乙酰丙酸及其酯类合成γ-戊内酯的最新研究进展

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作者 张颖 李闯 傅尧 《林产化学与工业》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第3期10-20,共11页

在众多生物质平台分子中,γ-戊内酯(GVL)作为一种新型的生物质基化合物具有广泛的应用价值。首先介绍了由生物质平台分子乙酰丙酸(LA)及其酯类通过氢化作用制备GVL的反应途径及其最新研究进展,在这个反应过程中,氢源对不同催化体系有重... 在众多生物质平台分子中,γ-戊内酯(GVL)作为一种新型的生物质基化合物具有广泛的应用价值。首先介绍了由生物质平台分子乙酰丙酸(LA)及其酯类通过氢化作用制备GVL的反应途径及其最新研究进展,在这个反应过程中,氢源对不同催化体系有重要的影响,因此,着重归纳总结了非均相催化剂(氢源:氢气、甲酸和醇类),在多种类型催化体系下催化合成GVL的合成路线和方法,为探索更加绿色、经济、高效、可持续的GVL合成途径,发展新的转化技术梳理思路并提供参考。 展开更多

关键词 生物质 乙酰丙酸 γ-戊内酯 催化体系 氢化

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鸡白痢沙门氏菌病原的分离鉴定及耐药性分析 被引量：13

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作者 刘志科 杨宁宁 +7 位作者 徐锦凤 徐明国 荆明龙 吴文星 曹旭东 任艳 石峰 陈创夫 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第9期2792-2800,共9页

为鉴定新疆某些地区鸡白痢沙门氏菌主要流行株的流行现状和耐药情况,本研究采用平板凝集试验方法对有发病史的种鸡场进行现场检测,被检的750只鸡中,发现78例疑似鸡白痢沙门氏菌感染,运用沙门氏菌鉴别培养基、组织病理学观察和PCR方法进... 为鉴定新疆某些地区鸡白痢沙门氏菌主要流行株的流行现状和耐药情况,本研究采用平板凝集试验方法对有发病史的种鸡场进行现场检测,被检的750只鸡中,发现78例疑似鸡白痢沙门氏菌感染,运用沙门氏菌鉴别培养基、组织病理学观察和PCR方法进行确诊,并进行药敏试验。结果显示,疑似的78例鸡白痢沙门氏菌中有69例符合鸡白痢沙门氏菌的生化特性和病理学特点,PCR成功扩增出invA基因,分离率为9.2%,血清型诊断为D1型;其中分离菌对万古霉素和新霉素耐药性最高,耐药率分别为100.0%和81.2%,而对头孢曲松、克拉维酸和多黏菌素的敏感率达60.0%以上。本研究为养殖户和兽医工作者在净化鸡白痢沙门氏菌及临床用药方面提供参考。 展开更多

关键词 鸡白痢沙门氏菌 分离鉴定 组织病理学 PCR 药敏试验

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高分辨率熔解曲线技术用于结核分枝杆菌临床分离株异烟肼耐药性的快速检测 被引量：13

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作者 杨彩虹 杨敏 +4 位作者 于璐 包海洋 吴长新 曹旭东 陈创夫 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期403-412,共10页

目的评价高分辨率熔解曲线分析技术(high-resolution melting curve,HRM)检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性的应用价值。方法 1)通过传统比例法药敏实验对本实验室保存的49株结核分枝杆菌进行异烟肼耐药性分析。2)进一步对该结核分枝杆菌进... 目的评价高分辨率熔解曲线分析技术(high-resolution melting curve,HRM)检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性的应用价值。方法 1)通过传统比例法药敏实验对本实验室保存的49株结核分枝杆菌进行异烟肼耐药性分析。2)进一步对该结核分枝杆菌进行异烟肼耐药相关基因KatG基因和inhA基因进行异烟肼耐药决定区测序分析,筛查突变位点。3)根据筛查到的突变位点设计高分辨率熔解曲线分析所用的特异性引物,对异烟肼耐药基因耐药决定区进行高分辨率熔解曲线分析检测DNA突变,评估用高分辨率熔解曲线分析技术对结核分枝杆菌异烟肼耐药性检测的效率。结果 1)比例法药敏结果显示,49株实验菌株中20株为异烟肼耐药株,29株为异烟肼敏感株。2)测序分析结果显示:(1)KatG基因出现了4种突变形式,分别是234单位点突变;234、315双位点突变;234、463双位点突变;234、315、463三位点联合突变。(2)inhA基因检测到3种突变,即-8位、-15位、-152位。3)(1)对耐药株的基因突变进行分析发现:20株异烟肼耐药株中11株存在KatG基因第315位密码子的突变、占异烟肼耐药株的55%;6株存在inhA基因-15(4株)位碱基、-8(1株)位碱基、-152(1株)位碱基的突变,共占异烟肼耐药株的30%;2株同时存在基因KatG315密码子和inhA-15位碱基的突变,占异烟肼耐药株的10%;1株均未检测到KatG基因和inhA基因的突变,占异烟肼耐药株的5%。通过基因突变检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性的敏感性为95%、特异性为100%。(2)用高分辨率溶解曲线检测实验菌株耐药基因突变的结果显示,18株存在基因突变,24株不存在基因突变,检测的灵敏度为94.7%、特异性为80%。(3)以高分辨率熔解曲线检测到突变为耐药的判断标准,检出19株为耐药株,24株为敏感株。以比例法药敏结果为参照,检测的灵敏度为95%、特异性为82.76%。结论高分辨率溶解曲线用于结核分枝杆菌 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 高分辨率熔解曲线(HRM) DNA测序 耐药性 异烟肼

