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转基因技术提高大豆对非生物胁迫耐受性的研究进展 被引量：3
1
作者 轩慧冬 黄颜众 +1 位作者 郭娜 邢邯 《大豆科技》 2020年第4期13-19,共7页
大豆(Glycine max(L.)Merr.)起源于中国,可以为人类提供主要的植物蛋白和油脂。随着环境条件的日渐恶劣,中国干旱与半干旱的地区发生干旱、高温、盐渍等非生物胁迫的频率日渐增高,严重影响了中国大豆的生产。转基因技术的出现使培育植... 大豆(Glycine max(L.)Merr.)起源于中国,可以为人类提供主要的植物蛋白和油脂。随着环境条件的日渐恶劣,中国干旱与半干旱的地区发生干旱、高温、盐渍等非生物胁迫的频率日渐增高,严重影响了中国大豆的生产。转基因技术的出现使培育植物新品种的效率大大提高。利用转基因技术提高大豆对非生物胁迫耐受性的报道已经日渐增多。因此,对利用转基因技术来提高大豆对非生物胁迫耐受性的研究进行综述对于大豆生物工程育种具有十分重要的意义。 展开更多
关键词 大豆(Glycine max(L.)Merr.) 转基因技术 非生物胁迫 耐受性
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大豆GmWRKY148的克隆与功能分析 被引量：3
2
作者 王莎莎 崔晓霞 +3 位作者 黄颜众 轩慧冬 郭娜 邢邯 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第18期3445-3454,共10页
【目的】WRKY转录因子与植物的生物和非生物胁迫应答密切相关。通过对大豆WRKY转录因子基因GmWRKY148的克隆及在大豆发状根中过表达后对疫霉根腐病抗性的分析,探究大豆与大豆疫霉菌互作的作用机理。【方法】以拟南芥的AtWRKY44序列为探... 【目的】WRKY转录因子与植物的生物和非生物胁迫应答密切相关。通过对大豆WRKY转录因子基因GmWRKY148的克隆及在大豆发状根中过表达后对疫霉根腐病抗性的分析,探究大豆与大豆疫霉菌互作的作用机理。【方法】以拟南芥的AtWRKY44序列为探针,利用同源克隆的方法在大豆Williams 82的根部组织中得到其同源基因Glyma.14G199800,命名为GmWRKY148。对GmWRKY148蛋白进行系统进化树分析;利用qRT-PCR方法分析该基因在大豆的根、茎、叶、子叶和接种大豆疫霉菌不同时间点的转录水平;利用双酶切的方法将GmWRKY148完整的CDS序列连接到植物过表达载体p Bin GFP2中,利用基因枪法将重组质粒转化到洋葱表皮细胞中,进行亚细胞定位分析。利用发根农杆菌K599介导的遗传转化体系,经过GFP荧光筛选和qRT-PCR检测,获得大豆过表达GmWRKY148的阳性发状根(OE-GmWRKY148)和转入p Bin GFP2空载体(EV)的阴性对照发状根。对过表达GmWRKY148发状根和阴性对照发状根接种大豆疫霉菌,统计病斑长度、疫霉积累量和卵孢子萌发情况。【结果】GmWRKY148的CDS序列全长为999 bp,编码332个氨基酸,等电点为7.61。系统进化分析发现,GmWRKY148与菜豆(Phaseolus vulgaris)、蒺藜苜蓿(Medicago truncatula)的WRKY转录因子亲缘关系十分相近,且与菜豆的亲缘关系最近。亚细胞定位结果显示,GmWRKY148定位在细胞核中。组织表达分析显示,GmWRKY148在根中的表达量最高,在茎和叶中次之,在子叶中最低。荧光定量PCR结果表明,接种大豆疫霉菌P6497后,在感病品种Williams和抗病品种Williams 82(含有Rps1k)中,GmWRKY148受诱导逐渐上调表达,在侵染24 h后表达水平均达到最高,但在Williams 82中的上调倍数更高。对过表达GmWRKY148和转空载体的大豆阳性发状根分别接种大豆疫霉菌P6497的菌丝块,比较接种24 h后的病斑长度和疫霉积累量,结果显示,与对照EV相比,过表达GmWRKY148大� 展开更多
关键词 大豆 GmWRKY148 大豆疫霉根腐病 抗性
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农杆菌介导的基因转化及在生产中的作用 被引量：3
3
作者 黄颜众 郭娜 +1 位作者 轩慧冬 邢邯 《大豆科技》 2019年第5期62-64,共3页
