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中药抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用机制研究进展 被引量:8
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作者 陈天宝 王娅妮 +5 位作者 刘宝玲 王刚 王晓虎 柳旭辉 蔡汝健 贺东生 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期2114-2129,共16页
猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的烈性、高度接触性传染病,主要引起母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道... 猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的烈性、高度接触性传染病,主要引起母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道症状。疫苗免疫是防控PRRS的主要手段,但由于PRRSV毒株高度变异性导致疫苗对该病的效果仍不理想。中药(traditional Chinese medicine,TCM)活性成分众多,生理活性多样,包括抗菌、抗病毒和抗氧化等作用,是抗病毒药物的研究热点。研究证明,中药能以单体或复方的方式对PRRSV产生抑制增殖、阻断吸附和杀灭病毒的作用,以及对机体免疫反应产生影响。关于中药抗PRRSV的机制包括直接抗病毒机制和间接抗病毒机制。直接抗病毒机制即中药有效成分对病毒复制周期的直接影响,主要表现为抑制病毒的吸附、内化、复制、大分子组装和释放中的一环,从而达到抑制病毒的作用。间接抗病毒机制即中药有效成分通过调节细胞因子合成、炎症信号通路、细胞凋亡、氧化代谢和免疫系统等途径来抑制病毒对宿主细胞的负面影响,保证机体免疫反应产生的同时减少机体的损伤。由于中药成分复杂,且抗PRRSV机制尚不明确,因此,笔者以抗病毒作用机制为依据对近年来中药抗PRRSV的研究进行综述,以期为中药防控PRRSV提供理论依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 疫苗 中药(TCM) 抗病毒作用 机制
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猪伪狂犬病毒抗体检测方法的研究进展 被引量:1
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作者 卢立康 许楷惠 +4 位作者 黄元 蔡汝建 王晓虎 陈晶 向华 《广东畜牧兽医科技》 2024年第2期52-56,共5页
伪狂犬病,也称阿氏病(Aujeszky'sdisease),是由伪狂犬病毒(PRV)引起的一种高度传染性疾病。在没有特定宿主的情况下,伪狂犬病毒可以侵入多种哺乳动物,包括猪、牛、羊等,从而导致易感动物发生严重的临床症状和急性死亡。我国于20世... 伪狂犬病,也称阿氏病(Aujeszky'sdisease),是由伪狂犬病毒(PRV)引起的一种高度传染性疾病。在没有特定宿主的情况下,伪狂犬病毒可以侵入多种哺乳动物,包括猪、牛、羊等,从而导致易感动物发生严重的临床症状和急性死亡。我国于20世纪50年代首次报道猪伪狂犬病,且自2011年以来,部分地区出现新的猪伪狂犬病变异株,致使养猪业遭受严重的经济损失。尽管科学家们一直在致力于诊断方法的设计和相关疫苗的开发,但伪狂犬病仍在养猪业广泛存在,近些年发现其对人类的健康也存在着潜在威胁,从而引起了世界范围内的强烈关注。目前我国的猪场普遍实行伪狂犬疫苗免疫,因此检测免疫后疫苗产生的抗体水平至关重要。本文总结目前对PRV的抗体检测方法,针对其优缺点进行对比分析,以对猪场临床上选择抗体检测方法提供参考。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 抗体检测 病毒中和试验 ELISA
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猪伪狂犬病病毒野毒LNA探针real-time PCR检测方法的建立 被引量:5
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作者 李艳 楚品品 +7 位作者 雷雯 勾红潮 蒋智勇 蔡汝健 宋帅 卞志标 杨东霞 李春玲 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2021年第1期36-41,共6页
