巢式PCR和实时荧光定量PCR在莱姆病宿主动物监测中的应用评价 被引量：13

1

作者 张琳 苗广青 +2 位作者 侯学霞 李博 郝琴 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS 2018年第5期425-427,共3页

目的应用巢式PCR和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测啮齿动物中伯氏疏螺旋体的带菌率,对2种方法在莱姆病宿主动物监测中的应用效果进行评价。方法2017年7-9月,在新疆维吾尔自治区(新疆)古尔图地区野外放置鼠夹,采集啮齿动物,并鉴别种类... 目的应用巢式PCR和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测啮齿动物中伯氏疏螺旋体的带菌率,对2种方法在莱姆病宿主动物监测中的应用效果进行评价。方法2017年7-9月,在新疆维吾尔自治区(新疆)古尔图地区野外放置鼠夹,采集啮齿动物,并鉴别种类;采用巢式PCR和qRT-PCR 2种方法检测标本携带伯氏疏螺旋体情况,并对2种方法的检测结果进行统计学分析。对巢式PCR检测的阳性标本进行测序和序列比对分析,以初步确定伯氏疏螺旋体的基因型别。结果共检测啮齿动物标本134份,巢式PCR和qRT-PCR检测阳性率分别为13.43%和12.69%,差异无统计学意义(χ~2=0.000,P=1.000);阳性标本均为长尾黄鼠,总阳性率为20.15%,其中8份标本经2种方法检测结果均为阳性;10份巢式PCR检测为阳性的标本经qRT-PCR检测为阴性,9份qRT-PCR检测为阳性的标本经巢式PCR检测为阴性。采用q RT-PCR方法共检出伯氏疏螺旋体阳性17份,阳性样本Ct值为33.49~37.89。结论2种方法均可用于啮齿动物的伯氏疏螺旋体检测,同时使用2种方法可提高伯氏疏螺旋体的检出率。巢式PCR方法检测可以了解新疆古尔图地区啮齿动物感染伯氏疏螺旋体的基因型别;而qRT-PCR方法则可对标本中的细菌载量进行定量分析。 展开更多

关键词 伯氏疏螺旋体 啮齿动物 巢式聚合酶链式反应 实时荧光定量聚合酶链式反应

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新疆维吾尔自治区喀什地区亚洲璃眼蜱携带病原菌研究 被引量：5

2

作者 包子豪 张琳 +3 位作者 侯学霞 段立科 王远志 郝琴 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期10-19,共10页

目的采用16S rDNA V3-V4区高通量测序,并结合特异基因的PCR检测,研究新疆维吾尔自治区喀什地区亚洲璃眼蜱体内菌群特征及常见病原菌携带情况,为当地蜱传疾病防控提供理论依据。方法于2021年5月在喀什地区巴楚县采用布旗法采集游离蜱342... 目的采用16S rDNA V3-V4区高通量测序,并结合特异基因的PCR检测,研究新疆维吾尔自治区喀什地区亚洲璃眼蜱体内菌群特征及常见病原菌携带情况,为当地蜱传疾病防控提供理论依据。方法于2021年5月在喀什地区巴楚县采用布旗法采集游离蜱342只,经形态学和特异性16S rDNA检测鉴定蜱种;除228只用于分离培养外,其余114只提取全基因组DNA,采用Illumina Novaseq测序平台进行16S rDNA V3-V4区高通量测序,分析喀什地区亚洲璃眼蜱携带菌的种类及其相对丰度水平;根据新疆地区既往报道常见蜱媒病原菌分布情况及蜱种带菌特征,选取6种常见病原菌对其特异性基因进行PCR检测,分析各病原菌的携带情况,并与高通量测序结果进行比较分析。结果16S rDNA V3-V4区高通量测序分析显示1个样本携带贝纳柯克斯体;所有样本在属水平均检出立克次体属,16个样本检出无形体属,但缺少种水平注释;所有样本均未检出疏螺旋体。PCR法检测表明14只蜱携带伯氏疏螺旋体,7只蜱携带米氏疏螺旋体,3只蜱携带嗜吞噬细胞无形体,2只蜱携带贝纳柯克斯体,斑点热立克次体及查菲埃立克体未检出。结论与特异基因的PCR法相比,16S rDNA V3-V4区高通量测序能够同时检测多种病原体,但也存在其检测受限于数据库、无法检测到种水平等缺点。因此,在病原监测的实际应用中,两种方法应相互结合,才能更全面、准确的反应当地蜱媒病原菌的分布情况。 展开更多

