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E2F1调节肾小管上皮细胞自噬对小鼠糖尿病肾病肾纤维化的作用研究 被引量：9
1
作者 邹琴 李清璇 +5 位作者 屈玲玲 安小敏 黄靖惠 王金艳 龙天华 石明隽 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期1046-1055,共10页
目的:探讨E2F转录因子1(E2F transcription factor 1,E2F1)是否可以通过调节肾小管上皮细胞(renal tubular epithelial cells,RTECs)自噬而影响糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)小鼠肾纤维化进程,并探讨其可能机制。方法:将12只C57B... 目的:探讨E2F转录因子1(E2F transcription factor 1,E2F1)是否可以通过调节肾小管上皮细胞(renal tubular epithelial cells,RTECs)自噬而影响糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)小鼠肾纤维化进程,并探讨其可能机制。方法:将12只C57BL/6小鼠随机分为正常对照(normal control,NC)组和糖尿病(diabetes mellitus,DM)组,每组各6只,用链脲佐菌素(55 mg/kg,腹腔注射,每天1次,连续5 d)复制小鼠1型DM模型。16周时处死小鼠后检测血糖和24 h尿总蛋白;HE和Masson染色观察肾组织病理形态改变;免疫组织化学染色观察肾组织E2F1表达情况;Western blot和RT-qPCR检测肾组织E2F1、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、自噬及纤维化相关指标表达的变化。高糖培养RTECs并分别转染敲减或过表达E2F1的质粒,Western blot法检测相关指标蛋白的表达情况。结果:与NC组相比,DM组小鼠血糖和24 h尿总蛋白均显著增高(P<0.05)。HE和Masson染色观察到DM组小鼠肾小管管腔塌陷,肾小球基底膜增厚,且肾间质有大量胶原纤维沉积。RT-qPCR结果显示,与NC组相比,DM组小鼠E2F1、III型胶原(collagen type III,Col III)和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的mRNA表达上调(P<0.05),上皮钙黏素(E-cadherin)的mRNA表达下调(P<0.05)。Western blot结果显示,与NC组比较,DM组小鼠肾组织及高糖培养的RTECs中E2F1、mTOR、自噬降解底物蛋白P62、Col III和α-SMA的蛋白表达上调(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平和微管相关蛋白1轻链3-II(microtubule-associated protein 1 light chain 3-II,LC3-II)/LC3-I比值降低(P<0.05)。与空载体组相比,在高糖状态下转染敲减E2F1表达的质粒后,RTECs中mTOR、P62、Col III和α-SMA蛋白表达下调(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平和LC3-II/LC3-I比值升高(P<0.05);而过表达E2F1后,mTOR、P62、Col III和α-SMA的蛋白表达增加(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平和LC3-II/LC3-I比值降低(P<0.05)。结论:E2F1/mTOR� 展开更多
关键词 E2F转录因子1 自噬 肾间质纤维化 糖尿病肾病
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沉默信息调节因子1调控Zeste同源物2增强子对高糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞-间充质转化影响的研究
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作者 李清璇 安小敏 +7 位作者 杨鹏 龙天华 王彤 冉瑶 卢雨微 郭兵 丁菁 石明隽 《中国糖尿病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期433-442,共10页
