转染山羊骨骼肌细胞后,与空载体组相比,Rheb基因表达量极显著升高(P<0.01)。【结论】本试验成功克隆努比亚山羊Rheb基因编码区序列,并构建pcDNA3.1-Rheb真核表达载体,这为深入理解Rheb基因在努比亚山羊肌肉中的作用提供了理论支持。展开更多
为增强固氮酶活性以提高现有固氮菌的固氮能力,采用常压室温等离子体(atmospheric and room temperature plasma,ARTP)诱变技术处理褐球固氮菌(Azotobacter chroococcum)CICC21686,用乙炔还原法筛选具有高固氮酶活性的突变株28s-20,并...为增强固氮酶活性以提高现有固氮菌的固氮能力,采用常压室温等离子体(atmospheric and room temperature plasma,ARTP)诱变技术处理褐球固氮菌(Azotobacter chroococcum)CICC21686,用乙炔还原法筛选具有高固氮酶活性的突变株28s-20,并观察该突变株酶活的遗传稳定性;通过梯度温度和pH培养,探究高酶活突变株的生物学活性;采用盆栽试验,探究突变株对玉米植株干重及全氮量的影响。结果表明,复筛获得突变株28s-20的固氮酶活较出发菌株提高了101.72%;经5次传代,证实该菌株具有良好的遗传稳定性;突变株最适生长温度为28℃,培养基初始pH为7.5;与野生株相比,突变株显著增加玉米干重及全氮量,分别提高21.16%和34.36%。诱变高酶活菌株为褐球固氮菌的菌种优化及农业生物固氮提供了技术支持。展开更多
文摘【目的】研究旨在对努比亚山羊大脑富集Ras同源物(Ras homolog enriched in brain,Rheb)基因进行克隆和分析,并构建其真核表达载体,为进一步揭示Rheb对努比亚山羊骨骼肌调控的分子机理奠定基础。【方法】试验采用RT-PCR方法从努比亚山羊背最长肌组织中扩增Rheb基因,经琼脂糖凝胶电泳及测序验证正确后进行生物信息学分析,同时构建该基因真核表达载体,转染细胞后进行实时荧光定量PCR检测来验证所构建载体的正确性。【结果】努比亚山羊Rheb基因编码区序列长度为555 bp,编码184个氨基酸,Rheb蛋白分子式为C 910 H 1456 N 236 O 279 S 6,分子质量为20359.34 u,原子总数为2887,理论等电点为5.93。Rheb蛋白属于稳定的亲水性蛋白,不包含跨膜结构域。蛋白二级结构预测结果显示,努比亚山羊Rheb蛋白中α-螺旋、β-转角、延伸链和无规则卷曲分别占40.76%、7.07%、22.83%和29.35%。构建的真核表达载体pcDNA3.1-Rheb转染山羊骨骼肌细胞后,与空载体组相比,Rheb基因表达量极显著升高(P<0.01)。【结论】本试验成功克隆努比亚山羊Rheb基因编码区序列,并构建pcDNA3.1-Rheb真核表达载体,这为深入理解Rheb基因在努比亚山羊肌肉中的作用提供了理论支持。
文摘为增强固氮酶活性以提高现有固氮菌的固氮能力,采用常压室温等离子体(atmospheric and room temperature plasma,ARTP)诱变技术处理褐球固氮菌(Azotobacter chroococcum)CICC21686,用乙炔还原法筛选具有高固氮酶活性的突变株28s-20,并观察该突变株酶活的遗传稳定性;通过梯度温度和pH培养,探究高酶活突变株的生物学活性;采用盆栽试验,探究突变株对玉米植株干重及全氮量的影响。结果表明,复筛获得突变株28s-20的固氮酶活较出发菌株提高了101.72%;经5次传代,证实该菌株具有良好的遗传稳定性;突变株最适生长温度为28℃,培养基初始pH为7.5;与野生株相比,突变株显著增加玉米干重及全氮量,分别提高21.16%和34.36%。诱变高酶活菌株为褐球固氮菌的菌种优化及农业生物固氮提供了技术支持。