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牛病毒性腹泻病毒BVDV-LC株的分离与鉴定 被引量：10

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作者 马旭升 何延华 +5 位作者 盛金良 黄新 丁金花 豆晓霞 刘贤侠 陈创夫 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期546-549,共4页

为分离鉴定新疆地区牛病毒性腹泻病毒(BVDV)流行株,本研究通过RT-PCR检测、细胞分离培养、直接免疫荧光抗体检测、核苷酸序列测定及生物信息学分析对新疆某奶牛场采集的腹泻牛粪便样品进行了病毒分离和鉴定。结果显示,分离得到一株新的... 为分离鉴定新疆地区牛病毒性腹泻病毒(BVDV)流行株,本研究通过RT-PCR检测、细胞分离培养、直接免疫荧光抗体检测、核苷酸序列测定及生物信息学分析对新疆某奶牛场采集的腹泻牛粪便样品进行了病毒分离和鉴定。结果显示,分离得到一株新的牛源BVDV,命名为BVDV-LC株。该病毒株在MDBK细胞培养时未能引起细胞病变;5'-UTR与N^(pro) PCR扩增为阳性,扩增片段与预期大小一致;直接免疫荧光检测荧光信号为阳性;病毒滴度为10^(5.6) TCID_(50)/0.1 mL;遗传进化分析显示,该分离株与猪源BVDV-SD0803株有较近的亲缘关系,同属于BVDV-1q基因亚型。本研究表明BVDV-LC株的分离鉴定对进一步开展疫苗研发、牛病毒性腹泻致病机理等方面的研究具有重要意义。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻病毒 分离鉴定 进化分析

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新疆某地区3个牧场布鲁氏菌病流行状况调查及分析 被引量：9

5

作者 杨琴 邓肖玉 +5 位作者 张欢 易继海 王勇 张倩 王震 陈创夫 《动物医学进展》 北大核心 2021年第8期126-131,共6页

为调查新疆某地区牛、羊布鲁氏菌感染情况,收集该地区3个牧场共3223份样本,其中牛血液样本1404份、羊血液样本1590份、牛流产胎儿样本66份、羊流产胎儿样本75份、牛生鲜乳样本65份及羊生鲜乳样本23份。血液样本经血清分离后进行虎红平... 为调查新疆某地区牛、羊布鲁氏菌感染情况,收集该地区3个牧场共3223份样本,其中牛血液样本1404份、羊血液样本1590份、牛流产胎儿样本66份、羊流产胎儿样本75份、牛生鲜乳样本65份及羊生鲜乳样本23份。血液样本经血清分离后进行虎红平板凝集试验(RBPT),流产胎儿样本的部分脏器及生鲜乳样经DNA提取后进行聚合酶链反应(PCR).将PCR结果为阳性的样本进一步进行PCR扩增及系统进化树分析。RBPT结果显示,3个牧场RBPT平均阳性率为牛6.8%,羊9.5%;其中牧场A阳性率为牛7.1%,羊9.1%;牧场B阳性率为牛11.7%,羊10.8%;牧场C阳性率为牛4.2%,羊9.1%。经PCR共鉴定出54份布鲁氏菌阳性样本,其中包括牛流产胎儿22份、羊流产胎儿30份、羊生鲜乳1份及牛生鲜乳1份,其余均为阴性。从上述PCR阳性样本中共鉴定出38份为羊种布鲁氏菌,其中包括牛流产胎儿16份、羊流产胎儿20份、牛生鲜乳1份及羊生鲜乳1份。系统进化树分析表明,鉴定出的羊种布鲁氏菌与内蒙古地区、挪威及印度等国分离的羊种布鲁氏菌生物3型菌株亲缘关系非常接近。综上所述,羊种布鲁氏菌是引起该地区牛、羊布鲁氏菌病的主要病原菌。研究结果为新疆地区控制和预防布鲁氏菌的感染提供了流行病学依据。 展开更多

关键词 布鲁氏菌病 牛 羊 调查

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布鲁氏菌的胞内生存机制研究进展 被引量：8

6

作者 马忠臣 胡瑞瑞 +4 位作者 李芮芮 王震 努尔赛力克·努素甫 王勇 陈创夫 《动物医学进展》 北大核心 2021年第6期71-78,共8页

布鲁氏菌的感染周期和致病能力主要取决于其在吞噬细胞内的生存能力。布鲁氏菌入侵宿主细胞后,会经历多阶段复杂的细胞内循环过程。它们通过Ⅳ型分泌系统(T4SS)的介导依次通过内吞层,分泌层和自噬区,并发挥其功能。T4SS启动子调节一系... 布鲁氏菌的感染周期和致病能力主要取决于其在吞噬细胞内的生存能力。布鲁氏菌入侵宿主细胞后,会经历多阶段复杂的细胞内循环过程。它们通过Ⅳ型分泌系统(T4SS)的介导依次通过内吞层,分泌层和自噬区,并发挥其功能。T4SS启动子调节一系列宿主功能和机制,首先促进最初的内体样布氏小体(eBCV)转化为融合宿主内质网的复制细胞器(rBCV),然后转化为自噬相关囊泡(aBCV)完成布鲁氏菌释放。论文详细介绍和讨论了目前对布鲁氏菌细胞内循环过程和相关分子机制研究进展,论述了T4SS功能的表达在内体阶段的作用,自噬在rBCV生成和aBCV形成中的作用以及T4SS介导的rBCV生成和布鲁氏菌调节宿主分泌转运机制的重要性。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 胞内生存 布氏小体 Ⅳ型分泌系统