本研究根据猪伪狂犬病病毒gE基因保守区域设计特异性引物和LNA-TaqMan探针,建立了基于LNA-TaqMan探针的猪伪狂犬病病毒野毒株荧光定量PCR检测方法。结果显示:所建立的方法能够特异性的检测出猪伪狂犬病病毒野毒株;灵敏度更高,最低检测... 本研究根据猪伪狂犬病病毒gE基因保守区域设计特异性引物和LNA-TaqMan探针,建立了基于LNA-TaqMan探针的猪伪狂犬病病毒野毒株荧光定量PCR检测方法。结果显示:所建立的方法能够特异性的检测出猪伪狂犬病病毒野毒株;灵敏度更高,最低检测下限为10个拷贝/μL;批内变异系数和批间变异系数分别为0.43%~0.64%、0.44%~2.34%,重复性良好。对67份临床样品进行检测,病毒分离培养法检测出23份阳性样品,LNA-TaqMan探针荧光定量PCR方法检测出26份阳性样品,常规TaqMan探针法检测出21份阳性样品,与病毒分离法比较,LNA-TaqMan探针法的符合率为96%。本研究建立的基于LNA-TaqMan探针检测猪伪狂犬病病毒野毒株的荧光定量PCR方法,为猪伪狂犬病的诊断和流行病学调查提供了可靠的技术支持。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 GE基因 LNA探针 实时荧光定量PCR
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鼻内黏膜免疫研究进展 被引量:4
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作者 李艳 楚品品 +5 位作者 蒋智勇 蔡汝健 勾红潮 宋帅 杨冬霞 李春玲 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第9期39-43,共5页
大多数病原体在机体的黏膜表面起始感染,因此黏膜免疫是机体抵御感染的第一道防线。黏膜免疫可通过多种途径实现,经鼻黏膜途径免疫是其中一种。鼻内黏膜免疫是机体抵抗呼吸道病原感染最有效的途径,它不仅能诱导局部黏膜免疫反应,还可诱... 大多数病原体在机体的黏膜表面起始感染,因此黏膜免疫是机体抵御感染的第一道防线。黏膜免疫可通过多种途径实现,经鼻黏膜途径免疫是其中一种。鼻内黏膜免疫是机体抵抗呼吸道病原感染最有效的途径,它不仅能诱导局部黏膜免疫反应,还可诱导全身系统免疫反应,是当前预防呼吸道疾病的研究热点。文章对鼻内黏膜免疫系统、M细胞介导的抗原摄取及转运、鼻黏膜免疫的运载系统及鼻黏膜免疫的应用等研究进展进行简要的介绍。 展开更多
关键词 局部黏膜免疫反应 系统免疫反应 鼻内黏膜免疫 M细胞 运载系统
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副猪嗜血杆菌lpxM基因缺失株构建及生物学特性分析 被引量:4
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作者 杨君 楚品品 +8 位作者 宋帅 蔡汝健 杨冬霞 卞志标 勾红潮 李艳 蒋智勇 李春玲 闫鹤 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第16期3394-3403,共10页
【目的】研究副猪嗜血杆菌脂寡糖合成相关基因lpxM对其生长、生物被膜形成能力、抗50%猪血清杀菌能力、对巨噬细胞毒力和抗生素敏感性部分生物特性的影响,为揭示HPS致病机制,lpxM基因缺失疫苗的构建奠定理论基础,为猪场防治HPS进行药物... 【目的】研究副猪嗜血杆菌脂寡糖合成相关基因lpxM对其生长、生物被膜形成能力、抗50%猪血清杀菌能力、对巨噬细胞毒力和抗生素敏感性部分生物特性的影响,为揭示HPS致病机制,lpxM基因缺失疫苗的构建奠定理论基础,为猪场防治HPS进行药物选择时提供依据。【方法】以高致病性血清5型HPS地方分离株H45为研究对象,自杀性质粒PK18mobsacB为载体,通过自然转化法将构建好的重组质粒转进H45,使其在抗生素的压力下发生同源重组,最终经过抗生素筛选并通过PCR和测序验证得到lpxM基因缺失株H45-△lpxM,比较两者之间部分生物学特性的差异。测定两者的OD600-t关系曲线比较生长情况;用结晶紫染色法比较两者在培养24h后生物被膜形成的能力;测定两者在50%猪血清中存活率,比较两者的抗血清补体杀菌能力;将两者同时刺激小鼠单核巨噬细胞RAW264.7细胞,作用时间为6、12和24h,检测细胞培养上清液中LDH的释放量,比较两者对巨噬细胞毒力影响;利用K-B纸片扩散法研究两者对氨苄西林等临床上常用13种抗生素和多粘菌素B抗生素敏感性,通过测定抑菌圈直径来并参照耐药标准判断对抗生素的敏感性。【结果】成功构建lpxM基因缺失株H45-△lpxM,生长情况比较发现菌株生长前期缺失株慢于野生株,8h后保持一致,结果表明lpxM基因缺失能在一定程度上抑制H45的生长;两者均能形成生物被膜,但是缺失株弱于野生株;野生菌株在50%猪血清中存活率为16.1%,而缺失株只有0.71%,缺失株明显低于野生菌株;两者均能引起巨噬细胞的死亡,作用6、12和24h后,野生株对细胞的致死率分别为6.63%、10.86%和22.17%,而缺失株对细胞的致死率为2.62%、6.35%和18.01%,结果表明随着作用时间的延长,两者对细胞的毒力作用越来越大,具有一定的时间依赖性,在各个时间点,缺失株的毒力作用均低于野生株;抗生素敏感性结果发 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 lpxM基因 生物被膜 抗血清杀菌 细胞毒性 抗生素耐药性
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1株多谱系重组PRRSV的分离鉴定及全基因组特性和重组模式分析