转基因技术的突破打开了分子生物学的大门,为人类破译生物界遗传信息和定向改造生物提供了可能。转基因技术是利用自然界中现实存在的农杆菌侵染植物的现象,加以改造从而演化出来可以被科研实际应用的技术。自转基因技术可以在植物中实... 转基因技术的突破打开了分子生物学的大门,为人类破译生物界遗传信息和定向改造生物提供了可能。转基因技术是利用自然界中现实存在的农杆菌侵染植物的现象,加以改造从而演化出来可以被科研实际应用的技术。自转基因技术可以在植物中实际应用以来,转基因植物在农业生产中产生了巨大的效益,降低了农药的施用量,降低了人力成本,改善了作物本身营养物质不均衡的缺点,为人类带来了巨大的效益。其实转基因技术并不可怕,可怕的是人们不能用理性的视角来看待转基因问题。 展开更多
关键词 转基因技术 农杆菌转化法 转基因优点 理性视角
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大豆GmTIP1-1基因克隆及功能研究 被引量：2
4
作者 李双飞 黄颜众 +5 位作者 轩慧冬 黄鹭 赵晋铭 王海棠 郭娜 邢邯 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期793-801,共9页
[目的]本研究通过对大豆水通道蛋白基因GmTIP1-1的克隆及其在不同胁迫处理下的差异表达分析,探究水通道蛋白在大豆耐受非生物胁迫中的作用机制。[方法]从大豆品种‘天隆1号’中克隆出GmTIP1-1的CDS序列,采用生物信息学方法对该基因及其... [目的]本研究通过对大豆水通道蛋白基因GmTIP1-1的克隆及其在不同胁迫处理下的差异表达分析,探究水通道蛋白在大豆耐受非生物胁迫中的作用机制。[方法]从大豆品种‘天隆1号’中克隆出GmTIP1-1的CDS序列,采用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白进行分析。采用实时荧光定量PCR检测在不同逆境处理下GmTIP1-1在大豆根、茎、叶等组织的表达情况。利用基因枪轰击法对GmTIP1-1蛋白全长及不同跨膜结构域进行亚细胞定位分析。通过酵母双杂试验确定GmTIP1-1蛋白的互作蛋白,并利用实时荧光定量PCR检测在干旱处理下与GmTIP1-1互作蛋白基因的表达情况。[结果]GmTIP1-1的CDS序列全长为753bp,编码250个氨基酸,等电点为6.51。系统进化分析发现,GmTIP1-1与苜蓿(Medicago truncatula)和黄瓜(Cucumis sativus)的亲缘关系十分相近。亚细胞定位结果显示,GmTIP1-1定位在细胞膜上。实时荧光定量PCR结果显示:GmTIP1-1在根中的表达量最高,在茎中次之,叶中最低;在干旱、ABA处理下均能诱导GmTIP1-1基因在大豆根、茎、叶中的表达;在干旱和ABA处理下,GmTIP1-1基因在根中的表达水平均高于在茎和叶中的表达水平。酵母双杂试验表明,GmTIP1-1与参与非生物胁迫调节的GmSNARE蛋白以及响应逆境胁迫相关蛋白GmF-box均存在互作。在干旱处理下,大豆根和茎中GmSNARE和GmF-box基因都会受到干旱诱导表达。[结论]GmTIP1-1蛋白定位于细胞膜,通过与参与非生物胁迫调节的GmSNARE蛋白以及响应逆境胁迫相关蛋白GmF-box互作来增强大豆对非生物胁迫的抗性。 展开更多
关键词 大豆 水通道蛋白 干旱 互作蛋白
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话说大豆转基因 被引量：2
5
作者 郭娜 黄颜众 +1 位作者 轩慧冬 邢邯 《大豆科技》 2019年第5期56-58,共3页
转基因大豆油是否可以安全食用,目前仍困扰着大部分中国消费者。鉴于此,文中从大豆的重要性、什么是转基因大豆、抗草甘膦大豆品种的创制及对根际微生物群落的影响、中美两国对转基因大豆的标识问题等方面进行了科普。目前中国已经建立... 转基因大豆油是否可以安全食用,目前仍困扰着大部分中国消费者。鉴于此,文中从大豆的重要性、什么是转基因大豆、抗草甘膦大豆品种的创制及对根际微生物群落的影响、中美两国对转基因大豆的标识问题等方面进行了科普。目前中国已经建立一套适合中国国情的转基因生物安全法律法规和管理条例,为转基因大豆的研究和应用保驾护航。 展开更多
关键词 大豆 转基因 转基因食品标识
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大豆GmMYB46基因的克隆、定位及表达分析 被引量：1
6
