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BnA7HSP70分子伴侣结合蛋白超表达能够提高甘蓝型油菜耐旱性 被引量：7
1
作者 万丽丽 王转茸 +3 位作者 辛强 董发明 洪登峰 杨光圣 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期483-492,共10页
分子伴侣结合蛋白广泛参与植物生长发育过程,在逆境下能够保护植物细胞免受胁迫。在甘蓝型油菜中超表达油菜含有HSP70热激蛋白结构域的分子伴侣基因BnA7HSP70,所得到的转基因植株在缺水条件下延缓萎蔫。通过生理生化实验证明,干旱条件... 分子伴侣结合蛋白广泛参与植物生长发育过程,在逆境下能够保护植物细胞免受胁迫。在甘蓝型油菜中超表达油菜含有HSP70热激蛋白结构域的分子伴侣基因BnA7HSP70,所得到的转基因植株在缺水条件下延缓萎蔫。通过生理生化实验证明,干旱条件下转基因植株有着更高的相对含水量、更强的渗透调节能力和较低的脂质膜过氧化性。另外,转基因植株的幼苗在萌发期表现出对糖基化酶抑制剂衣霉素处理的耐受性。Evans blue染色实验证明,转基因植株逆境下叶片死亡细胞数目比非转基因植株减少,叶片衰老相关标记基因Bn CNX1在转基因植株中下调表达证明,超表达BnA7HSP70基因所介导的途径能够减轻逆境胁迫下的植株衰老,保持叶片持绿性。在转基因植株中内质网和渗透胁迫产生的细胞死亡标记基因N-Rich蛋白Bn NRP延迟表达证明,在油菜中增强BnA7HSP70基因的表达能够缓解未折叠蛋白途径(unfold protein response,UPR)和NRP(N-rich pathway)途径介导的叶片黄萎,并降低油菜叶片失绿的标记基因BnLSC222和BnLSC54的表达。研究结果表明,在油菜中超表达BnA7HSP70基因能够提高植株在干旱条件下内质网胁迫的耐受性。 展开更多
关键词 BnA7HSP70 耐旱性 甘蓝型油菜 叶片衰老 抗氧化酶
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猪链球菌和副猪嗜血杆菌双重Taq Man荧光定量PCR检测方法的建立与应用 被引量：4
2
作者 靳曼玉 高树基 +4 位作者 李金朋 张小玲 丁轲 董发明 汪洋 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期1052-1058,共7页
为建立一种能够同时检测猪链球菌(SS)和副猪嗜血杆菌(HPS)的方法,本实验根据GenBank中登录的SS gdh和HPS 16S rRNA基因保守序列分别设计并合成引物和探针,经优化反应体系和条件,初步建立了一种可以同时鉴别检测SS和HPS的双重Taq Man荧... 为建立一种能够同时检测猪链球菌(SS)和副猪嗜血杆菌(HPS)的方法,本实验根据GenBank中登录的SS gdh和HPS 16S rRNA基因保守序列分别设计并合成引物和探针,经优化反应体系和条件,初步建立了一种可以同时鉴别检测SS和HPS的双重Taq Man荧光定量PCR方法。分别以SS、HPS、支气管败血波氏杆菌(Bb)、金黄色葡萄球菌(SA)、猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)、无乳链球菌(GBS)基因为模板,利用该方法检测,结果显示,除SS、HPS外,与其他猪临床常见病原菌均无交叉反应,特异性强;利用建立的该双重Taq Man荧光定量PCR方法分别对10倍倍比稀释后的SS和HPS质粒标准品以及二者混合菌液检测,结果显示,该方法对SS和HPS质粒标准品的最低检测限分别为7.534×10^(1)拷贝/μL、6.350×10^(1)拷贝/μL,对细菌的最低检测限均为10~2cfu/μL,敏感性较高;组内和组间重复性试验的变异系数均小于3%,表明该方法重复性较好。利用建立的该双重Taq Man荧光定量PCR、常规PCR和国标法对在河南地区不同养猪场收集的54份疑似SS和/或HPS感染的病料样品进行检测,结果显示,双重Taq Man荧光定量PCR和常规PCR检测的阳性率分别为38.89%(21/54)和31.48%(17/54),二者的总符合率为92.59%;国标法与建立的方法检测结果一致。本研究建立的双重Taq Man荧光定量PCR方法为临床SS和HPS的鉴别检测和流行病学调查提供了有力的技术手段。 展开更多
关键词 猪链球菌 副猪嗜血杆菌 双重Taq Man荧光定量PCR 检测