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作者 韩淑杰 邓可辉 +1 位作者 蔡汝健 贺东生 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第21期69-76,127,共9页
为了分析广东地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的全基因组特性和重组模式,试验采用RT-PCR检测、病原分离培养及PCR和IFA鉴定等方法对广东省某规模化猪场采集的疑似猪繁殖与呼吸... 为了分析广东地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的全基因组特性和重组模式,试验采用RT-PCR检测、病原分离培养及PCR和IFA鉴定等方法对广东省某规模化猪场采集的疑似猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)发病仔猪的肺脏组织进行检测,并对分离得到的毒株进行全基因组序列分析和重组分析。结果表明:分离株属于PRRSV,命名为GD2020,该分离株全基因组的大小为15305 bp(不含ploy A);GD2020分离株位于谱系3分支中,为QYYZ-like毒株,与谱系3的GD-KP毒株的相似性最高(87.4%),与Lelystad virus毒株的相似性最低(60.6%);GD2020分离株以QYYZ毒株为主要亲本,由谱系8的JXA1毒株、谱系1的NADC30-like毒株和谱系5的VR2332-like毒株提供重组片段的多谱系重组毒株,其基因组中存在4个重组断点,即1433 bp、6190 bp、6671 bp和7753 bp,分别位于Nsp2、Nsp5、Nsp7和Nsp9基因区域。说明试验成功分离到1株以QYYZ毒株为主要亲本,由谱系8、谱系1和谱系5毒株提供重组片段的多谱系重组的PRRSV毒株。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 类QYYZ 分离 鉴定 全基因组测序 重组分析 演化分析
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猪链球菌纳米PCR检测方法的建立和应用 被引量:4
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作者 张昆丽 林本夫 +6 位作者 席振军 杨冬霞 卞志标 宋帅 蒋智勇 蔡汝健 李春玲 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2021年第4期212-217,共6页
为了建立一种高效、灵敏的猪链球菌(SS)检测方法,针对SS的谷氨酸脱氢酶基因(gdh)合成特异性引物,通过优化退火温度与引物浓度,经特异性、敏感性、重复性以及临床样品检测,建立了SS的纳米PCR检测方法。特异性试验结果显示,该方法仅能从S... 为了建立一种高效、灵敏的猪链球菌(SS)检测方法,针对SS的谷氨酸脱氢酶基因(gdh)合成特异性引物,通过优化退火温度与引物浓度,经特异性、敏感性、重复性以及临床样品检测,建立了SS的纳米PCR检测方法。特异性试验结果显示,该方法仅能从SS的基因组序列中扩增得到687 bp的特异性序列,与猪胸膜肺炎放线杆菌、副猪嗜血杆菌、猪大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌无交叉反应,且能同时识别1、2、7和9型4个目前流行的SS主要血清型,满足临床上多血清型SS感染检测的需要;敏感性试验结果显示,该方法对SS的最低检测下限为10 cfu/mL,与普通PCR方法相比,灵敏度提高了100倍;重复性试验表明,该方法检测效果稳定,重复性较好。用该方法和普通PCR对临床上收集的44份疑似SS感染样品进行检测,阳性率分别为72.7%(32/44),54.5%(24/44),表明该纳米PCR方法具有灵敏度高,特异性好等优点。综上,本研究建立的SS纳米PCR检测方法,能够准确、高效检测SS,为猪链球菌病的临床诊断和流行病学调查提供了技术支持。 展开更多
关键词 猪链球菌 谷氨酸脱氢酶基因 纳米PCR 临床诊断
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不同PRRS疫苗组合对仔猪免疫效果的研究 被引量:3
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作者 蔡汝健 蒋智勇 +5 位作者 勾红潮 楚品品 李艳 宋帅 徐志宏 李春玲 《广东农业科学》 CAS 2019年第10期93-98,共6页