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牛病毒性腹泻病毒E2蛋白多表位疫苗筛选及生物信息学验证 被引量：7

7

作者 何金科 杨亚军 +5 位作者 邓肖玉 何延华 张超 马忠臣 王震 陈创夫 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1690-1698,共9页

为了筛选牛病毒性腹泻病毒(BVDV)E2蛋白的多表位亚单位疫苗,本研究选用4种B细胞预测软件(immunomedicine group、ABCpred、BepiPred、SMVTriP)和2种T细胞预测软件(NetBoLApan、NetMHCIIpan)筛选出重叠肽作为优势表位,通过柔性linker连... 为了筛选牛病毒性腹泻病毒(BVDV)E2蛋白的多表位亚单位疫苗,本研究选用4种B细胞预测软件(immunomedicine group、ABCpred、BepiPred、SMVTriP)和2种T细胞预测软件(NetBoLApan、NetMHCIIpan)筛选出重叠肽作为优势表位,通过柔性linker连接成多表位疫苗,使用免疫信息学方法对抗原性、过敏源、理化性质、糖基化位点、二级和三级结构进行评估。通过二硫化物工程提高疫苗稳定性。使用分子对接评估疫苗构建体与免疫受体的结合能力,最后进行silico克隆。结果表明,成功构建17000相对分子质量的可溶性蛋白质,免疫信息学结果表明,疫苗构建体是非过敏性良好抗原,具有一个潜在的N-糖基化位点,在二级结构中α螺旋占约3.2%,β折叠占约43.2%,无规卷曲占约53.6%。三级结构Ramachandran作图发现优势区域中含有88.2%残基,进行细化后优势区域的残基增加到93.5%,3D模型表位作图也证明多表位疫苗具有良好的免疫原性,二硫化物工程确定出3对残留物可以形成二硫键,分子对接表明疫苗构建体与TLR3受体具有高亲和力,最后密码子优化和silico克隆确保设计的亚单位疫苗在大肠杆菌K12表达系统中更高表达。免疫信息学分析表明这种多表位疫苗可以有效表达并能够诱导强烈的T细胞和B细胞免疫应答。本研究为BVDV E2多表位疫苗的设计提供了一种新的方法。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻病毒 E2蛋白 B细胞表位 T细胞表位 分子对接 二硫化物工程 silico克隆

原文传递

布鲁氏菌重组L7/L12蛋白对小鼠免疫保护效果的评价 被引量：2

8

作者 谢珊珊 王月丽 +9 位作者 邓肖玉 席静 于水发 马忠臣 王震 孟闯 苗玉和 徐艺玫 易继海 陈创夫 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期72-78,87,共8页

为探究布鲁氏菌候选保护性抗原L7/L12的免疫原性及其对小鼠的免疫保护效果,本研究经PCR扩增羊种布鲁氏菌16M株L7/L12基因,构建重组质粒pET-22b-L7/L12,经双酶切鉴定正确后转化E.coli BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达并纯化后利用SDS-PAGE... 为探究布鲁氏菌候选保护性抗原L7/L12的免疫原性及其对小鼠的免疫保护效果,本研究经PCR扩增羊种布鲁氏菌16M株L7/L12基因,构建重组质粒pET-22b-L7/L12,经双酶切鉴定正确后转化E.coli BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达并纯化后利用SDS-PAGE与western blot检测。结果显示,获得了16 ku的重组L7/L12蛋白(rL7/L12),且纯化效果较好。将rL7/L12以100μg/只腹腔注射免疫6周龄SPF BALB/c小鼠,14 d后以50μg/只加强免疫。首免后7 d、14 d、21 d、28 d、35 d、42 d及49 d分别对所有小鼠尾静脉采血,通过间接ELISA方法检测小鼠血清中的IgG抗体、其亚型(IgG1、IgG2a)抗体水平及二者比值;并利用ELISA方法检测首免后21 d和35 d两组小鼠血清中细胞因子IL-2、IL-10和TNF-α的分泌水平。结果显示,首免后14 d,小鼠血清中IgG抗体水平迅速升高,于首免后21 d达峰值并持续至首免后49 d(P<0.01),对照组小鼠则一直无抗体产生;首免后14 d,rL7/L12组小鼠血清中的IgG1抗体水平极显著高于IgG2a抗体水平(P<0.01),且IgG1/IgG2a大于1;但首免后42 d,rL7/L12组小鼠血清中IgG2a抗体水平极显著高于IgG1(P<0.01),IgG2a/IgG1比值大于1。表明在免疫前期,rL7/L12主要诱导小鼠的Th2型体液免疫反应,免疫后期主要诱导小鼠Th1型细胞免疫反应。首免后21 d和35 d,rL7/L12组小鼠IL-2和TNF-α含量极显著高于PBS对照组(P<0.01),首免后35 d,该组小鼠抑炎因子IL-10的含量极显著低于PBS对照组(P<0.01)。首免后21 d和35 d,分别剖杀每组小鼠,分离小鼠脾淋巴细胞,利用ELISpot法检测各组小鼠脾淋巴细胞中IFN-γ的分泌水平。结果显示,首免后21 d,rL7/L12组小鼠脾淋巴细胞IFN-γ的分泌水平有所升高,但与PBS对照组无显著差异(P>0.05);但免疫后35 d,rL7/L12组小鼠脾淋巴细胞IFN-γ分泌水平显著高于PBS对照组(P<0.05)。上述结果表明,rL7/L12免疫后期刺激小鼠机体产生Th1型细胞免疫反应,与抗体检测结果相符。首免后42 d� 展开更多