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5种中药对大肠埃希菌aac(3)-Ⅱ耐药性的消除作用 被引量：3
3
作者 黄永志 李凯强 +5 位作者 董发明 邱妍 赵战勤 赵旭东 李小婷 王帅帅 《动物医学进展》 北大核心 2019年第10期60-63,共4页
为了筛选对多重耐药大肠埃希菌有较好抗菌活性并对aac(3)-Ⅱ耐药基因有较强消除作用的中药,试验选取黄芩、黄连、艾叶、赤芍、鱼腥草等5种临床常用抗菌中药为研究对象,制备水煎液,用改良梯度稀释法测定中药对细菌的最小抑菌浓度(MIC),... 为了筛选对多重耐药大肠埃希菌有较好抗菌活性并对aac(3)-Ⅱ耐药基因有较强消除作用的中药,试验选取黄芩、黄连、艾叶、赤芍、鱼腥草等5种临床常用抗菌中药为研究对象,制备水煎液,用改良梯度稀释法测定中药对细菌的最小抑菌浓度(MIC),各中药分别以1/2 MIC与细菌共培养48 h,荧光定量PCR检测共培养前后大肠埃希菌aac(3)-Ⅱ耐药基因的相对表达量。结果显示,黄芩、黄连、艾叶、赤芍、鱼腥草5种中药均对大肠埃希菌有抗菌活性,对aac(3)-Ⅱ耐药基因具有消除作用,消除率依次为95%、83%、89%、78%、5%。说明黄芩、黄连不仅对多重耐药大肠埃希菌具有较强体外抗菌活性,而且对其耐药基因aac(3)-Ⅱ也具有较强消除抑制作用。 展开更多
关键词 中药 大肠埃希菌 抗菌 耐药基因
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中药对大肠埃希菌耐药性消除作用研究进展 被引量：3
4
作者 黄永志 赵旭东 +4 位作者 赵战勤 邱妍 王帅帅 董发明 梁立钦 《动物医学进展》 北大核心 2019年第3期97-100,共4页
致病性大肠埃希菌的耐药性给人类健康及畜禽生产带来巨大威胁,这已引起国内外学者的广泛关注。中药可以通过多种途径消除细菌耐药性,研究中药消除致病性大肠埃希菌耐药性的作用效果及机制对保障人类健康和畜禽生产具有重要意义。论文对... 致病性大肠埃希菌的耐药性给人类健康及畜禽生产带来巨大威胁,这已引起国内外学者的广泛关注。中药可以通过多种途径消除细菌耐药性,研究中药消除致病性大肠埃希菌耐药性的作用效果及机制对保障人类健康和畜禽生产具有重要意义。论文对致病性大肠埃希菌的耐药现状、中药消除效果及作用机制的最新研究进展进行综述,以期为中药消除致病性大肠埃希菌耐药性提供科学依据。 展开更多
关键词 中药 大肠埃希菌 耐药性 消除
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猪链球菌三价灭活疫苗免疫佐剂的筛选 被引量：2
5
作者 赵旭东 陈坤鹏 +4 位作者 孔美萍 薛云 王臣 董发明 赵战勤 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期178-185,共8页
为筛选适用于新型猪源链球菌(SS)灭活疫苗的佐剂,本研究以SS1 Z1株、SS2 Z2株和SS7 Z7株为抗原,分别配制ISA201 VG双相油乳佐剂疫苗(简称ISA201疫苗)、GEL 02 PR水溶性聚合物佐剂疫苗(简称GEL疫苗)、IMS1313N VG水溶性纳米佐剂疫苗(简称... 为筛选适用于新型猪源链球菌(SS)灭活疫苗的佐剂,本研究以SS1 Z1株、SS2 Z2株和SS7 Z7株为抗原,分别配制ISA201 VG双相油乳佐剂疫苗(简称ISA201疫苗)、GEL 02 PR水溶性聚合物佐剂疫苗(简称GEL疫苗)、IMS1313N VG水溶性纳米佐剂疫苗(简称IMS1313疫苗)、矿物油佐剂疫苗(简称油疫苗)、氢氧化铝胶佐剂疫苗(简称铝胶疫苗)共5种佐剂的三价灭活疫苗。豚鼠和仔猪安全性试验结果表明:油佐剂疫苗的副反应较大,其余疫苗的副反应较小。仔猪免疫保护试验结果显示:二免14 d后利用约为1 LD100的SS2 Z2株对仔猪经耳缘静脉攻毒,ISA201疫苗、GEL疫苗对仔猪的保护率均为100%,油疫苗和铝胶疫苗保护率分别为60%、40%,IMS1313疫苗组的保护率为0;利用1 LD100 SS1 Z1株攻毒后,ISA201疫苗、GEL疫苗、油疫苗、铝胶疫苗和IMS1313疫苗对仔猪的保护率分别为100%、80%、80%、60%和0。综上结果表明,ISA201疫苗免疫仔猪能产生最高的抗体水平,同时提供了最高的保护效力,且副反应较小,确定ISA201为开发链球菌灭活苗的首选佐剂。本研究为SS三价灭活疫苗的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 猪链球菌 疫苗 佐剂