【目的】针对猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS)毒株存在多样性和疫苗免疫效果不佳的问题,探索PRRS疫苗对仔猪最佳免疫方案。【方法】分别在A、B、C 3个猪场开展试验,每个猪场采用4种不同的PRRS... 【目的】针对猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS)毒株存在多样性和疫苗免疫效果不佳的问题,探索PRRS疫苗对仔猪最佳免疫方案。【方法】分别在A、B、C 3个猪场开展试验,每个猪场采用4种不同的PRRS疫苗组合:第1种,14日龄同时免疫PRRS弱毒苗和灭活苗;第2种,4日龄免疫PRRS弱毒苗和35日龄免疫灭活苗;第3种,14日龄和35日龄免疫弱毒苗;第4种,14日龄免疫弱毒苗。通过免疫后的抗体滴度、病毒血症和生产参数评估PRRS疫苗免疫效果。【结果】不同免疫组合比较发现,A2、B3、C3抗体水平最高,S/P值分别为2.50、2.63和2.99;A2、B2、B3、C1血清中PRRSV核酸阳性率最低,分别为12.5%、0、0、6.3%;A1、B2、C1发病率最低,分别为10%、2%和8%。【结论】14日龄同时免疫PRRS弱毒苗和灭活苗,14日龄免疫PRRS弱毒苗和35日龄免疫灭活苗,两种免疫组合免疫效果最好。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 免疫方案 抗体滴度 病毒血症 免疫效果
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基因重组技术在猪伪狂犬病毒基因工程疫苗中的研究进展 被引量:2
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作者 柯海意 王帅 +5 位作者 徐民生 蔡汝健 勾红潮 臧莹安 李春玲 简运华 《广东农业科学》 CAS 2021年第5期124-131,共8页
猪伪狂犬病是一种由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)感染引起的急性高度接触性传染病,可造成不同日龄的猪发病,给养猪业造成了严重的经济损失。预防、控制甚至消灭猪伪狂犬病的主要措施之一是疫苗免疫接种。通过基因重组技术对PR... 猪伪狂犬病是一种由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)感染引起的急性高度接触性传染病,可造成不同日龄的猪发病,给养猪业造成了严重的经济损失。预防、控制甚至消灭猪伪狂犬病的主要措施之一是疫苗免疫接种。通过基因重组技术对PRV关键毒力基因进行改造,敲除毒力基因或插入免疫增强基因,是降低PRV毒力或提高病毒免疫保护效果的有效方法之一,也是研制安全高效PRV基因工程疫苗的重要手段。从基因同源重组、Cre/lox P位点特异性重组、细菌人工染色体和CRISPR基因编辑等不同基因重组技术应用方面对猪PRV基因工程疫苗的研制进行综述,为PRV重组疫苗的进一步深入研究提供参考。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病毒 基因工程疫苗 基因编辑 同源重组 位点特异 CRISPR
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胸膜肺炎放线杆菌纳米PCR检测方法的建立与应用 被引量:1
10
作者 张昆丽 席振军 +5 位作者 徐民生 李艳 勾红潮 楚品品 蔡汝健 李春玲 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第2期114-119,共6页
为了建立一种高效、灵敏的胸膜肺炎放线杆菌(APP)检测方法,本研究针对APP的血清型保守基因-毒素4(APxⅣ)序列合成特异性引物,通过优化引物浓度、退火温度等建立了APP纳米PCR检测方法。敏感性试验结果显示,该纳米PCR对APP的检测下限为1&#... 为了建立一种高效、灵敏的胸膜肺炎放线杆菌(APP)检测方法,本研究针对APP的血清型保守基因-毒素4(APxⅣ)序列合成特异性引物,通过优化引物浓度、退火温度等建立了APP纳米PCR检测方法。敏感性试验结果显示,该纳米PCR对APP的检测下限为1×10^(2)CFU/mL,其灵敏度是普通PCR的10倍;特异性结果显示,该方法仅从APP核酸样品可检测到约417 bp的特异性目的条带,而对猪链球菌、副猪嗜血杆菌、大肠杆菌、沙门菌、金色葡萄球菌等其他病原的检测结果均为阴性;应用本研究建立的纳米PCR技术检测了41份临床疑似APP感染病料,结果显示常规PCR和纳米PCR检测APP阳性率分别为17.07%(7/41)和19.51%(8/41)。以上结果表明,本研究成功建立的APP纳米PCR检测方法敏感性高、特异性好,可用于APP感染的临床诊断及流行病学调查。 展开更多
关键词 胸膜肺炎放线杆菌 纳米PCR 检测方法
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免疫胶体金诊断技术在兽医的应用研究现状
11
作者 许楷惠 卢立康 +4 位作者 黄元 蔡汝健 王晓虎 陈晶 向华 《广东畜牧兽医科技》 2023年第4期60-65,84,共7页
免疫胶体金诊断技术是以胶体金为示踪标记物应用于抗原抗体的一种体外诊断技术,具有反应迅速、操作简单、成本低、便携等优点。目前,免疫胶体金诊断技术广泛应用于医院、实验室、野外及公共场所的现场诊断。该文介绍了免疫胶体金诊断技... 免疫胶体金诊断技术是以胶体金为示踪标记物应用于抗原抗体的一种体外诊断技术,具有反应迅速、操作简单、成本低、便携等优点。目前,免疫胶体金诊断技术广泛应用于医院、实验室、野外及公共场所的现场诊断。该文介绍了免疫胶体金诊断技术的基本原理、优缺点,并整理讨论了免疫胶体金诊断技术两种主要方法——免疫层析法和斑点金免疫渗滤法在国内外动物医学诊断中的应用研究现状。 展开更多
关键词 免疫胶体金 免疫检测 诊断