关键词 布鲁氏菌 保护效果 ELISPOT

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牛冠状病毒核衣壳蛋白原核表达及鉴定 被引量：7

9

作者 陆亚冬 刘贤侠 陈创夫 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期1154-1165,共12页

【目的】诊断致犊牛腹泻冠状病毒。【方法】采集石河子、沙湾、奎屯等10个规模化奶牛场141份腹泻犊牛粪样,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)进行冠状病毒检测,PCR方法进行核酸复检。同时根据GenBank登录的牛冠状病毒N基因序列,设计特异性引... 【目的】诊断致犊牛腹泻冠状病毒。【方法】采集石河子、沙湾、奎屯等10个规模化奶牛场141份腹泻犊牛粪样,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)进行冠状病毒检测,PCR方法进行核酸复检。同时根据GenBank登录的牛冠状病毒N基因序列,设计特异性引物,对Mebus分离株N基因进行扩增,克隆到PMD 19-T载体后,将测序正确的基因片段经EcoRⅠ和Hind Ⅲ双酶切后连接到PET-28a和PET-32a载体中,构建重组表达载体PET-28a-N和PET-32a-N,进行测序,亚克隆入BL21(DE3)表达载体,用IPTG进行诱导重组菌,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物。【结果】所采集141份腹泻犊牛粪便中,用ELISA检测阳性率70.21%;再用RT-PCR检测出阳性率为61.7%同时,克隆了牛冠状病毒N基因,片段大小为1 400 bp,双酶切鉴定目的条带正确,测序结果与标准序列的进行比对同源性达到98.22%,通过SDS-PAGE分析证实表达的重组蛋白PET-28a-N-DE3相对分子质量为54KD;重组蛋白BCV-32a-N-DE3相对分子质量为70KD,Western blot分析表明该重组蛋白BCV-32a-N-DE3和BCV-28a-N-DE3和可以与牛冠状病毒阳性血清发生特异性反应。【结论】犊牛冠状病毒是导致石河子、沙湾、奎屯等10个规模化奶牛场和部分肉牛场犊牛腹泻的主要病原;ELISA方法和RT-PCR方法结合应用检测犊牛冠状病毒效果具有参考意义。获得的牛冠状病毒N蛋白具有很好的免疫反应性,为牛冠状病毒诊断试剂研发奠定基础。 展开更多

关键词 犊牛冠状病毒 N基因 载体构建

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奶牛乳房炎大肠杆菌新疆分离株系统分群及其耐药特性与毒力因子分布研究 被引量：7

10

作者 于伟伟 乔军 +5 位作者 孟庆玲 彭叶龙 张金生 王辉胜 才学鹏 陈创夫 《中国奶牛》 2017年第10期30-35,共6页

本研究利用PCR技术对奶牛乳房炎大肠杆菌新疆临床分离株进行种系分群、耐药基因和毒力基因检测,并测定大肠杆菌对16种抗菌药物的敏感性。从1 068份奶牛乳房炎样品中分离出124株大肠杆菌,分离率为11.6%,其中A群(占58.8%)分布较多,其次是B... 本研究利用PCR技术对奶牛乳房炎大肠杆菌新疆临床分离株进行种系分群、耐药基因和毒力基因检测,并测定大肠杆菌对16种抗菌药物的敏感性。从1 068份奶牛乳房炎样品中分离出124株大肠杆菌,分离率为11.6%,其中A群(占58.8%)分布较多,其次是B1群(占16.1%)和D群(占13.7%)及B2群(占11.3%)。药敏结果显示,分离株对常用抗生素表现出不同程度的耐药性,其中对多黏菌素B和氨苄西林的耐药率最高,分别为76.6%和75.8%;多重耐药株中以3~7耐药株较多,最多对15种抗菌药物耐药,药敏表型与基因型基本一致。在分离株中携带的主要毒力基因为irp2(29.8%),其次是ast A(21.7%)、iuc D(14.5%)、afa8E(9.6%)、ehx A(7.2%)、saa(5.6%)和tsh(1.6%),其中毒力基因Irp2在A群的出现频率要高于其他种群,而在A群中出现3种以上的毒力基因组合则少于其他种群。 展开更多

关键词 奶牛乳房炎 大肠杆菌 系统进化分群 耐药性 毒力基因

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牛妊娠相关糖蛋白BoPAG1的制备及生物信息学分析 被引量：6