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缺失VIM基因大白猪肾成纤维细胞的构建及其NF-κB和MAPK信号通路的研究 被引量：1
6
作者 李凯强 王晶 +4 位作者 肖伟 任红艳 华再东 董发明 毕延震 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期970-976,共7页
波形蛋白(Vimentin,VIM)可介导多种病毒进入机体,为研究病毒的感染机理,本研究将合成的敲除VIM基因的双sgRNA克隆于pX459-puro载体中,构建pX459-puro-V-1和pX459-puro-V-2敲除载体,经电转至大白猪肾成纤维细胞中,经嘌呤霉素筛选出14株... 波形蛋白(Vimentin,VIM)可介导多种病毒进入机体,为研究病毒的感染机理,本研究将合成的敲除VIM基因的双sgRNA克隆于pX459-puro载体中,构建pX459-puro-V-1和pX459-puro-V-2敲除载体,经电转至大白猪肾成纤维细胞中,经嘌呤霉素筛选出14株单克隆细胞株。将筛选的单克隆细胞株通过PCR鉴定、测序验证、western blot鉴定,结果显示得到1株缺失VIM基因的单克隆细胞。通过100 ng/mL的脂多糖(LPS)分别刺激该单克隆细胞株和可传代大白猪肾成纤维细胞,通过western blot检测NF-κB和MAPK信号通路中p65、p38、JNK、ERK及磷酸化蛋白p-p65、p-p38、p-JNK、p-ERK的表达水平,结果显示经LPS刺激后,缺失VIM基因的单克隆细胞和可传代大白猪肾成纤维细胞中p65、p38、JNK、ERK、p-ERK的表达水平均无明显变化;缺失VIM基因的单克隆细胞中p-p65、p-p38、p-JNK的表达水平明显低于可传代大白猪肾成纤维细胞(P<0.01)。本研究得到了1株缺失VIM基因的单克隆细胞,利用该细胞株首次研究发现VIM基因缺失能够影响宿主细胞中NF-κB和MAPK信号通路中p-p65、p-p38、p-JNK的表达,从而起到降低炎症反应的作用,该缺失VIM基因的单克隆细胞为病毒感染机理的研究提供了良好的实验素材,对相关疫病的防控有重要意义。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 VIM基因 敲除 NF-ΚB MAPK
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4种商陆提取物对鸡肾肿症治疗效果的试验 被引量：1
7
作者 王文文 张炳亮 +3 位作者 董发明 马霞 张国祖 黄一帆 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第2期35-38,共4页
为了比较商陆水煎法、水提醇沉法、减压干燥法、渗漉法4种提取方法得到的商陆提取物对鸡肾肿症的治疗效果。本试验首先建立鸡肾肿模型,然后用各商陆提取物进行治疗,并设立兽药对照组和阳性对照组,观察治疗前后各组鸡的临床症状、体重变... 为了比较商陆水煎法、水提醇沉法、减压干燥法、渗漉法4种提取方法得到的商陆提取物对鸡肾肿症的治疗效果。本试验首先建立鸡肾肿模型,然后用各商陆提取物进行治疗,并设立兽药对照组和阳性对照组,观察治疗前后各组鸡的临床症状、体重变化、治愈情况、血清尿酸(UA)、肌酐(Cr)、肾组织NO含量及肾指数变化。结果显示,不同商陆提取物均能达到降低血清UA、Cr、肾组织NO水平及肾指数,说明商陆提取物对鸡肾肿症有较好的治疗效果,其中渗漉得到的提取物与空白对照组相比差异不显著(P>0.05)。表明渗漉提取物对鸡肾肿症的治疗效果最佳,其作用机理可能与下调UA、Cr、肾组织NO浓度有关。 展开更多
关键词 商陆 鸡肾肿 尿酸 肌酐 肾组织一氧化氮 治疗效果
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动物转基因高效表达策略研究进展 被引量：3
8
作者 赵旭东 黄永志 +1 位作者 毕延震 董发明 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期45-53,共9页