关键词 高通量测序 PCR 病原菌 蜱

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16S rDNA全长高通量测序在蜱媒病原生物多样性研究中的应用 被引量：6

3

作者 杨小娜 张琳 +1 位作者 侯学霞 郝琴 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS 北大核心 2021年第4期404-411,共8页

目的利用16S核糖体DNA(16S rDNA)全长测序方法,结合实验室检测数据,研究蜱中病原微生物种群特点,为病原体控制提供依据。方法选取山西省祁县优势蜱种50只,经形态学和基因鉴定后,提取全基因组DNA,采用PacBio平台、高通量16S rDNA全长测... 目的利用16S核糖体DNA(16S rDNA)全长测序方法,结合实验室检测数据,研究蜱中病原微生物种群特点,为病原体控制提供依据。方法选取山西省祁县优势蜱种50只,经形态学和基因鉴定后,提取全基因组DNA,采用PacBio平台、高通量16S rDNA全长测序方法,分析蜱中微生物种类及各种群丰度情况;根据16S rDNA全长序列分析结果,利用PCR检测方法对可能存在的蜱媒病原体特异性基因进行鉴定,较为全面地分析蜱媒病原体携带情况。结果16S rDNA全长测序分析表明50只血蜱均携带贝氏柯克斯体、假单胞菌,8只血蜱携带嗜吞噬细胞无形体,有部分血蜱携带立克次体、埃立克体,但仅匹配到属一级的分类信息,无法确定所携带的基因种,在50只血蜱中未检出疏螺旋体。PCR检测结果表明,50只血蜱中检测到柯克斯体内共生体、伯氏疏螺旋体、米氏疏螺旋体和斑点热群立克次体。结论高通量16S rDNA全长测序分析可以同时检测出多种病原体,可提示当地的主要蜱媒致病菌,但也存在检测不全面、无法匹配到物种的缺点,与病原体特异检测方法相结合,能更全面地了解当地血蜱携带病原体的状况。 展开更多

关键词 16S核糖体DNA全长测序 实验室分子检测 蜱媒致病菌 生物多样性

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江西省吉安市微小扇头蜱携带病原菌检测及其分型研究

4

作者 曾予 刘志云 +4 位作者 段立科 侯学霞 张琳 贺丽娟 郝琴 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS 2024年第3期381-388,共8页

目的了解江西省吉安市寄生蜱种类及其病原菌携带情况。方法2022年6月-2023年6月在吉安市永新、吉安和永丰县的牛体表采集417只寄生蜱,通过形态学和16S rDNA特异基因对其进行种类鉴定。并采用普通PCR和巢式PCR检测蜱体内6类蜱传病原菌携... 目的了解江西省吉安市寄生蜱种类及其病原菌携带情况。方法2022年6月-2023年6月在吉安市永新、吉安和永丰县的牛体表采集417只寄生蜱,通过形态学和16S rDNA特异基因对其进行种类鉴定。并采用普通PCR和巢式PCR检测蜱体内6类蜱传病原菌携带状况,包括伯氏疏螺旋体(B.b)、米氏疏螺旋体(B.m)、斑点热群立克次体(SFGR)、查菲埃立克体(EC)、贝纳柯克斯体(C.b)和嗜吞噬细胞无形体(AP),对阳性产物进行测序分析。结果417只寄生蜱均为微小扇头蜱,其中有58只蜱携带蜱传病原菌,总阳性率为13.91%。3县中,永新县检出B.b、SFGR和C.b,其中B.b的阳性率最高,为8.99%;吉安县检出B.b、EC和C.b,其中C.b的阳性率最高,为9.21%;永丰县检出B.b、SFGR、C.b和AP,其中SFGR的阳性率最高,为10.32%。此外,3县蜱均存在多种蜱传病原菌的复合感染现象,均表现为B.b与其他蜱传病原菌的复合感染。系统进化分析表明,吉安市寄生蜱携带Borrelia yangzensis、B.garinii和B.barvariensis 3种基因型的B.b以及Rickettsia slovaca和Candidatus Rickettsia jingxinensis 2种SFGR。结论吉安市不同县寄生蜱携带的病原菌种类和优势基因型各不相同,且存在多种病原菌复合感染现象,提示当地蜱携带病原菌的情况复杂。应进一步开展蜱传疾病的调查和监测工作,为有效防控蜱传疾病提供科学依据。 展开更多