作者 黄鹭 黄颜众 +4 位作者 轩慧冬 马玲 郭娜 赵晋铭 邢邯 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期209-219,共11页
[目的]本文旨在研究MYB类转录因子基因GmMYB46的结构特征和定位,并阐述其对不同胁迫的响应,为明确其在逆境胁迫下的作用奠定基础。[方法]从大豆品种‘晋豆21’中克隆出GmMYB46的CDS序列,采用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白进行分析... [目的]本文旨在研究MYB类转录因子基因GmMYB46的结构特征和定位,并阐述其对不同胁迫的响应,为明确其在逆境胁迫下的作用奠定基础。[方法]从大豆品种‘晋豆21’中克隆出GmMYB46的CDS序列,采用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白进行分析,并利用PlantCARE软件分析GmMYB46基因启动子元件。通过洋葱表皮细胞瞬时表达系统对GmMYB46蛋白质全长及不同结构域M1(aa1～123)和M2(aa124～334)进行亚细胞定位分析。采用实时荧光定量PCR检测GmMYB46在不同逆境处理下的表达情况。[结果]GmMYB46 CDS序列全长为1 005 bp,编码334个氨基酸,蛋白质相对分子质量为82.53×10~3,氨基酸序列中含有2个高度保守的SANT结构域。进化树分析表明该基因编码的蛋白与野生大豆Gs MYB46亲缘关系最近。GmMYB46包含MBS、ABRE、GARE、TCA、LTR等逆境胁迫应答元件。亚细胞定位结果显示,p BIN-GmMYB46-GFP及p BIN-GmMYB46M1-GFP融合蛋白在细胞核中表达,p BIN-GmMYB46M2-GFP绿色荧光遍布整个细胞。实时荧光定量PCR分析表明,在干旱、盐(200 mmol·L^(-1)NaCl)、低温(4℃)、ABA(200μmol·L^(-1))、SA(500μmol·L^(-1))、GA(100μmol·L^(-1))处理下均能诱导GmMYB46基因在大豆根、茎、叶中的上调表达。[结论]GmMYB46基因的保守结构域对亚细胞定位起决定性作用,该基因可能参与大豆对非生物胁迫的响应。 展开更多
关键词 大豆 GmMYB46 保守结构域 亚细胞定位 逆境胁迫
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gma-miR1507a生物信息学分析、植物表达载体的构建及遗传转化 被引量：1
7
作者 马玲 崔晓霞 +4 位作者 黄颜众 赵晋铭 王海棠 郭娜 邢邯 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2017年第7期906-915,共10页
miRNA(microRNA)是一类长度为18~25nt的内源性非编码小分子RNA,通过对其靶基因mRNA的降解或抑制翻译来调控基因表达,进而参与调控植物相关的生理活动。该研究分析gma-miR1507a的成熟体序列、茎环结构和前体启动子区域的顺式作用元件并... miRNA(microRNA)是一类长度为18~25nt的内源性非编码小分子RNA,通过对其靶基因mRNA的降解或抑制翻译来调控基因表达,进而参与调控植物相关的生理活动。该研究分析gma-miR1507a的成熟体序列、茎环结构和前体启动子区域的顺式作用元件并检测了逆境处理下大豆组织中gma-miR1507a的水平;使用psRNATarget在线软件预测了gma-miR1507a的靶基因;构建植物表达载体amiRNA1507a-pCAMBIA2301并转化大豆子叶,获得了发状根。结果发现,gma-miR1507a前体的启动子区域存在与干旱胁迫和病菌侵染相关的顺式作用元件;在线软件psRNATarget预测到9个gma-miR1507a的靶基因;该研究利用发状根介导的遗传转化结合GFP染色,确定阳性发状根;在转基因根毛中,gma-miR1507a水平与空载相比显著提高,预测的部分靶基因表达量显著下调。以上结果显示,过表达amiRNA1507a能够提高大豆发状根中gma-miR1507a水平,为研究gma-miR1507a的功能奠定基础。同时,gma-miR1507a可能参与调控大豆的逆境胁迫。 展开更多
关键词 gma-miR1507a 顺式作用元件 靶基因预测 amiRNA1507a表达载体构建 发根农杆菌转化
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