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合成8二甲基异戊烯基柚皮素的人工酿酒酵母菌株构建 被引量：5
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作者 李博 梁楠 +5 位作者 刘夺 刘宏 王颖 肖文海 姚明东 元英进 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期71-81,共11页
8二甲基异戊烯基柚皮素(8DN)作为生产黄酮类药物淫羊藿苷的重要前体,在医药合成领域具有重大应用潜力。由于其合成路径及相关基因的复杂性,目前主要通过饲喂8DN的直接前体(柚皮素、异黄腐酚等)的方式合成8DN,而在生物体内全合成8DN的研... 8二甲基异戊烯基柚皮素(8DN)作为生产黄酮类药物淫羊藿苷的重要前体,在医药合成领域具有重大应用潜力。由于其合成路径及相关基因的复杂性,目前主要通过饲喂8DN的直接前体(柚皮素、异黄腐酚等)的方式合成8DN,而在生物体内全合成8DN的研究工作还未见报道。为了实现8DN在酿酒酵母体内的生物全合成,通过组合筛选8DN前体物柚皮素合成所需的多种外源基因(TAL、4CL、CHS、CHI),获得30株柚皮素生产菌,发现不同来源的基因组合使柚皮素产量的具有明显差异(0.37~22.33mg/L)。并且利用Delta位点将较优的基因组合整合至酵母基因组,实现了稳定的柚皮素高产菌株(Sy BE_Sc02050031)构建。在此基础上进一步导入带有苦参来源的异戊烯基转移酶基因(N8DT)多拷贝质粒,实现8DN合成的完整反应过程,8DN的摇瓶发酵产量达到36.7μg/L。另外,通过关键限速酶N8DT的序列优化策略,发现截断定位信号肽序列的N8DT明显提高了从柚皮素到8DN这一关键反应的催化效果,8DN的产量提高到52.6μg/L(144.2%)。首次在酿酒酵母中成功构建高产8DN的生物全合成路径,为在微生物体内合成其他黄酮类天然产物提供了参考,具有重要的指导意义。 展开更多
关键词 8二甲基异戊烯基柚皮素 合成生物学 酿酒酵母 异源表达 蛋白质截断
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精氨酸单糖苷(AF)对免疫抑制小鼠免疫功能的影响 被引量：4
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作者 宋明铭 王佳奇 +6 位作者 黄宝亮 高铭彤 李婧毓 丁传波 郑毅男 刘文丛 徐晓华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期347-351,共5页
目的:研究精氨酸单糖苷(Arginyl-fructose,AF)对环磷酰胺(CTX)诱导的免疫抑制小鼠免疫功能的影响。方法:ICR小鼠100只,随机分成5组,即正常对照组(N),免疫抑制模型组(M),免疫抑制AF低、中、高剂量组(M-L、M-M、MH)。试验组连续给药28 d... 目的:研究精氨酸单糖苷(Arginyl-fructose,AF)对环磷酰胺(CTX)诱导的免疫抑制小鼠免疫功能的影响。方法:ICR小鼠100只,随机分成5组,即正常对照组(N),免疫抑制模型组(M),免疫抑制AF低、中、高剂量组(M-L、M-M、MH)。试验组连续给药28 d。免疫抑制组,每周前3天,腹腔注射80 mg/kg环磷酰胺,形成免疫抑制。末次给药12 h解剖后,测定免疫器官指数,AF对脾淋巴细胞转化及增殖、巨噬细胞吞噬功能、特异性Ig G抗体、血清中TNF-α、IL-2含量的影响。并通过实时荧光定量PCR检测TNF-α、IL-2基因表达的差异。结果:AF能够显著提高小鼠的胸腺指数和脾脏指数,促进脾淋巴细胞的自然转化与增殖,增强巨噬细胞吞噬功能,显著提高小鼠血清中特异性Ig G抗体含量,可显著提高小鼠血清中TNF-α、IL-2含量,实时荧光定量PCR检测结果显示,TNF-α、IL-2 mRNA能够良好表达。结论:AF能拮抗CTX免疫功能低下小鼠的免疫抑制作用。 展开更多
关键词 精氨酸单糖苷 ICR小鼠 免疫 荧光定量PCR
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