目的了解基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)检测菌膜孔蛋白的能力及膜孔蛋白在肺炎克雷伯菌耐碳青霉烯类药物中的作用。方法选取2015-201...目的了解基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)检测菌膜孔蛋白的能力及膜孔蛋白在肺炎克雷伯菌耐碳青霉烯类药物中的作用。方法选取2015-2017年莆田学院附属医院临床分离的耐碳青酶烯类药的肺炎克雷伯菌7株,进行改良Hodge、EDTA试验和多位点序列(multilocus sequence typing,MLST)分型;采用PCR技术检测相关的耐药基因和膜孔蛋白OmpK35、OmpK36基因,并对膜孔蛋白基因进行序列分析;采用超速离心提取膜孔蛋白,分别进行SDS-PAGE和MALDI-TOF MS检测分析。结果7株耐碳青酶烯类药肺炎克雷伯菌MLST分型结果2株ST15型,其他为ST11型,改良Hodge试验阳性菌株6株,EDTA试验阳性菌株1株;PCR技术检测出耐药基因KPC-2、SHV、TEM、NDM-1和膜孔蛋白OmpK35、OmpK36基因,膜孔蛋白基因进行序列分析发现存在突变和缺失。SDS-PAGE检测出OmpK36及OmpA;MALDI-TOF MS可检测出OmpA(m/z 36.0×103),OmpK35(m/z 37.2×103)和OmpK36(m/z 38.7×103)三种膜孔蛋白。结论MALDI-TOF MS在膜孔蛋白缺失的检测方面比通用技术SDS-PAGE更有优势,膜孔蛋白结构改变或缺失,合并产超β-内酰胺酶,可导致对碳青霉烯类药耐药。展开更多
为了寻找耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药相关蛋白,本研究通过提取2017年莆田学院附属医院分离的3株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药株和2株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌敏感株的总蛋白,采用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relati...为了寻找耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药相关蛋白,本研究通过提取2017年莆田学院附属医院分离的3株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药株和2株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌敏感株的总蛋白,采用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantification,iTRAQ)技术合并液相色谱-质谱联用技术(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS/MS)分析和鉴定蛋白表达图谱,筛选差异表达蛋白,并对显著性差异蛋白进行GO功能及KEGG通路富集分析。我们共鉴定出3117个蛋白,定量检测到的蛋白有2920个,其中538个蛋白有显著性差异。GO功能富集分析发现,与肺炎克雷伯菌耐药相关的蛋白有β-内酰胺酶、青霉素结合蛋白、修饰氨基糖苷类的钝化酶、金属肽酶及其它相关蛋白。对β-内酰胺相关蛋白KEGG通路富集分析,涉及β-内酰胺酶活性的KPC型和SHV型基因得到验证。本研究为耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药机制提供了理论依据。展开更多
文摘为了寻找耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药相关蛋白,本研究通过提取2017年莆田学院附属医院分离的3株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药株和2株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌敏感株的总蛋白,采用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantification,iTRAQ)技术合并液相色谱-质谱联用技术(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS/MS)分析和鉴定蛋白表达图谱,筛选差异表达蛋白,并对显著性差异蛋白进行GO功能及KEGG通路富集分析。我们共鉴定出3117个蛋白,定量检测到的蛋白有2920个,其中538个蛋白有显著性差异。GO功能富集分析发现,与肺炎克雷伯菌耐药相关的蛋白有β-内酰胺酶、青霉素结合蛋白、修饰氨基糖苷类的钝化酶、金属肽酶及其它相关蛋白。对β-内酰胺相关蛋白KEGG通路富集分析,涉及β-内酰胺酶活性的KPC型和SHV型基因得到验证。本研究为耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药机制提供了理论依据。