11

作者 杨亚军 王震 +2 位作者 张洁 徐明国 陈创夫 《生物技术》 CAS 2019年第1期29-34,89,共7页

[目的]获得高效表达并且抗原性较好的Bo PAG1(bovin Pregnancy associated glycoproteins 1)蛋白,并分析其生物信息学功能。[方法]扩增荷斯坦奶牛Bo PAG1基因,并将其连接在表达载体p ET-30a,并转化至大肠杆菌(DE3)中表达,用SDS-PAGE和We... [目的]获得高效表达并且抗原性较好的Bo PAG1(bovin Pregnancy associated glycoproteins 1)蛋白,并分析其生物信息学功能。[方法]扩增荷斯坦奶牛Bo PAG1基因,并将其连接在表达载体p ET-30a,并转化至大肠杆菌(DE3)中表达,用SDS-PAGE和Western Blot检测其免疫学特性,采用生物信息学方法对Bo PAG1基因编码蛋白的蛋白修饰、结构、线性B细胞抗原表位进行预测分析。并对不同物种间的PAG1以及荷斯坦奶牛Bo PAG的氨基酸做同源性分析。[结果]成功克隆Bo PAG1基因并表达相应蛋白,大小与预期结果相符,预测Bo PAG1蛋白具有18个B细胞抗原表位,其N端具有15个氨基酸组成的信号肽,并且有4处N连接糖基化,不同物种间PAG1氨基酸的同源性为95. 1%～97. 9%,Bo PAG蛋白家族氨基酸的同源性为86. 4%～97. 2%。[结论]成功表达并纯化获得了Bo PAG1蛋白。Bo PAG1蛋白N连接糖基化有4处并且预测出18个B细胞抗原表位以及15个氨基酸组成的信号肽。不同物种间PAG1及Bo PAG蛋白家族同源性较高。为Bo PAG1蛋白抗体的制备和功能的研究提供了基础。 展开更多

关键词 妊娠相关糖蛋白 原核表达 WESTERN BLOT 生物信息学分析

原文传递

嗜吞噬无形体效应蛋白Ats-1调控宿主细胞剪接体转录机制的初步分析

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作者 李芮芮 史梦华 +5 位作者 张妍 何洪琴 王雨璐 陈佳 王勇 陈创夫 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期39-48,共10页

为研究嗜吞噬无形体效应蛋白Ats-1对宿主细胞内蛋白表达的影响,并初步分析Ats-1对宿主细胞剪接体的调控机制,本研究将嗜吞噬无形体的Ats-1基因克隆后连接至pcDNA3.1质粒,构建pcDNA3.1-Ats-1重组质粒,经PCR和测序鉴定正确后利用脂质体Lip... 为研究嗜吞噬无形体效应蛋白Ats-1对宿主细胞内蛋白表达的影响,并初步分析Ats-1对宿主细胞剪接体的调控机制,本研究将嗜吞噬无形体的Ats-1基因克隆后连接至pcDNA3.1质粒,构建pcDNA3.1-Ats-1重组质粒,经PCR和测序鉴定正确后利用脂质体LipofectamineTM3000将其转染HEK293T细胞,继续培养至24 h、48 h时经western blot鉴定,结果显示,在48 ku(全长蛋白)和35 ku(成熟蛋白)出现特异性条带,表明Ats-1蛋白在细胞内可正确表达;且相较于24 h,48 h Ats-1蛋白在细胞内的表达量显著增加(P<0.05)。将重组质粒pcDNA3.1-Ats-1和空质粒pcDNA3.1分别转染HEK293T细胞,48 h后收获细胞并裂解取裂解液,利用同量异位标签定量蛋白质组学方法(iTRAQ)筛选Ats-1表达后宿主细胞内差异显著表达的蛋白,并采用基因本体论(GO)分析差异显著表达蛋白的功能,利用京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库分析差异显著表达蛋白参与的信号通路。从剪接体通路选取34个差异表达蛋白通过q RT-PCR验证。i TRAQ结果显示,与空质粒转染细胞组相比,重组质粒pcDNA3.1-Ats-1转染细胞组共鉴定到852个差异显著表达的蛋白,其中表达显著上调蛋白406个,表达显著下调蛋白446个。GO功能分析结果显示,差异显著表达蛋白主要定位在膜、胞内膜结合细胞器、膜组分,参与大分子生物合成过程,有核酸和RNA结合活性。KEGG信号通路分析结果显示,差异显著表达蛋白显著富集于剪接体、N-糖基化、蛋白输出和RNA运输等信号通路。q RT-PCR结果显示,剪接体通路富集的差异显著表达蛋白仅O43143蛋白的m RNA转录水平上调,其他33个蛋白(A0A024R1K8、Q13435、Q13573等)m RNA的转录水平均显著下调,与iTRAQ的分析结果一致。综上所述,本研究首次证实Ats-1蛋白表达后可能参与宿主细胞中剪接体、N-糖基化和蛋白输出信号通路的调控,抑制宿主细胞中剪接体调控通路中部分蛋白的转录,� 展开更多

关键词 Ats-1蛋白 ITRAQ 差异表达蛋白 剪接体

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布鲁氏菌外膜蛋白OMP10间接ELISA检测方法的建立及免疫原性评估 被引量：2

13

作者 邓肖玉 徐锦凤 +4 位作者 何金科 谢珊珊 王勇 王震 陈创夫 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期107-114,共8页