关键词 蜱 蜱传病原菌 核酸检测 序列分析

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江西省吉安市莱姆病疑似病例调查研究

5

作者 刘志云 曾予 +4 位作者 段立科 侯学霞 张琳 贺丽娟 郝琴 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期340-345,共6页

目的了解江西省吉安市莱姆病疑似病例中确诊病例情况及其临床表现特征和地区来源分布,为莱姆病及时诊治提供依据。方法2021年12月至2022年8月从吉安市中心人民医院收集了133份莱姆病疑似病例血清,采用国际上通用的“两步法”进行莱姆病... 目的了解江西省吉安市莱姆病疑似病例中确诊病例情况及其临床表现特征和地区来源分布,为莱姆病及时诊治提供依据。方法2021年12月至2022年8月从吉安市中心人民医院收集了133份莱姆病疑似病例血清,采用国际上通用的“两步法”进行莱姆病抗体检测,并采用巢式PCR方法检测血清中莱姆病螺旋体的基因,阳性标本进一步测序分析。结果133份莱姆病疑似病例血清中有25份伯氏疏螺旋体检测阳性,总阳性率为18.80%。其中,20份样本抗体检测阳性,阳性率为15.04%;6份样本核酸检测阳性,阳性率为4.51%。6例核酸检测阳性的患者的5S-23S rRNA基因间隔区的序列均与扬子疏螺旋体(Borrelia yangtzensis)的相应序列一致,并且其中1份样本抗体检测也为阳性。25例阳性患者来自吉安市的9个县区,其中吉州区的患者最多,占44%。阳性患者出现莱姆病相关症状,包括关节病变、神经疾病、感染性发热、皮炎或胸痛,其中关节病变的病人最多,占72%。6例扬子疏螺旋体感染者来自吉州区,其中4例表现为关节病变,2例表现为感染性发热。结论本次研究首次证实江西省吉安市存在莱姆病患者,并首次在我国南方的病人体内检测出扬子疏螺旋体。研究提示该地区医务人员在接诊具有关节炎、神经系统等症状的病例时,应考虑患者可能罹患莱姆病。研究表明吉安市存在莱姆病自然疫源地,应进一步开展莱姆病的调查和监测。 展开更多

关键词 莱姆病 扬子疏螺旋体 核酸检测 抗体检测

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海南省西部地区莱姆病血清学调查 被引量：4

6

作者 朱雄 侯学霞 +6 位作者 于莉 张琳 陈运优 苗广青 陈婷 郝琴 何吕芬 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期313-316,319,共5页

目的了解海南省西部地区关节炎或神经性疾病患者的莱姆病感染状况。方法在东方市收集莱姆病疑似病例血清400份,儋州市收集莱姆病疑似病例血清500份,均为关节炎或神经性疾病患者。采用间接免疫荧光法(IFA)对血清标本进行莱姆病抗体初筛检... 目的了解海南省西部地区关节炎或神经性疾病患者的莱姆病感染状况。方法在东方市收集莱姆病疑似病例血清400份,儋州市收集莱姆病疑似病例血清500份,均为关节炎或神经性疾病患者。采用间接免疫荧光法(IFA)对血清标本进行莱姆病抗体初筛检测;并采用免疫印迹法(WB)对IFA检测阳性的血清标本进行确诊实验。结果IFA方法检测血清样本900份,35份阳性,阳性率为3.89%。应用WB法对上述35份IFA阳性血清样本进行检测,结果15份阳性,阳性率为1.67%。不同年龄人群均有莱姆病螺旋体感染,其中,≤20岁阳性率最高,为11.76%(4/34),差异有统计学意义(χ^2=24.108,P<0.001);莱姆病螺旋体感染在性别和症状间差异无统计学意义(χ^2=0.001,P=0.975;χ^2=0.011,P=0.917)。结论证实了海南省西部地区人群中存在莱姆病,建议当地医生在诊治关节炎和神经性疾病患者时,应排除莱姆病的可能。 展开更多

关键词 莱姆病 抗体检测 血清学调查

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海南省琼中地区寄生蜱携带伯氏疏螺旋体的检测及基因分型研究 被引量：2

7

作者 张琳 文书 +7 位作者 侯学霞 李沙 杨小娜 陈婷 苗广青 符晓莹 郝琴 朱雄 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS 2020年第4期426-429,464,共5页