外源基因在动物体内、细胞内表达时,常由于各种原因导致基因沉默。目前,主要有两种策略用于打破该瓶颈:一是利用友好位点;二是优化外源基因顺式作用元件。利用友好位点就是通过定点整合技术将外源基因插入至活性转录区域;优化外源基因... 外源基因在动物体内、细胞内表达时,常由于各种原因导致基因沉默。目前,主要有两种策略用于打破该瓶颈:一是利用友好位点;二是优化外源基因顺式作用元件。利用友好位点就是通过定点整合技术将外源基因插入至活性转录区域;优化外源基因顺式作用元件即采用合适的启动子、增强子、内含子、染色质开放元件、核基质附着区等元件,构建出高效表达载体。对相关策略进行概述,为动物基因工程育种提供参考。 展开更多
关键词 转基因动物 外源基因 友好位点 基因编辑
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自拟中药复方对免疫抑制小鼠免疫功能的影响 被引量：3
9
作者 邱妍 董发明 +1 位作者 杨国栋 林霖 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第11期70-73,共4页
为探讨自拟中药复方对免疫抑制小鼠的免疫调节作用,将女贞子、菟丝子、熟地、蒲公英、甘草按一定比例配伍,制备水煎液(质量浓度为1 g/mL)。将80只昆明系小鼠随机分为5组(空白对照组、免疫抑制模型组和中药复方高、中、低剂量组),空白对... 为探讨自拟中药复方对免疫抑制小鼠的免疫调节作用,将女贞子、菟丝子、熟地、蒲公英、甘草按一定比例配伍,制备水煎液(质量浓度为1 g/mL)。将80只昆明系小鼠随机分为5组(空白对照组、免疫抑制模型组和中药复方高、中、低剂量组),空白对照组和免疫抑制模型组小鼠灌服蒸馏水(0.2 mL/只),复方高、中、低剂量组小鼠分别灌服300 mg/只、200 mg/只、100 mg/只的复方水煎液,连续14 d。除空白对照组外,其他各组小鼠于给药的第1、3、5、7天皮下注射地塞米松(30 mg/kg体重)。试验第20天,将所有小鼠进行眼球采血,剖杀,称量体质量、胸腺重、脾脏重,计算胸腺、脾脏指数;分离血清,测定血清中免疫球蛋白G(Ig G)、溶菌酶、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素4(IL-4)和干扰素γ(INF-γ)的含量。结果显示,与免疫抑制模型组相比,复方中剂量组能够显著增加小鼠的胸腺和脾脏指数,提高小鼠血清中IgG、溶菌酶、IL-2、INF-γ的含量;而对IL-4含量无显著影响。可以得出:自拟复方水提液能够明显改善免疫抑制小鼠的免疫功能,且这种调节作用与给药剂量有一定相关性。 展开更多
关键词 中药 小鼠 免疫器官指数 IGG 溶菌酶 细胞因子
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头孢哌酮/舒巴坦对鲍氏不动杆菌及肺炎克雷伯菌的体外抗菌活性研究 被引量：8
10
作者 李淑华 李东 +2 位作者 于法明 杨宁 刘月芬 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期1452-1455,共4页
目的探讨头孢哌酮/舒巴坦对鲍氏不动杆菌及肺炎克雷伯菌的体外抗菌活性,为临床合理用药提供参考依据。方法选取2014年12月-2016年2月医院分离的鲍氏不动杆菌92株和肺炎克雷伯菌94株,分别选用琼脂稀释法、抗菌药物浓度梯度法、纸片扩散... 目的探讨头孢哌酮/舒巴坦对鲍氏不动杆菌及肺炎克雷伯菌的体外抗菌活性,为临床合理用药提供参考依据。方法选取2014年12月-2016年2月医院分离的鲍氏不动杆菌92株和肺炎克雷伯菌94株,分别选用琼脂稀释法、抗菌药物浓度梯度法、纸片扩散法以及全自动微生物分析系统检测不同配比的头孢哌酮/舒巴坦对鲍氏不动杆菌和肺炎克雷伯菌体外抗菌活性。结果与琼脂稀释法相比,纸片扩散法和Vitek-2法对鲍氏不动杆菌和肺炎克雷伯菌耐药率明显提高,分别可达54.35%,42.39%,39.36%,37.23%,差异有统计学意义(P<0.05);与2∶1头孢哌酮/舒巴坦相比,琼脂稀释法和纸片扩散法中1:1头孢哌酮/舒巴坦对鲍氏不动杆菌和肺炎克雷伯菌敏感率均明显提高,可达46.74%,39.13%,44.68%,41.48;耐药率均明显下降,仅为10.87%,21.83%,11.70%,20.21%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论在鲍氏不动杆菌和肺炎克雷伯菌敏感性检查中,纸片扩散法和Vitek 2法不宜选择,且头孢哌酮与舒巴坦的药物配比应加以说明。 展开更多
关键词 头孢哌酮/舒巴坦 鲍氏不动杆菌 肺炎克雷伯菌 体外抗菌
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