以槟榔果仁为试材,经pH6.8磷酸缓冲溶液(PBS)提取多酚氧化酶(PPO)粗酶液,采用(NH4)2SO4分级沉淀后,进一步通过DEAE-Sepharose Fast Flow和Phenyl Sepharose 6 Fast Flow柱层析,获得PPO纯化酶液。经鉴定其纯度达到电泳纯,相对分子质量为2...以槟榔果仁为试材,经pH6.8磷酸缓冲溶液(PBS)提取多酚氧化酶(PPO)粗酶液,采用(NH4)2SO4分级沉淀后,进一步通过DEAE-Sepharose Fast Flow和Phenyl Sepharose 6 Fast Flow柱层析,获得PPO纯化酶液。经鉴定其纯度达到电泳纯,相对分子质量为29.2 ku。在此基础上,对提取的PPO进行酶学特性研究,结果表明,槟榔果仁中PPO最适温度为20℃,最适pH为7.0;以邻苯二酚为底物,该酶的最大反应速度(Vmax)为140.84 U/mL·min,Km为3.22 mmol/L。展开更多
目的采用全层析工艺从废弃的Cohn法组分Ⅳ沉淀(Cohn fraction Ⅳ precipitate, Cohn F Ⅳ)中提取抗凝血酶Ⅲ(antithrombin Ⅲ, AT Ⅲ)、α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,α1-AT)和人血白蛋白进行综合利用。方法将Cohn F Ⅳ溶解并澄清处...目的采用全层析工艺从废弃的Cohn法组分Ⅳ沉淀(Cohn fraction Ⅳ precipitate, Cohn F Ⅳ)中提取抗凝血酶Ⅲ(antithrombin Ⅲ, AT Ⅲ)、α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,α1-AT)和人血白蛋白进行综合利用。方法将Cohn F Ⅳ溶解并澄清处理后进行SD法病毒灭活,得到上柱前料液,再依次采用阴离子交换层析、肝素亲和层析+α1-AT Select串联亲和层析、疏水层析以及分子筛层析后分别得到AT Ⅲ和α1-AT的纯品以及主要含有人血白蛋白的组分。对AT Ⅲ和α1-AT分别进行纯度、活性以及肝素亲和力等方面的检测,并评价其质量属性。结果采用此方法获得的AT Ⅲ纯度可达99%以上,比活达10 IU/mg以上,肝素亲和力达80%以上;α1-AT纯度同样可达99%以上,比活达1.5 PU/mg以上。结论本研究所述方法可成功将Cohn F Ⅳ中的AT Ⅲ、α1-AT以及人血白蛋白等几种目前最具备提取利用价值的蛋白进行有效的分离,在人血浆综合利用方面具有较高的利用价值。展开更多
文摘以槟榔果仁为试材,经pH6.8磷酸缓冲溶液(PBS)提取多酚氧化酶(PPO)粗酶液,采用(NH4)2SO4分级沉淀后,进一步通过DEAE-Sepharose Fast Flow和Phenyl Sepharose 6 Fast Flow柱层析,获得PPO纯化酶液。经鉴定其纯度达到电泳纯,相对分子质量为29.2 ku。在此基础上,对提取的PPO进行酶学特性研究,结果表明,槟榔果仁中PPO最适温度为20℃,最适pH为7.0;以邻苯二酚为底物,该酶的最大反应速度(Vmax)为140.84 U/mL·min,Km为3.22 mmol/L。