目的建立布鲁氏菌外膜蛋白OMP10间接ELISA检测方法,评价OMP10在小鼠体内的免疫效果。方法本研究表达和纯化了布鲁氏菌外膜蛋白OMP10,通过Western Blot进行验证,建立了OMP10间接ELISA检测方法,然后将OMP10与弗氏佐剂和LDH佐剂配伍成2种... 目的建立布鲁氏菌外膜蛋白OMP10间接ELISA检测方法,评价OMP10在小鼠体内的免疫效果。方法本研究表达和纯化了布鲁氏菌外膜蛋白OMP10,通过Western Blot进行验证,建立了OMP10间接ELISA检测方法,然后将OMP10与弗氏佐剂和LDH佐剂配伍成2种亚单位疫苗,免疫小鼠后检测抗体水平、脾脏淋巴细胞的增殖水平、CD4^(+)和CD8^(+)T细胞比值以及细胞因子分泌,最后通过攻毒试验评估OMP10的免疫保护效果。结果OMP10作为诊断抗原的特异性和符合率均高于70%;免疫小鼠后2种亚单位疫苗均能产生高滴度的IgG抗体,CD4^(+)/CD8^(+)T的比值均高于PBS对照组,IFN-γ高于PBS对照组,差异具有统计学意义(P<0.01),但IL-4未发生明显变化,表明OMP10能够诱导很好的体液免疫及Th1型免疫应答。免疫保护结果显示,2种亚单位疫苗免疫组小鼠脾脏指数和脾脏载菌量低于布鲁氏菌M5感染组,差异具有统计学意义(P<0.01),表明OMP10蛋白配伍的亚单位疫苗对布鲁氏菌M5感染小鼠具有高度的保护作用。结论外膜蛋白OMP10在布鲁氏菌诊断和疫苗方面具有一定的应用价值。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 外膜蛋白OMP10 间接ELISA 抗体水平 细胞因子 免疫保护

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新疆奶牛乳房炎链球菌的分离鉴定和耐药性分析 被引量：1

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作者 寇茜茜 刘荣慧 +4 位作者 张伟 史超 陈创夫 王震 张辉 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第10期76-81,共6页

为了研究奶牛乳房炎链球菌的理化性质和耐药性,为基层科学用药提供理论依据,本试验采集新疆维吾尔自治区石河子市某奶牛养殖场患有临床型乳房炎奶牛的乳样,通过细菌分离鉴定、生化鉴定和16S rDNA基因测序确定链球菌种属,并对分离鉴定的... 为了研究奶牛乳房炎链球菌的理化性质和耐药性,为基层科学用药提供理论依据,本试验采集新疆维吾尔自治区石河子市某奶牛养殖场患有临床型乳房炎奶牛的乳样,通过细菌分离鉴定、生化鉴定和16S rDNA基因测序确定链球菌种属,并对分离鉴定的链球菌进行药敏试验。结果显示,共分离得到3种链球菌,经生长特性、生化试验和16S rDNA基因测序确定分离菌株为无乳链球菌、停乳链球菌和乳房链球菌。药敏试验结果显示,链球菌分离株对头孢噻吩、链霉素、庆大霉素、卡那霉素、四环素和万古霉素均产生耐药性。结果表明,石河子地区奶牛乳房炎的致病菌中存在不同种链球菌,且对临床常用抗菌药具有不同程度的耐药性。本试验结果可为本地区奶牛乳房炎临床用药提供参考依据。 展开更多

关键词 乳房炎 链球菌 分离鉴定 药敏试验

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阿尔泰蝠蛾(鳞翅目:蝙蝠蛾科)幼虫食性的观察 被引量：5

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作者 王岩 兰文旭 +2 位作者 孙吉舟 敬波 陈创夫 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2020年第5期1210-1215,共6页

对阿尔泰山上的阿尔泰蝠蛾幼虫进行了为期6年的食性观察,发现阿尔泰蝠蛾幼虫在野外采食的植物是新疆芍药、块根芍药、白喉乌头、阿尔泰牡丹草、新疆藜芦、新疆猪牙花、阿尔泰羽衣草、柳兰、新疆白鲜和药用蒲公英,与蝠蛾属的其他昆虫不... 对阿尔泰山上的阿尔泰蝠蛾幼虫进行了为期6年的食性观察,发现阿尔泰蝠蛾幼虫在野外采食的植物是新疆芍药、块根芍药、白喉乌头、阿尔泰牡丹草、新疆藜芦、新疆猪牙花、阿尔泰羽衣草、柳兰、新疆白鲜和药用蒲公英,与蝠蛾属的其他昆虫不同。其中,大部分植物为新疆阿尔泰山上的特有植物和中药,甚至有些还有毒性。在人工饲养的情况下,阿尔泰蝠蛾喜食胡萝卜和南瓜。该观察结果将为以后阿尔泰蝠蛾幼虫的野外采集和人工饲养等研究提供一定的帮助。 展开更多

关键词 阿尔泰蝠蛾 蝙蝠蛾科 幼虫 食性

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新疆喀什地区结核分枝杆菌分离株氧氟沙星耐药基因gyrA突变位点分析 被引量：5

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作者 姬祥 郭南 +5 位作者 黄巧玲 杨彩虹 吴江东 袁俐 曹旭东 陈创夫 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第4期390-394,398,共6页