目的了解海南省琼中地区媒介蜱伯氏疏螺旋体的感染状况,为当地莱姆病的防控提供科学依据。方法在海南省琼中地区收集牛寄生蜱120只,应用普通PCR法扩增16S rRNA基因并测序分析,鉴定蜱种。应用巢式PCR方法,检测蜱的伯氏疏螺旋体带菌率,并... 目的了解海南省琼中地区媒介蜱伯氏疏螺旋体的感染状况,为当地莱姆病的防控提供科学依据。方法在海南省琼中地区收集牛寄生蜱120只,应用普通PCR法扩增16S rRNA基因并测序分析,鉴定蜱种。应用巢式PCR方法,检测蜱的伯氏疏螺旋体带菌率,并对测序结果进行同源性比较以确定基因型。结果本次海南省琼中地区牛寄生蜱经鉴定均为微小牛蜱。在120只蜱标本中,有44只蜱伯氏疏螺旋体检测阳性,阳性率为36.67%。同源性分析表明,琼中地区的微小牛蜱可感染多种基因型的伯氏疏螺旋体,包括Borrelia afzelii(56.82%)、B. yangze(25.00%)和B. garinii(18.18%)基因型。结论琼中地区微小牛蜱中携带多种基因型的伯氏疏螺旋体,并且带菌率较高,有传播莱姆病的风险,应进一步加强当地人群和宿主的莱姆病调查和评估。 展开更多

关键词 蜱 伯氏疏螺旋体 生物信息分析 琼中地区

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建立双重荧光定量PCR方法检测蜱传疏螺旋体 被引量：1

8

作者 杨小娜 张琳 +1 位作者 侯学霞 郝琴 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期788-794,共7页

目的建立双重荧光定量PCR方法,同时检测Borrelia burgdorferi和Borrelia miyamotoi。方法分别利用recA基因、glpQ基因合成引物探针,并优化反应条件。在单重实验的基础上建立双重荧光定量PCR方法,对该方法灵敏度和特异度进行检测,并探索... 目的建立双重荧光定量PCR方法,同时检测Borrelia burgdorferi和Borrelia miyamotoi。方法分别利用recA基因、glpQ基因合成引物探针,并优化反应条件。在单重实验的基础上建立双重荧光定量PCR方法,对该方法灵敏度和特异度进行检测,并探索其他因素对反应结果的影响。使用模拟样本和实际样本评价新方法的检测效用。结果双重荧光定量PCR方法具有良好的灵敏度和特异度,与单重实验方法比较,检测Ct值无明显差异(P>0.05),病原浓度与检测Ct值具有良好的线性相关关系。两种病原浓度差异和其他病原的存在对检测结果无明显影响。使用该方法检测模拟蜱样本和实际蜱样本具有良好的实用性。结论本实验建立的多重荧光定量PCR方法能快速便捷的检测两种疏螺旋体,为蜱样本病原鉴定提供了有价值的检测工具。 展开更多

关键词 伯氏疏螺旋体 Borrelia miyamotoi 双重荧光定量PCR

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海南省东北部地区某类就诊患者莱姆病抗体检测结果分析

9

作者 李沙 张琳 +7 位作者 李欢 侯学霞 陈婷 苗广青 符晓莹 陈海 郝琴 朱雄 《实用预防医学》 CAS 2020年第9期1068-1071,共4页

目的了解海南省东北部地区人群莱姆病感染状况,为临床医生诊断莱姆病提供参考,为本省莱姆病的流行病学调查提供可靠的理论依据。方法收集海南省东北部地区三家医院1 334例有关节症状和(或)神经症状的患者血清,采用两步法检测莱姆病抗体... 目的了解海南省东北部地区人群莱姆病感染状况,为临床医生诊断莱姆病提供参考,为本省莱姆病的流行病学调查提供可靠的理论依据。方法收集海南省东北部地区三家医院1 334例有关节症状和(或)神经症状的患者血清,采用两步法检测莱姆病抗体,使用间接免疫荧光法(indirect fluorescent antibody test,IFA)初筛血清,对IFA检测阳性血清用免疫印迹法(Western blot,WB)确证。结果 IFA法筛查海南省东北部地区1 334例患者莱姆病抗体阳性60例,阳性率4.50%。海口、文昌和琼海地区的三家医院该类就诊患者莱姆病抗体阳性率分别为4.25%、1.40%和8.28%(IFA)。三家医院阳性率比较差异有统计学意义(χ~2=25.640,P<0.05)。按不同性别、年龄分组海南省东北部地区三家医院莱姆病抗体阳性率比较差异均无统计学意义(χ~2=2.306,P>0.05;χ~2=1.015,P>0.05)。WB法确证莱姆病抗体阳性28例,其抗体以31 KD的外膜蛋白A、33 KD-36 KD外膜蛋白B、39 KD膜脂蛋白、41 KD鞭毛蛋白和60 KD热休克蛋白抗体为主。结论海南省东北部地区存在人群感染莱姆病,应加强当地疾病预防和监测。 展开更多

