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山羊β防御素124定位及过表达附睾头上皮细胞系的建立 被引量:2
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作者 张俊梅 +3 位作者 邰苗苗 孟繁荣 任有蛇 张春香 《山西农业科学》 2022年第10期1476-1481,共6页
为研究山羊β防御素124(BD124)的生物学功能,进行附睾头上皮细胞BD124的定位研究,并建立BD124过表达附睾头上皮细胞系,应用细胞免疫荧光法对山羊附睾头上皮细胞BD124进行定位;将山羊BD124基因编码区序列连接到LV5穿梭质粒后,测序验证LV5... 为研究山羊β防御素124(BD124)的生物学功能,进行附睾头上皮细胞BD124的定位研究,并建立BD124过表达附睾头上皮细胞系,应用细胞免疫荧光法对山羊附睾头上皮细胞BD124进行定位;将山羊BD124基因编码区序列连接到LV5穿梭质粒后,测序验证LV5-BD124质粒构建情况,然后将其与包装质粒共转染293T细胞进行包装生产并重组LV5-BD124慢病毒,并采用有限稀释法测定病毒滴度;之后采用实时荧光定量PCR和Western blot检测确认LV5-BD124慢病毒侵染96、120 h后山羊附睾头上皮细胞中BD124 mRNA和蛋白的过表达情况;最后用嘌呤霉素进行2次筛选后获得BD124过表达稳转附睾头上皮细胞系。定位结果显示,BD124阳性绿色荧光信号在细胞核周围高度聚集,且在细胞质和细胞核内也有分布。测序结果显示,BD124序列插入LV5慢病毒载体后,表达的LV5-BD124慢病毒载体滴度为3.0×108 TU/mL。荧光定量PCR和Western blot结果显示,LV5-BD124附睾头上皮BD124 mRNA和蛋白表达量显著高于对照组;LV5-BD124侵染后的附睾头上皮细胞经2次嘌呤霉素筛选后,阳性细胞比例增加,传2代后细胞内荧光信号保持稳定。 展开更多
关键词 山羊 附睾头上皮细胞 β防御素124 稳转系
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幼龄和成年太行山羊附睾头差异竞争性内源RNAs机制分析
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作者 郭相前 董复成 +4 位作者 刘文忠 乔利英 张春香 任有蛇 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期1293-1306,共14页
旨在筛选出幼龄和成年太行山羊附睾头中差异表达的长链非编码RNAs(lncRNAs)、微小RNAs(miRNAs)和mRNAs,构建太行山羊附睾头中免疫相关基因调控的竞争性内源RNAs(ceRNAs)网络。本研究选取健康状况良好、体重相近的幼龄(2月龄)和成年太行... 旨在筛选出幼龄和成年太行山羊附睾头中差异表达的长链非编码RNAs(lncRNAs)、微小RNAs(miRNAs)和mRNAs,构建太行山羊附睾头中免疫相关基因调控的竞争性内源RNAs(ceRNAs)网络。本研究选取健康状况良好、体重相近的幼龄(2月龄)和成年太行山羊(2周岁)公羊各3只,去势采集其附睾头组织进行全转录组测序,用DESeq2软件筛选出幼龄和成年太行山羊附睾头差异mRNAs、lncRNAs和miRNAs。利用miRanda软件和R-package(reshape2、dplyr、tidyr),基于ceRNA-score原理分析得到差异ceRNAs表达谱,对预测所得具有ceRNAs关系的mRNAs进行GO和KEGG富集分析,并绘制得到太行山羊附睾头免疫相关ceRNAs网络。最后,各随机挑选8个mRNAs、miRNAs和lncRNAs,并通过qRT-PCR验证全转录组测序结果的准确性。根据分析结果,以幼龄太行山羊附睾头为对照,成年山羊附睾头差异表达mRNAs有6461个,其中上调2997个、下调3464个;差异表达lncRNAs共有1147个,其中703个上调、444个下调;差异表达miRNAs共有182个,其中81个上调、101个下调。共得到具有ceRNAs调控关系的lncRNAs 366个,其中上调213个,下调153个;mRNAs有3131个,其中1253个上调,1878个下调;miRNAs有140个,其中48个上调,92个下调。分析具有ceRNAs机制的基因发现,表达量显著上调的与免疫相关的mRNAs:淋巴细胞抗原6复合位点蛋白G5B(LY6 G5B)、脂质运载蛋白9(LCN9)、解整合素金属蛋白酶28(ADAM28)和粘蛋白15(MUC15)基因在成年太行山羊附睾头表达量高,且极显著高于幼龄太行山羊(P<0.01)。GO和KEGG富集分析表明,具有ceRNAs机制的差异表达基因富集在内质网蛋白加工通路、蛋白质输出通路、粘蛋白型O-聚糖生物合成通路、细胞外基质受体相互作用通路等。qRT-PCR验证结果表明,除chi-miR-320-3p外,其余差异表达的mRNAs、lncRNAs和miRNAs表达趋势与全转录组测序结果一致。附睾头免疫相关ceRNAs网络分析表明,lncRNA-MSTRG.22929.11、lncRN 展开更多
关键词 ceRNA 太行山羊 附睾头 免疫
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