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非洲猪瘟病毒LNA引物PCR检测方法的建立及优化 被引量:1
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作者 李艳 张煜轩 +8 位作者 楚品品 蒋智勇 席振军 蔡汝健 勾红潮 张昆丽 宋帅 卞志标 李春玲 《中国农学通报》 2021年第29期107-113,共7页
为了建立一种便捷、快速且精准的非洲猪瘟病毒的检测方法,本研究根据GenBank中公布的ASFV p72基因序列,设计了一对特异性引物,并对引物中的适当碱基进行锁核酸修饰,通过优化退火温度、引物浓度,建立了非洲猪瘟病毒的锁核酸修饰引物PCR... 为了建立一种便捷、快速且精准的非洲猪瘟病毒的检测方法,本研究根据GenBank中公布的ASFV p72基因序列,设计了一对特异性引物,并对引物中的适当碱基进行锁核酸修饰,通过优化退火温度、引物浓度,建立了非洲猪瘟病毒的锁核酸修饰引物PCR检测方法。结果表明,该方法具有良好的敏感性和特异性,检测灵敏度可以达到3×101copies/uL,比常规引物PCR方法的灵敏度提高了100倍,比real-time PCR方法的灵敏度提高了10倍,对猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒等病原基因组均无扩增,特异性良好。72份临床样品的检测结果与OIE推荐的qPCR方法检测结果一致,符合率为100%。本研究成功建立了非洲猪瘟病毒的LNA引物PCR检测方法,方法的特异性强、敏感性高,操作简单,为非洲猪瘟病毒的检测提供了一种新的、更加敏感的检测技术。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 p72基因 LNA引物 PCR检测方法
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广东及周边省份猪繁殖与呼吸综合征病毒2型谱系8毒株变异规律和传播研究
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作者 康溥 任照文 +3 位作者 蔡汝健 吕宗吉 黄育浩 王晓虎 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期2001-2011,共11页
【目的】使用贝叶斯系统动力学方法重建猪繁殖与呼吸综合征病毒2型(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus 2,PRRSV-2)谱系8毒株在广东、广西、湖南、江西和福建5个省份间的传播及遗传演化规律,为猪繁殖与呼吸综合征(Por... 【目的】使用贝叶斯系统动力学方法重建猪繁殖与呼吸综合征病毒2型(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus 2,PRRSV-2)谱系8毒株在广东、广西、湖南、江西和福建5个省份间的传播及遗传演化规律,为猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)的针对性防控提供参考。【方法】本研究对来自上述5省所有可用的PRRSV-2的ORF5序列进行系统发育分析,选取其中的谱系8毒株,剔除重组序列及可疑序列。将空间数据结合病原体的进化与流行病学特征进行分析,利用BEAST及相关软件计算病毒的共同祖先、核苷酸替代速率及不同地理位置间可能的传播方向和迁移速率等。【结果】系统发育分析显示,南方5省猪群中流行的PRRSV-2被分为4个谱系,其中154株被鉴定为谱系8毒株。在剔除1株重组毒株和3株可疑毒株后,来自上述5省的谱系8毒株ORF5序列具有强烈的时间信号,且最佳拟合模型为GTR+I+G。贝叶斯系统动力学分析表明,5省间谱系8毒株具有2.748×10^(-3)核苷酸替换/位点/年(95%HPD:2.053×10^(-3)~3.428×10^(-3))的核苷酸替代速率,它们的最近共同祖先可能出现在2002年(95%HPD:1998-2005年)。据SPREAD3计算,广西的毒株向广东(Rate=0.876)、湖南(Rate=0.892)、江西(Rate=0.883)、福建(Rate=0.889)传播,以及部分福建毒株向广西(Rate=0.897)传播。【结论】自2005年以来,广东、广西、湖南、江西和福建5省猪群中流行的PRRSV-2具有丰富的遗传多样性,其中谱系8毒株具有较高的核苷酸替代速率,且有效种群大小在2006-2007年和2009-2013年明显上升。同时,广东、广西、湖南、江西和福建5省谱系8毒株的最近共同祖先可追溯至2002年,且以广西作为潜在发源地在该地区持续传播。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 分子流行病学 贝叶斯系统动力学 系统地理学
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MLKL基因敲除对猪伪狂犬病病毒复制的影响 被引量:1
