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低氧微环境中过表达AQP9可抑制人肝癌SMMC-7721和Huh-7细胞的增殖 被引量：3
1
作者 钱妍至 黄天洪 +1 位作者 陈虹宇 梅浙川 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期204-214,共11页
目的:探讨水通道蛋白9(aquaporin 9,AQP9)参与低氧微环境中肝癌细胞的低氧应答及其可能的作用机制。方法:采用低氧培养箱建立肝癌SMMC-7721和Huh-7细胞的低氧模型。应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测低氧培养后SMMC-7721和Huh-7细... 目的:探讨水通道蛋白9(aquaporin 9,AQP9)参与低氧微环境中肝癌细胞的低氧应答及其可能的作用机制。方法:采用低氧培养箱建立肝癌SMMC-7721和Huh-7细胞的低氧模型。应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测低氧培养后SMMC-7721和Huh-7细胞中AQP9 mRNA以及Huh-7细胞中AQP9蛋白的表达。将AQP9过表达的重组慢病毒LV-AQP9或空载体慢病毒LV-PWPI感染SMMC-7721和Huh-7细胞后,获得AQP9稳定过表达的SMMC-7721-AQP9和Huh-7-AQP9细胞及其阴性对照SMMC-7721-PWPI和Huh-7-PWPI细胞。CCK-8法和蛋白质印迹法分别检测低氧培养后,SMMC-7721-AQP9、Huh-7-AQP9、SMMC-7721-PWPI和Huh-7-PWPI细胞的增殖及细胞中缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)和磷酸化mTOR(phosphorylated-mTOR,p-mTOR)的表达。结果:低氧环境下,Huh-7细胞中AQP9 mRNA和蛋白的表达水平明显下调(P值均<0.05),SMMC-7721细胞中AQP9 mRNA的表达水平明显下调(P<0.05)。低氧环境下,过表达AQP9对SMMC-7721和Huh-7细胞增殖的抑制作用强于常氧状态(P值均<0.05);SMMC-7721-AQP9和Huh-7-AQP9细胞中HIF-1α和p-mTOR蛋白的表达水平均明显低于SMMC-7721-PWPI和Huh-7-PWPI细胞(P值均<0.05)。结论:低氧微环境中过表达AQP9可能通过下调HIF-1α的表达,抑制人肝癌SMMC-7721和Huh-7细胞的增殖,其增殖抑制作用强于常氧环境。 展开更多
关键词 肝肿瘤 低氧 肿瘤微环境 细胞增殖 缺氧诱导因子1 Α亚基 水通道蛋白质9
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脂肪细胞共培养对HepG2细胞表达水通道蛋白9的影响及其机制
2
作者 黄天洪 李传飞 +2 位作者 邱烈旺 廖盛涛 梅浙川 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期450-456,共7页
目的观察促分化成熟脂肪细胞对肝细胞脂肪变及水通道蛋白9(AQP9)表达的影响,并探讨其可能的作用机制。方法培养人前体脂肪细胞并促分化至完全成熟,将HepG2细胞分别与未促分化脂肪细胞及促分化成熟脂肪细胞共培养48 h,分别标记为对照组... 目的观察促分化成熟脂肪细胞对肝细胞脂肪变及水通道蛋白9(AQP9)表达的影响,并探讨其可能的作用机制。方法培养人前体脂肪细胞并促分化至完全成熟,将HepG2细胞分别与未促分化脂肪细胞及促分化成熟脂肪细胞共培养48 h,分别标记为对照组及实验组。对共培养的HepG2细胞进行油红O染色及细胞内甘油三酯含量检测,同时检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-丝苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路变化及AQP9 mRNA和蛋白水平变化情况。实验组在共培养的同时加入100 ng/ml PI3K-Akt通路激动剂重组人胰岛素样生长因子-1(IGF-1),标记为实验组+IGF-1组,蛋白质印迹法(WB)验证PI3K-Akt通路的激活,同时RT-qPCR和WB检测AQP9的表达变化。通过重组慢病毒转染技术将HepG2细胞进行重组慢病毒LV-AQP9或空载体LV-PWPI转染,分别标记为HepG2-AQP9组和HepG2-PWPI组,激光共聚焦检测转染效率,RT-qPCR和WB检测病毒转染后AQP9表达水平的变化,随后将稳定过表达的HepG2-AQP9细胞和空载HepG2-PWPI细胞分别与促分化成熟脂肪细胞共培养48 h,分别标记为HepG2-AQP9共培养组和HepG2-PWPI共培养组,再进行油红O染色及细胞内甘油三酯含量的检测。最后,向HepG2-AQP9共培养组中加入IGF-1,记为HepG2-AQP9共培养+IGF-1组,进行油红O染色及细胞内甘油三酯含量的检测,同时验证PI3K-Akt信号通路激活及AQP9 mRNA和蛋白水平变化。两独立样本间的比较用t检验。结果与对照组相比,实验组中胞内脂滴明显增多,且胞内甘油三酯含量(0.052±0.005)显著高于对照组(0.033±0.003)(t=5.225,P=0.006),提示脂肪细胞共培养能够诱导HepG2细胞发生脂肪变性。RT-qPCR和WB结果分别提示实验组中AQP9 mRNA(3.615±0.330)和蛋白(0.072±0.005)的表达水平均显著高于对照组(t值分别为13.708、11.225,P值分别为0.005、<0.001),而WB结果显示实验组中磷酸化Akt(p-Akt)蛋白的表达水平(0.116±0.003)明显低于对照组(0.202±0.003 展开更多
关键词 脂肪细胞 HepG2细胞 共培养 水通道蛋白9 胰岛素样生长因子-1
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多媒体在少数民族地区数学教学中的运用 被引量：1
3
作者 黄天洪 《新课程（教研版）》 2013年第4期179-179,共1页
少数民族地区学生因见识面不广,接触的事物少,导致他们的抽象能力较差,根据教材内容,适当地应用多媒体进行教学,展现生动、直观的画面,可以变抽象为具体,调动学生各种感官协同作用,解决教师难以讲清、学生难以听懂的内容,从而有效地实... 少数民族地区学生因见识面不广,接触的事物少,导致他们的抽象能力较差,根据教材内容,适当地应用多媒体进行教学,展现生动、直观的画面,可以变抽象为具体,调动学生各种感官协同作用,解决教师难以讲清、学生难以听懂的内容,从而有效地实现精讲,突出重点,突破难点。 展开更多
关键词 多媒体 少数民族 数学
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