目的了解新疆喀什地区、石河子地区及华东地区结核分枝杆菌临床分离株对氧氟沙星的耐药性,分析耐药相关基因gyrA喹诺酮耐药决定区(QRDR)突变的位置及类型,以比例法药敏试验为参照,评价DNA测序技术检测氧氟沙星耐药的效率。方法采用比例... 目的了解新疆喀什地区、石河子地区及华东地区结核分枝杆菌临床分离株对氧氟沙星的耐药性,分析耐药相关基因gyrA喹诺酮耐药决定区(QRDR)突变的位置及类型,以比例法药敏试验为参照,评价DNA测序技术检测氧氟沙星耐药的效率。方法采用比例法药敏试验检测191株结核分枝杆菌临床分离株对氧氟沙星药物的耐药性;对喹诺酮类药物耐药相关基因gyrA的QRDR区进行扩增与测序,分析耐药相关突变位点。以药敏试验结果为标准,通过Kappa值评价DNA测序和药敏试验在结核分枝杆菌临床分离株氧氟沙星耐药检测的一致性。结果 191株临床分离株结核分枝杆菌中16株为氧氟沙星耐药株,氧氟沙星总耐药率为8.37%。对gyrA基因QRDR区域扩增后测序,共发现4个位点存在突变;分别是第56、74、90、94位密码子。其中,第56位密码子处由CTC→CTG,为同义突变。74位密码子突变均发生在喀什分离株,由GCC→GTA,氨基酸由Ala突变为Val;90位密码子由GCG→GTG,氨基酸由Ala突变为Val;94位密码子突变占临床分离株耐药位点突变的71%,共发现GAC→TAC、GAC→GCC、GAC→GGC3种突变类型,第94位氨基酸Asp分别突变为Thr、Ala、Gly。与药敏试验结果比较,DNA测序对结核分枝杆菌临床分离株氧氟沙星耐药检测具有高度一致性(Kappa=0.895)。结论 gyrA基因第74、90、94位密码子的突变与结核分枝杆菌对氧氟沙星药耐药有关,喀什分离株存在74位新突变位点。用DNA测序技术分析结核分枝杆菌gyrA基因氧氟沙星耐药相关突变对判断结核分枝杆菌氧氟沙星类药物耐药性具有较高的灵敏度和特异性,可为结核分枝杆菌氟沙星耐药性诊断提供依据。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 GYRA基因 突变位点 DNA测序 耐药性

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结核分枝杆菌Ag85蛋白复合物的原核表达及其在血清学诊断中的应用研究 被引量：5

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作者 姬祥 白欣煜 +4 位作者 刘国辉 何金科 张红梅 曹旭东 陈创夫 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第8期859-864,869,共7页

目的构建结核分枝杆菌Ag85复合物原核表达载体并表达和纯化重组蛋白,评价该家族蛋白在结核病血清学诊断中的应用价值。方法以标准株H37Rv基因组为PCR模板扩增fbpA、fbpB及fbpC基因并克隆至原核表达载体,转化至C43(DE3)菌株后经诱导、表... 目的构建结核分枝杆菌Ag85复合物原核表达载体并表达和纯化重组蛋白,评价该家族蛋白在结核病血清学诊断中的应用价值。方法以标准株H37Rv基因组为PCR模板扩增fbpA、fbpB及fbpC基因并克隆至原核表达载体,转化至C43(DE3)菌株后经诱导、表达、纯化获得重组蛋白Ag85A、Ag85B、Ag85C。分别以纯化蛋白包被酶标板,采用方阵滴定确定Ag85A、Ag85B、Ag85C蛋白间接ELISA的最佳条件,用优化的ELISA检测367份健康对照组血清及86份痰涂阳性结核病患者血清中的特异IgM、IgG抗体。结果成功构建Ag85复合物基因的重组质粒,经诱导表达获得Ag85A、Ag85B、Ag85C重组蛋白。分别以纯化的Ag85A、Ag85B、Ag85C为包被抗原,采用ELISA检测结核病人血清IgG抗体,灵敏度分别为65.1%、69.8%和41.8%,特异性分别为75.1%、78.1%和64.2%;以Ag85B+Ag85A或Ag85CIgG抗体阳性为判断标准,检测血清结核分枝杆菌IgG抗体的灵敏度为60.4%,特异性为86.1%。结论以Ag85B+Ag85A或Ag85C血清IgG抗体阳性为判断标准,检测血清结核分枝杆菌IgG抗体具有较好的灵敏度与特异性,可作为结核病血清学诊断方法。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 Ag85复合物 蛋白表达 间接ELISA 血清学诊断

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基于布鲁氏菌Dps蛋白间接ELISA检测方法的建立与初步应用 被引量：4

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作者 孙天浩 关飞虎 +5 位作者 张倩 李楠 张博 苗玉和 王震 陈创夫 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期143-151,共9页

为建立一种布鲁氏菌病早期快速诊断的血清学方法,进一步加强对布鲁氏菌病的防控。对布鲁氏菌Dps蛋白进行生物信息学分析、原核表达,将纯化后的重组蛋白作为包被抗原,建立了布鲁氏菌病血清学间接ELISA检测方法并进行初步应用。结果显示,... 为建立一种布鲁氏菌病早期快速诊断的血清学方法,进一步加强对布鲁氏菌病的防控。对布鲁氏菌Dps蛋白进行生物信息学分析、原核表达,将纯化后的重组蛋白作为包被抗原,建立了布鲁氏菌病血清学间接ELISA检测方法并进行初步应用。结果显示,当重组蛋白Dps包被量为0.25μg,5%脱脂奶粉溶液封闭1.5 h,用稀释度为1∶1000的一抗孵育1 h,稀释度为1∶5000的二抗孵育0.5 h,显色20 min时建立的间接ELISA方法条件最优,该方法的临界值D_(450)为0.694,与凝集试验的总符合率达到91.1%(82/90),同时具有较好的特异性和重复性。应用本方法对新疆伊犁地区2个羊场的308份血清进行检测,布鲁氏菌抗体阳性率为2.27%(7/308)。结果表明,本研究建立了特异性高、重复性好的血清学间接ELISA检测方法,为布鲁氏菌病的诊断和流行病学调查提供了参考。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 Dps蛋白 原核表达 间接ELISA