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作者 谢思豪 勾红潮 +4 位作者 卞志标 李斌 蔡汝健 臧莹安 李春玲 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第5期1934-1941,共8页
【目的】构建混合谱系激酶结构域样(mixed lineage kinase domain-like,MLKL)基因敲除的PK-15细胞株(PK-15 MLKL-KO),研究敲除MLKL基因对猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)复制的影响。【方法】根据MLKL序列设计特异性编辑位点,利... 【目的】构建混合谱系激酶结构域样(mixed lineage kinase domain-like,MLKL)基因敲除的PK-15细胞株(PK-15 MLKL-KO),研究敲除MLKL基因对猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)复制的影响。【方法】根据MLKL序列设计特异性编辑位点,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建MLKL-sgRNA编辑载体,转染至PK-15细胞,经嘌呤霉素药物筛选获得多克隆细胞系,通过有限稀释法获得PK-15 MLKL-KO单克隆细胞株。通过靶基因组PCR、测序和Western blotting验证MLKL基因在PK-15细胞上的敲除水平;采用Reed-Muench法检测病毒增殖水平;采用PI染色和荧光显微镜观察细胞坏死情况。【结果】试验成功构建MLKL-sgRNA载体,筛选出1株MLKL基因缺失647 bp的PK-15细胞株,Western blotting未检测到MLKL蛋白的表达。与PK-15细胞相比,PK-15 MLKL-KO细胞极显著或显著提高了PRV GD-WH(感染后36 h除外)和PRV Bartha-K61的病毒滴度(P<0.01;P<0.05)。PRV GD-WH和PRV Bartha-K61感染PK-15 MLKL-KO细胞后,坏死细胞明显减少。【结论】本研究构建了MLKL基因敲除的PK-15细胞株,与PK-15细胞相比,PK-15 MLKL-KO细胞显著提高了PRV GD-WH和PRV Bartha-K61的复制和存活能力,为PRV Bartha-K61疫苗生产过程中提高病毒产量提供了一种可行性策略。 展开更多
关键词 MLKL基因 CRISPR/Cas9基因编辑技术 敲除 PK-15细胞 猪伪狂犬病病毒(PRV)
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基于无人车巡检的钢材缺陷自动检测方法研究
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作者 蔡汝健 张洁辉 池鸿源 《无线互联科技》 2022年第10期134-136,共3页
文章针对人工检验钢材缺陷检测不准确的问题,提出了基于无人车巡检的钢材缺陷自动检测方法。首先,利用无人车对钢材实施巡回检测;其次,在无人车上安装钢材缺陷声波探测器,获取钢材缺陷产生的声波发射信号;最后,利用无人车对钢材进行实... 文章针对人工检验钢材缺陷检测不准确的问题,提出了基于无人车巡检的钢材缺陷自动检测方法。首先,利用无人车对钢材实施巡回检测;其次,在无人车上安装钢材缺陷声波探测器,获取钢材缺陷产生的声波发射信号;最后,利用无人车对钢材进行实时检测,定位钢材缺陷位置。通过实验检测使用效果,经分析可知,使用无人车巡检的钢材缺陷自动检测方法能够提高对钢材缺陷检测的准确率。 展开更多
关键词 无人车 钢材 缺陷 自动检测
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猪链球菌临床分离株对四环素类抗生素的耐药性和耐药基因分析 被引量:12
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作者 刘宝玲 楚品品 +6 位作者 李春玲 杨冬霞 蒋智勇 张昆丽 宋帅 勾红潮 蔡汝健 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第7期2796-2804,共9页
【目的】了解广东地区猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)临床分离株对四环素类抗生素的耐药性及耐药基因携带情况。【方法】采用药敏纸片扩散法对2016-2020年分离自广东地区的34株猪链球菌进行四环素类抗生素耐药分析,并通过PCR方法... 【目的】了解广东地区猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)临床分离株对四环素类抗生素的耐药性及耐药基因携带情况。【方法】采用药敏纸片扩散法对2016-2020年分离自广东地区的34株猪链球菌进行四环素类抗生素耐药分析,并通过PCR方法检测四环素耐药基因tetA、tetC、tetD、tetM、tetO和tetX携带情况。【结果】34株猪链球菌对四环素的耐药率高达100%(34/34),其次为米诺环素82.4%(28/34)、多西环素47.1%(16/34)。34株猪链球菌中3重耐药菌株有15株,占比44.1%(15/34),2重耐药菌株有14株,占比41.1%(14/34),耐1种药物的菌株5株,占比14.7%(5/34)。耐药基因检测结果显示,tetA、tetC、tetD、tetM、tetO和tetX基因携带率分别为0、0、0、14.7%(5/34)、100%(34/34)和0。【结论】广东地区猪链球菌临床分离株四环素类抗生素的耐药率较高,主要携带的四环素耐药基因为tetO和tetM基因。 展开更多