关键词 莱姆病 血清抗体 抗体检测

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内蒙古阿尔山地区游离蜱携带伯氏疏螺旋体的检测及基因分型研究

10

作者 段立科 侯学霞 +6 位作者 张琳 包子豪 刘泽梁 施淇源 周海健 董爱英 郝琴 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS 北大核心 2022年第5期642-647,共6页

目的了解内蒙古阿尔山地区游离蜱的伯氏疏螺旋体感染状况及携带的基因型,为当地莱姆病的防控提供依据。方法2020年5月和2021年5月,在内蒙古阿尔山地区用布旗法采集游离蜱,经形态学和特异性16S rDNA基因检测鉴定蜱种。随机选择113只蜱提... 目的了解内蒙古阿尔山地区游离蜱的伯氏疏螺旋体感染状况及携带的基因型,为当地莱姆病的防控提供依据。方法2020年5月和2021年5月,在内蒙古阿尔山地区用布旗法采集游离蜱,经形态学和特异性16S rDNA基因检测鉴定蜱种。随机选择113只蜱提取基因组DNA,采用巢式PCR扩增伯氏疏螺旋体5S~23S rRNA基因间隔区,阳性产物测序分析。采用BSKⅡ培养基对102只全沟硬蜱中携带的伯氏疏螺旋体进行分离培养,分离出的菌株采用多位点序列分析法(MLSA)鉴定基因型。结果共采获游离蜱295只,经鉴定主要为全沟硬蜱(282/295,95.59%),其次为森林革蜱(13/295,4.41%)。113只蜱的PCR检测结果显示,100只全沟硬蜱中24只携带伯氏疏螺旋体,感染率为24.00%,其中17只感染Borrelia garinii基因型(17/24,70.83%),7只感染B.afzelii基因型(7/24,29.17%),13只森林革蜱中未检出伯氏疏螺旋体。对102只全沟硬蜱中携带的伯氏疏螺旋体进行分离培养,得到2株伯氏疏螺旋体菌株,经MLSA分型鉴定为B.garinii基因型。结论内蒙古阿尔山地区5月游离蜱以全沟硬蜱为主,其中伯氏疏螺旋体感染率为24.00%,感染的基因型为B.garinii和B.afzelii 2种致病基因型,并分离出2株B.garinii菌株,证实内蒙古阿尔山地区存在伯氏疏螺旋体的自然感染。当地应关注伯氏疏螺旋体的感染和致病风险,开展人群、媒介蜱和宿主的监测工作,建立科学合理的莱姆病防控体系。 展开更多

关键词 莱姆病 蜱 伯氏疏螺旋体 多位点序列分析

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中国莱姆病螺旋体DnaK基因的人T细胞表位研究

11

作者 张琳 侯学霞 +1 位作者 苗广青 郝琴 《热带医学杂志》 CAS 2019年第2期154-161,共8页

目的了解我国引起莱姆病的伯氏疏螺旋体重要抗原之一DnaK基因及其表位区的多样性,理解伯氏疏螺旋体与宿主之间的相互作用机制和伯氏疏螺旋体抗原分子引起的免疫应答反应。方法比对分析我国68株具有代表性的伯氏疏螺旋体菌株,包含了4个... 目的了解我国引起莱姆病的伯氏疏螺旋体重要抗原之一DnaK基因及其表位区的多样性,理解伯氏疏螺旋体与宿主之间的相互作用机制和伯氏疏螺旋体抗原分子引起的免疫应答反应。方法比对分析我国68株具有代表性的伯氏疏螺旋体菌株,包含了4个重要基因型。使用国际参考株B31(Borrelia burgdorferi sensu stricto,B.B.s.s)作为参考菌株。结果结果表明DnaK基因的T细胞抗原表位区有单核苷酸变异(SNP),但氨基酸序列与参考菌株没有差异。该基因序列90～1 838 bp的dN/dS值为0.03。同时,我国伯氏疏螺旋体主要致病基因型B.garinii的核酸变异较大。结论 DnaK基因的T抗原表位高度保守,可能是感染之后直接刺激免疫系统引起炎性反应的原因之一。此外在不改变蛋白功能的前提下,基因的多样性可能与其适应环境有关。 展开更多

关键词 伯氏疏螺旋体 DNAK T抗原表位 高度保守

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