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布鲁氏菌OMP10介导的小鼠骨髓源树突状细胞活化及其对小鼠T细胞增殖影响的研究 被引量：3

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作者 徐朕宇 王月丽 +8 位作者 易继海 童志霞 邓肖玉 杨宁宁 徐明国 王勇 孟闯 苗玉和 陈创夫 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期1084-1090,共7页

为探究布鲁氏菌外膜蛋白10(OMP10)介导小鼠骨髓源性树突状细胞(BMDC)的活化机制及其对小鼠T淋巴细胞增殖的影响。本研究通过体外分离培养BMDC细胞6 d后,将重组OMP10(rOMP10)与BMDC共孵育24 h,经流式细胞术分析BMDC表面共刺激分子(CD40、... 为探究布鲁氏菌外膜蛋白10(OMP10)介导小鼠骨髓源性树突状细胞(BMDC)的活化机制及其对小鼠T淋巴细胞增殖的影响。本研究通过体外分离培养BMDC细胞6 d后,将重组OMP10(rOMP10)与BMDC共孵育24 h,经流式细胞术分析BMDC表面共刺激分子(CD40、CD80、CD86)的表达情况,结果显示,与PBS组相比,rOMP10孵育BMDC能够诱导细胞表面共刺激分子CD40、CD80、CD86的表达量显著升高(P<0.001)。同时采用ELISA检测共孵育后BMDC细胞因子(TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-12、IL-10、IL-4)的表达情况,结果显示,与PBS组相比,rOMP10孵育BMDC能够诱导其细胞因子(IL-6、IL-12、TNF-α、IFN-γ)表达量极显著升高(P<0.01),但IL-4和IL-10的表达量极显著降低(P<0.001)。进一步采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测共孵育后BMDC的Toll样受体(TLRs)和MHC-I、MHC-II类分子的mRNA转录水平,结果显示,与PBS组相比,rOMP10能够诱导BMDC的TLR2和TLR4(P<0.05),以及抗原递呈相关分子MHC-I和MHC-II的mRNA转录水平极显著升高(P<0.01)。另外,将小鼠脾脏T淋巴细胞与rOMP10预处理的BMDC共孵育后,经MTT试验检测T淋巴细胞增殖效率,结果显示,rOMP10处理组比PBS组T淋巴细胞的刺激指数增加2倍以上,且在树突状细胞和淋巴细胞比值(DCs:T)为1:50时,rOMP10处理组的T淋巴细胞增殖效率最高。综上所述,本研究首次证实布鲁氏菌OMP10能够诱导BMDC的活化,促进抗原递呈分子的转录,从而介导T淋巴细胞的高效增殖,该结果为解析布鲁氏菌感染与宿主免疫机制奠定实验基础,同时也为布鲁氏菌新型亚单位疫苗研发提供数据支持。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 外膜蛋白OMP10 小鼠骨髓源树突状细胞 抗原递呈 T淋巴细胞增殖

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高分辨率熔解曲线检测结核分枝杆菌对利福平耐药性研究 被引量：4

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作者 杨敏 于潞 +3 位作者 吴长新 张辉 陈创夫 曹旭东 《中国预防医学杂志》 CAS CSCD 2019年第3期161-164,共4页

目的评价高分辨率熔解曲线(high resolution melt,HRM)技术检测结核分枝杆菌对利福平耐药性的临床应用价值。方法用传统结核分枝杆菌药敏试验对新疆石河子大学人畜共患病实验室保存的50株临床分离菌进行耐药性检测。以rpoB基因的利福平... 目的评价高分辨率熔解曲线(high resolution melt,HRM)技术检测结核分枝杆菌对利福平耐药性的临床应用价值。方法用传统结核分枝杆菌药敏试验对新疆石河子大学人畜共患病实验室保存的50株临床分离菌进行耐药性检测。以rpoB基因的利福平耐药决定区为靶标设计引物进行高分辨率熔解曲线分析,判断分离出的结核分枝杆菌是否对利福平耐药。应用SPSS 17.0分析,以传统结核分枝杆菌药敏试验结果为标准,计算两种方法的符合率。用χ~2检测分析比例法药敏结果与高分辨率熔解曲线检测结果的差异性。用Kappa检测分析两种结果的一致性。结果药敏试验结果显示,50株菌中有1株为非结核分枝杆菌;49株中有20株同时对利福平和异烟肼耐药、1株仅对利福平耐药;HRM检测结果显示,21株对利福平耐药,28株为敏感株。以传统药敏试验为参考,HRM检测利福平耐药性的敏感性为86.36%,特异性为92.59%,经Kappa检验显示,两种方法检测结果具有高度一致性。结论 HRM可快速检测结核分枝杆菌对利福平的耐药性,具有较高灵敏度,在耐药结核病的早期诊断上有一定的应用价值。 展开更多

关键词 高分辨率熔解曲线(HRM) 结核分枝杆菌 利福平 耐药性 药敏试验 RPOB基因 分子诊断

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