关键词 猪链球菌 四环素类抗生素 耐药性 耐药基因
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广东省猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因遗传变异分析 被引量:8
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作者 蒋智勇 楚品品 +2 位作者 陈天宝 李春玲 蔡汝健 《广东农业科学》 CAS 2022年第4期97-105,共9页
【目的】监测2021年广东地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)的分子流行动态,为PRRSV综合防控措施的制定提供参考。【方法】在广东省内不同地区PRRSV检测为阳性的37个规模猪场采集... 【目的】监测2021年广东地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)的分子流行动态,为PRRSV综合防控措施的制定提供参考。【方法】在广东省内不同地区PRRSV检测为阳性的37个规模猪场采集521份患病猪组织样本进行PRRSV检测。对样本进行ORF5基因测序,采用DNAStar分析ORF5核苷酸的同源性及其推导氨基酸的同源性,并用Mega7.0构建基于ORF5基因的系统遗传进化树。【结果】从37个猪场采集的样品PRRSV阳性率为24.4%,猪场阳性率为45.9%。通过测序分析获得17株来自不同猪场的PRRSV ORF5基因序列,遗传进化分析表明所有毒株均属于北美毒株(PRRSV 2),其中有5株属于Lineage 8(JXA1-like和CH-1a-like)谱系,9株属于Lineage 1(NADC30-like和NADC34-like)谱系,3株属于Lineage 3(QYYZ-like)谱系,没有监测到Lineage 5(VR2332-like)谱系的毒株。17株PRRSV毒株的ORF5基因之间核苷酸序列同源性为81.3%~99.5%,推导的氨基酸序列同源性为80.0%~98.3%。【结论】2021年广东省PRRSV流行株以Lineage 1(NADC30-like和NADC34-like)和Lineage 8(JXA1-like和CH-1a-like)谱系为主,占比分别为52.94%和29.41%,Lineage 3(QYYZ-like)谱系降为次要流行株,占比为17.65%。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) ORF5基因 NADC30毒株 NADC34毒株 遗传变异
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戊型肝炎病毒研究进展 被引量:1
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作者 刘丁语 何振文 +4 位作者 刘宝玲 王刚 王晓虎 谭臣 蔡汝健 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期736-747,共12页
戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus, HEV)是一种单链、非包膜的RNA病毒,目前可分为8个基因型。作为一种人兽共患病原体,HEV能引起人的急性病毒性肝炎和动物的感染,其主要的传播途径为粪-口传播,也可通过输血和母婴传播。HEV主要在发展中... 戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus, HEV)是一种单链、非包膜的RNA病毒,目前可分为8个基因型。作为一种人兽共患病原体,HEV能引起人的急性病毒性肝炎和动物的感染,其主要的传播途径为粪-口传播,也可通过输血和母婴传播。HEV主要在发展中国家流行,而欧美等发达国家也有散发的病例。目前,检测HEV的常用方法是实时荧光定量RT-PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA),也有学者利用反转录重组酶聚合酶扩增(RT-RPA)和CRISPR系统等新型检测方法进行HEV检测。在药物治疗方面,可用利巴韦林、干扰素或多烯磷脂酰胆碱(PPC)等化合物治疗HEV引起的感染,也可使用中药单味或复方改善临床症状并作协同治疗。接种疫苗被认为是预防和控制HEV感染的有效手段,但目前仍无有效的HEV体外细胞培养系统,传统的灭活苗和减毒苗无法批量制备。当前HEV疫苗的研究方向主要有基因重组蛋白疫苗、DNA疫苗、联合疫苗和口服疫苗等。接种疫苗是预防戊型肝炎的重要措施,采用切断传播途径为主的综合性预防措施也可控制该病的流行。笔者主要通过对HEV的检测方法、药物治疗和疫苗免疫等方面的研究进展进行归纳和总结,并对HEV的防控研究进行展望,以期为HEV的预防与控制提供新的思路。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒(HEV) 检测方法 治疗 疫苗