目的探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)通过调控Zeste同源物2增强子(EZH2)表达影响肾小管上皮细胞-间充质转化(EMT)过程及DKD肾纤维化发病机制。方法12只清洁级雄性SD大鼠,随机分为正常对照(NC)组、DKD组,各6只,检测各组BG、BUN和24 h尿白蛋... 目的探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)通过调控Zeste同源物2增强子(EZH2)表达影响肾小管上皮细胞-间充质转化(EMT)过程及DKD肾纤维化发病机制。方法12只清洁级雄性SD大鼠,随机分为正常对照(NC)组、DKD组,各6只,检测各组BG、BUN和24 h尿白蛋白(24 hUAlb)。培养大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E),分为正常对照组(Con)、高糖组(HG)和高渗组(HM)。在无血清条件下用脂质体2000(Lip2000)转染法,将空载质粒(Vector)、敲低及过表达SIRT1和EZH2质粒分别转染细胞,将细胞分为正常空载组(Con+Vector)、正常敲低EZH2转染组(Con+sh-EZH2)、正常敲低SIRT1转染组(Con+sh-SIRT1)、正常过表达EZH2转染组(Con+oe-EZH2)、正常过表达SIRT1转染组(Con+oe-SIRT1)、高糖空载组(HG+Vector)、高糖敲低EZH2转染组(HG+sh-EZH2)、高糖敲低SIRT1转染组(HG+sh-SIRT1)、高糖过表达EZH2转染组(HG+oe-EZH2)、高糖过表达SIRT1转染组(HG+oe-SIRT1)、高糖双转过表达组(HG+oe-EZH2+oe-SIRT1)。HE、Masson染色观察肾组织病理形态改变,免疫荧光化学染色观察NRK-52E细胞中SIRT1和EZH2表达,Western blot和qRT-PCR检测肾组织和NRK-52E细胞SIRT1、EZH2、E-cadherin、α-SMA和CollegenⅢ蛋白和mRNA表达。结果DKD组BG、BUN、24 h UAlb高于NC组(P<0.05),HE、Masson染色观察到DKD组肾小管管腔扩张,肾小球和肾间质有蓝紫色胶原纤维沉积;DKD组较NC组α-SMA、CollagenⅢ、EZH2蛋白表达升高(P<0.05),E-cadherin、SIRT1蛋白表达降低(P<0.05)。培养的细胞中,HG组较Con组α-SMA、CollagenⅢ、EZH2蛋白表达升高(P<0.05),E-cadherin、SIRT1蛋白表达降低(P<0.05)。与HG+Vector组比较,HG+sh-EZH2组E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05),EZH2、α-SMA、CollagenⅢ蛋白表达降低(P<0.05),HG+oe-EZH2组EZH2、α-SMA、CollagenⅢ蛋白表达升高(P<0.05),E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05);HG+sh-SIRT1组较HG+Vector组EZH2、α-SMA、CollagenⅢ蛋白表达升高(P<0.05),SIRT1、E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05),HG+oe-SIRT1组SIRT1、 展开更多
关键词 大鼠 糖尿病肾脏疾病 上皮细胞-间充质转化 沉默信息调节因子1 Zeste同源物2增强子
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饲料中维生素C水平对稚鳖生长的影响 被引量：1
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作者 高晓莉 龙天华 +1 位作者 齐风生 胡罗英 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2002年第3期26-27,共2页
在配合饲料中添加不同水平的Vc多聚磷酸酯 ,对稚鳖进行饲养试验。试验结果 ,饲料中添加80 0～ 12 0
关键词 维生素C 稚鳖 增长率 饲料系数 饲料添加剂
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三十年离悲重演，谁之罪？——《雷雨》课堂教学实录
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作者 龙天华 《语文教学研究》 2012年第9期32-35,共4页
师：《雷雨》这部话剧是曹禺先生的成名作。一鸣惊人，震动文坛，成为现代文学史上的经典作品，被认为是“中国话剧现实主义的基石”。人们多喜欢其中的人物形象，或是津津乐道其中的台词。今天我们则用一种全新的方式——叙事性联系来... 师：《雷雨》这部话剧是曹禺先生的成名作。一鸣惊人，震动文坛，成为现代文学史上的经典作品，被认为是“中国话剧现实主义的基石”。人们多喜欢其中的人物形象，或是津津乐道其中的台词。今天我们则用一种全新的方式——叙事性联系来解读它，看看它能带给我们什么启示。 展开更多
