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Pfu DNA聚合酶在大肠杆菌Rosetta(DE3)中的表达及快速纯化
1
作者 何华华 胡晓韵 +1 位作者 王婷 喻婵 《湖北大学学报（自然科学版）》 CAS 2019年第3期223-227,共5页
来源于Pyrococcus furiosus COM1菌的Pfu DNA聚合酶具有保真性高、延伸速度快、热稳定性强等特点,能够提高PCR反应过程中的扩增效率,减少错误碱基掺入率.以大肠杆菌Rosetta(DE3)为重组细胞,利用一种快速表达纯化方法,让Pfu DNA聚合酶的... 来源于Pyrococcus furiosus COM1菌的Pfu DNA聚合酶具有保真性高、延伸速度快、热稳定性强等特点,能够提高PCR反应过程中的扩增效率,减少错误碱基掺入率.以大肠杆菌Rosetta(DE3)为重组细胞,利用一种快速表达纯化方法,让Pfu DNA聚合酶的表达纯化过程变得更加简便,并维持其高活性.结果表明,Pfu DNA聚合酶在大肠杆菌Rosetta(DE3)中能够进行大量表达,同时60℃高温水浴能有效去除杂蛋白,简化纯化步骤及提高Pfu DNA聚合酶纯度.经过一系列纯化步骤处理后,Pfu DNA聚合酶仍然能够保持较好的酶活,且在100μL PCR反应体系中,加入4μL的1 mg/mL Pfu DNA聚合酶液效果最佳. 展开更多
关键词 PFU DNA聚合酶 Rosetta(DE3) 亲和层析 PCR检测
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AEP环化酶的高效原核诱导表达与活性检测体系的建立
2
作者 胡晓韵 何华华 彭文舫 《湖北大学学报（自然科学版）》 CAS 2020年第1期20-26,共7页
天冬酰胺内切酶(AEPs)可催化短肽形成结构异常稳定的环肽,其具有药物设计框架的应用前景.将来源于白花蛇舌草(Oldenlandia affinis)中AEP(OaAEP1 b)环化酶(cyclase)基因采用融合标签表达的策略在大肠杆菌菌株BL21中进行诱导表达,并比较... 天冬酰胺内切酶(AEPs)可催化短肽形成结构异常稳定的环肽,其具有药物设计框架的应用前景.将来源于白花蛇舌草(Oldenlandia affinis)中AEP(OaAEP1 b)环化酶(cyclase)基因采用融合标签表达的策略在大肠杆菌菌株BL21中进行诱导表达,并比较了不同的融合标签麦芽糖结合蛋白(MBP),N-utilization substance A(NusA),小泛素修饰蛋白(SUMO),绿色荧光蛋白(GFP)以及泛素(ubiquitin)对AEP环化酶表达量的影响.结果表明,MBP标签对AEP的表达促进作用最强,达到(3.6±0.05)mg/L,是目前文献报道的2倍.体外酶切实验证实该环化酶可对融合表达的底物蛋白MBP-Kalata B1-6 His-GST进行有效切割,但连接反应过程有待验证.本研究对AEP环化酶进行肽工程研究与应用奠定了较好的基础,并提供了一套高效的研究工具. 展开更多
关键词 AEP环化酶 环化肽 大肠杆菌 融合表达
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三甲胺-N-氧化物在动脉粥样硬化发病机制中的研究进展 被引量：10
3
作者 何花花 连新福 唐智群 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期986-990,共5页
肠道菌群的代谢产物三甲胺-N-氧化物(trimethylamine-N-oxide,TMAO)是一种新发现的心血管疾病的危险因子。肠道菌群利用食物中的胆碱和左旋肉碱转化为三甲胺(trimethylamine,TMA),三甲胺在肝酶中氧化为TMAO,降低TMA可以刺激巨噬细胞逆... 肠道菌群的代谢产物三甲胺-N-氧化物(trimethylamine-N-oxide,TMAO)是一种新发现的心血管疾病的危险因子。肠道菌群利用食物中的胆碱和左旋肉碱转化为三甲胺(trimethylamine,TMA),三甲胺在肝酶中氧化为TMAO,降低TMA可以刺激巨噬细胞逆向转运胆固醇和抑制动脉粥样硬化形成。TMAO生成素单加氧酶3(flavin-containing monooxygenase 3,FMO3)是胆固醇代谢和胆固醇逆向转运的工具,降低FMO3可以减缓胆囊分泌胆汁,延缓肠道对胆固醇的吸收,并限制合成氧化型胆固醇和胆固醇酯。血液中TMAO可上调巨噬细胞内的清道夫受体,促使巨噬细胞内胆固醇累积和泡沫细胞的形成,进而促进血管斑块的形成并通过MAPK和细胞核因子κB通路促进血管炎性反应。TMAO集中作用于影响胆固醇代谢、胰岛素抵抗、促进血小板高聚集、增加血栓形成、促进血管炎症反应及直接导致动脉斑块形成等方面。降低TMAO水平可以潜在的预防或治疗动脉粥样硬化相关疾病,降低心脑血管疾病发病率。TMA/FMO3/TMAO通路是调节脂质代谢和炎症的主要通路。 展开更多
关键词 肠道菌群 三甲胺-N-氧化物 动脉粥样硬化
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历代医家运用辛温解表方药治疗咽喉疼痛的经验研究 被引量：4
4
作者 何嘉慧 管桦桦 +2 位作者 彭霖 老膺荣 杨志敏 《中国中医急症》 2017年第4期584-587,共4页
目的归纳总结古籍文献中运用辛温解表方药治疗咽喉疼痛的辨识及用药经验。方法以《中华医典(光盘版)》为工具,检索与辛温解表方药治疗咽喉疼痛有关的古籍文献原文,根据纳排标准筛选出符合要求者并从中提取相关信息,经过规范化处理后录入... 目的归纳总结古籍文献中运用辛温解表方药治疗咽喉疼痛的辨识及用药经验。方法以《中华医典(光盘版)》为工具,检索与辛温解表方药治疗咽喉疼痛有关的古籍文献原文,根据纳排标准筛选出符合要求者并从中提取相关信息,经过规范化处理后录入WPS2013建立数据库,采用内容分析法与描述性统计加以分类与归纳。结果辨识方面:采用辛温解表方药所治咽痛常具有以下特点。望诊:咽喉局部色白或紫且不甚肿大,或咽喉局部色白且扁桃体明显肿大,舌润。闻诊:暴喑(急性声音嘶哑)。问诊:有感受寒邪或服冷剂(对苦寒泻下药的统称)会加重病情的病史,常兼见恶寒(伴或不伴发热)、下利、咽喉异物感、咳嗽或口不渴等症状。切诊:脉沉、迟/缓、弱/微、细,或脉浮、弦/紧、数/疾。用药方面:常用于治疗阴证咽痛的辛温解表方药有桔梗汤、半夏散及汤、六味汤、荆防败毒散及麻黄细辛附子汤等方剂,以及细辛、荆芥、葱白、桂枝、生姜等药物。结论咽痛辨证时应关注患者发病的诱因、治疗经过、四诊特点,"恶寒、舌润、脉沉/细/弱"对辛温解表方药的使用有较强提示作用;桔梗汤、半夏散及汤等经方为各家所喜用,细辛、葱白等亦为利咽要药。 展开更多
关键词 咽痛 喉痹 乳蛾 辛温解表 辨识 用药
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