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1株致仔猪脑膜炎的猪链球菌的分离鉴定及致病性分析 被引量:1
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作者 刘丁语 刘宝玲 +8 位作者 何振文 罗琴 乔常宏 陈翔宇 王晓虎 向华 王刚 谭臣 蔡汝健 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期2143-2153,共11页
【目的】确定广东某猪场送检的疑似猪链球菌引起仔猪脑膜炎的病猪组织中的病原,并测定其药物敏感性和致病性,为猪场用药及探索该病原引起脑膜炎的机制奠定基础。【方法】对疑似猪链球菌引起的仔猪脑膜炎送检病料进行细菌分离培养、形态... 【目的】确定广东某猪场送检的疑似猪链球菌引起仔猪脑膜炎的病猪组织中的病原,并测定其药物敏感性和致病性,为猪场用药及探索该病原引起脑膜炎的机制奠定基础。【方法】对疑似猪链球菌引起的仔猪脑膜炎送检病料进行细菌分离培养、形态观察、生化试验及分子学鉴定,并对其开展药物敏感性试验、毒力基因测定、小鼠感染试验及病理组织学诊断。【结果】仔猪脑组织分离株在血平板上出现溶血现象,革兰染色镜检细菌被染成紫色,形态为圆形,部分呈链状排列。生化鉴定结果显示,分离株能发酵棉子糖、乳糖、菊糖、七叶苷,不能发酵山梨醇、甘露醇、阿拉伯糖、松三糖、D-核糖,马尿酸盐还原试验为阴性,与猪链球菌相符。测序分析后确定分离株为猪链球菌。血清型鉴定结果显示,分离株为9型猪链球菌,命名为GDS209。药物敏感性试验结果显示,分离株GDS209对头孢噻吩(先锋Ⅰ)、头孢氨苄(先锋Ⅳ)和氨苄西林/舒巴坦等10种抗菌药耐药,对替卡西林/克拉维酸、氟苯尼考、阿莫西林3种抗菌药敏感。毒力基因检测结果显示,分离株GDS209携带gdh、gapdh、fbps、orf 2、srtA、ccpA毒力基因,不携带mrp、sly、luxS、epf毒力基因。小鼠感染试验结果显示,分离株GDS209对小鼠的半数致死量(LD 50)为1×10^(9)CFU。组织病理学观察显示,分离株GDS209能引起昆明小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏、脑不同程度的淤血和炎症。【结论】本研究分离到1株9型猪链球菌,该分离菌对大部分猪场常用抗菌药耐药,对替卡西林/克拉维酸、氟苯尼考、阿莫西林3种抗菌药敏感,本研究结果可为9型猪链球菌的临床诊断和药物治疗提供一定的参考依据。 展开更多
关键词 仔猪脑膜炎 猪链球菌 分离鉴定 耐药性 致病性
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猪链球菌生物被膜的形成及其耐药机制研究进展
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作者 陈翔宇 黄元 +9 位作者 刘宝玲 罗琴 陆泳锟 何振文 刘丁语 乔常宏 王晓虎 王刚 白挨泉 蔡汝健 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期4002-4013,共12页
猪链球菌(Streptococcus suis)是一种能引起猪和人感染,危害较大的人兽共患病病原体。猪链球菌在自然状态下具有形成生物被膜的能力,是其产生耐药性的重要原因之一。目前已知猪链球菌是在感染的黏附、集结和分散3个阶段形成生物被膜,其... 猪链球菌(Streptococcus suis)是一种能引起猪和人感染,危害较大的人兽共患病病原体。猪链球菌在自然状态下具有形成生物被膜的能力,是其产生耐药性的重要原因之一。目前已知猪链球菌是在感染的黏附、集结和分散3个阶段形成生物被膜,其中毒力因子(荚膜多糖、溶菌酶释放蛋白和溶血素)起到主要作用,整个形成过程由细菌细胞的信号转导系统进行调控。细菌群体感应(quorum-sensing,QS)系统是细菌胞内重要的信号转导系统,它对细菌生物被膜的形成具有显著的调控作用,并通过调控水平基因转移、复制、生物被膜形成等方式增强细菌耐药性,同时在增加细菌密度等方面发挥重要作用。生物被膜的形成能够增强猪链球菌的耐药性,其耐药机制主要涉及QS系统调控、胞外聚合物的形成、细胞外DNA作用、外排泵作用、生物被膜结构和水平基因转移。明确猪链球菌生物被膜的形成与调控及生物被膜引起耐药的机制,对猪链球菌的预防和治疗具有重要意义。化学消毒剂、高温、紫外线和臭氧均能破坏猪链球菌的生物被膜并杀灭细菌;使用抗生素或抗菌剂等化学合成药物能抑制生物被膜的形成或破坏生物被膜,从而达到杀灭细菌的作用,实现治疗猪链球菌感染的目的。此外,部分中药对猪链球菌的生物被膜有抑制和破坏作用,其活性成分具有抗耐药的特性,具有良好的开发前景。笔者对猪链球菌生物被膜的形成和调控机制及其引起的耐药机制的研究进展进行综述,并对目前的防治策略进行归纳总结,以期为猪链球菌的防控提供新的思路。 展开更多
关键词 猪链球菌 生物被膜 调控机制 耐药机制 药物防治
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