关键词 《雷雨》 教学实录 三十年 重演 课堂 中国话剧 现代文学史 经典作品
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教“能做”:做人、做事、做文章——以2011年高考语文全国卷作文题“彩票”教学为例
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作者 龙天华 《天津教育》 2011年第11期42-43,共2页
目前的作文教学更偏向于技法的讲解,如在审题、立意、选材、组材、构思、谋篇、修改等方面进行教学活动。值得我们思考的是,在要求学生掌握这些写作基础知识的同时,作文教学是否有更高的教学目标？作文教学绝不仅仅是教如何写文章,教师... 目前的作文教学更偏向于技法的讲解,如在审题、立意、选材、组材、构思、谋篇、修改等方面进行教学活动。值得我们思考的是,在要求学生掌握这些写作基础知识的同时,作文教学是否有更高的教学目标？作文教学绝不仅仅是教如何写文章,教师应珍惜每一次讲作文的机会,站在更高的层面上引领学生思考并获得在这个社会上处理实际问题的能力——做的能力， 展开更多
关键词 作文教学 作文题 高考语文 文章 全国卷 做人 做事 彩票
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自噬对锌指转录因子1及高糖诱导的肾小管EMT的影响
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作者 安小敏 李清璇 +6 位作者 王彤 龙天华 杨鹏 卢雨微 张小龙 郭兵 石明隽 《贵州医科大学学报》 CAS 2024年第1期14-24,共11页
目的探讨自噬是否可以通过调控锌指转录因子1(Snail1)的降解而影响肾小管上皮细胞-间充质转化(EMT)过程。方法12只清洁级雄性SD大鼠,随机分为正常(NC)组、糖尿病(DM)组,予链脲佐菌素(STZ)53 mg/kg尾静脉注射复制大鼠Ⅰ型糖尿病模型;造... 目的探讨自噬是否可以通过调控锌指转录因子1(Snail1)的降解而影响肾小管上皮细胞-间充质转化(EMT)过程。方法12只清洁级雄性SD大鼠,随机分为正常(NC)组、糖尿病(DM)组,予链脲佐菌素(STZ)53 mg/kg尾静脉注射复制大鼠Ⅰ型糖尿病模型;造模成功后第24周末处死NC和DM组大鼠,检测大鼠血糖、血尿素氮(BUN)和24 h尿白蛋白(24 hUAlb),Western blot检测肾组织自噬相关分子[自噬基因BECN 1(Beclin1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3-Ⅱ/Ⅰ)、自噬降解底物蛋白1(p62)]、Snail1蛋白的表达水平;将大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)分为正常糖组(NG组)、高糖组(HG组)及高渗组(HM组),HG组培养的NRK-52E细胞在分为全蛋白组(Input组)和IP组[IP组又为阴性对照(IgG组)和实验组(Snail1/P62)];在高糖培养的NRK-52E细胞中分别使用自噬激动剂[雷帕霉素(RAP)和自噬抑制剂氯喹(CQ)]处理48 h,分为NG组、HG组、HG+RAP组及HG+CQ组,采用双标荧光腺病毒观察各组细胞的自噬流的情况,免疫荧光化学染色和免疫共沉淀观察Snail1与p62的蛋白相互作用,Western blot检测各组NRK-52E细胞中自噬相关分子、EMT、细胞外基质(ECM)指标表达变化;用二甲基亚砜(DMSO)、RAP、CQ处理NRK-52E细胞48 h,再联合放线菌酮(CHX)和蛋白酶抑制剂(MG-132)处理0、6及10 h,分为HG+DMSO/RAP组、HG+DMSO/CQ组,采用Western blot检测自噬对Snail1蛋白衰减的调控作用。结果与NC组相比,DM组大鼠血糖、BUN及24 hUAlb均增高(P<0.05);Western blot结果显示,与NC组比较,DM组大鼠肾组织及高糖培养的NRK-52E细胞中Beclin1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达下调(P<0.05),p62、Snail1蛋白表达上调(P<0.05);双标腺病毒实验显示,在高糖刺激的NRK-52E中自噬流受阻,与HG组相比,HG+RAP组NRK-52E细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)的蛋白表达增多,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原蛋白Ⅲ(Col-Ⅲ)的蛋白表达减少(P<0.05),而HG+CQ组结果相反;免疫共沉淀实验发现Snail1与p62存� 展开更多
关键词 糖尿病肾脏疾病 上皮细胞-间充质转化 自噬 锌指转录因子1 大鼠
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