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钙卫蛋白对口腔鳞状细胞癌细胞侵袭迁移的影响及机制 被引量：2
1
作者 孙俊泽 马洪 +4 位作者 胡赟 鲍玲娜 刘睿 康剑勇 孙昆俊 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2020年第1期56-62,共7页
目的观察钙卫蛋白(S100A8/A9蛋白)对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞迁移能力和侵袭能力的影响,并探求其潜在的相关机制。方法CCK8法检测浓度不同的S100A8/A9蛋白处理细胞24 h后的增殖活性,确定合适浓度后,进行... 目的观察钙卫蛋白(S100A8/A9蛋白)对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞迁移能力和侵袭能力的影响,并探求其潜在的相关机制。方法CCK8法检测浓度不同的S100A8/A9蛋白处理细胞24 h后的增殖活性,确定合适浓度后,进行划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭情况。蛋白质印迹法检测细胞内PI3K/AKT信号通路表达情况,并用免疫荧光染色检测p-akt在OSCC细胞中的表达分布情况。RT-qPCR检测各组细胞中与侵袭迁移相关的MMP-2 mRNA和MMP-9 mRNA的表达情况。结果在不同浓度的S100A8/A9蛋白作用下,OSCC细胞增殖活性呈浓度依赖性(P<0.05)。划痕实验、Transwell实验显示S100A8/A9组细胞迁移和侵袭数多于空白组(P<0.001)。抑制剂组细胞迁移和侵袭数明显少于S100A8/A9组和空白组(P<0.001)。蛋白质印迹实验和免疫荧光染色结果显示,p-akt蛋白水平在0.5~1 h内表达上调,3 h后下调(P<0.05)。RT-qPCR结果显示,抑制剂组与S100A8/A9组和空白组对比,抑制剂降低了MMP-2 mRNA和MMP-9 mRNA表达情况(P<0.001)。结论低浓度S100A8/A9蛋白通过活化P13K/AKT信号通路,促进OSCC细胞的迁移和侵袭。 展开更多
关键词 钙卫蛋白 迁移 基质金属蛋白酶 磷酸肌醇3-激酶/蛋白激酶 侵袭
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酿脓链球菌Cas9核酸酶的重组表达、分离纯化及酶学特性 被引量：2
2
作者 鲍玲娜 吴勇 +2 位作者 林军 东圆珍 黄宗庆 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期2003-2011,共9页
【背景】Cas9核酸酶是一种RNA引导的核酸内切酶,可与单链向导RNA(single-guide RNA,sgRNA)形成稳定的核糖核蛋白复合物,识别和切割特定的核苷酸片段。由于其具备高灵活性和高效率的特点,目前已经成为基础科学研究领域和临床治疗方法中... 【背景】Cas9核酸酶是一种RNA引导的核酸内切酶,可与单链向导RNA(single-guide RNA,sgRNA)形成稳定的核糖核蛋白复合物,识别和切割特定的核苷酸片段。由于其具备高灵活性和高效率的特点,目前已经成为基础科学研究领域和临床治疗方法中使用最广泛的基因编辑工具。【目的】为Cas9核酸酶的合理开发和利用提供理论依据。【方法】利用大肠杆菌表达系统表达野生型酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)Cas9核酸酶,经硫酸铵沉淀和镍柱亲和层析两步纯化获得较高纯度表达产物,并对其热稳定性、pH稳定性、金属离子的影响等酶学特性进行研究。【结果】经高密度发酵后,大肠杆菌湿菌重达191.0 g/L。纯化后酿脓链球菌Cas9核酸酶的比酶活达641.29 U/mg,纯化倍数为16.02,收率为46.40%。Cas9核酸酶在25-42°C保温2 h后剩余酶活保持在65%以上,而在45°C保温15 min后全部失活;其在pH 6.0-10.0范围内稳定性较高,剩余酶活大于68%,在pH9.0时稳定性最高;0.5-20.0mmol/L浓度范围内的Mg^2+对该酶有激活作用,10.0 mmol/L的Mg^2+可使该酶酶活力提高约23%;Ba^2+、Co^2+、Ca^2+、Mn^2+、Cu^2+、Fe^2+、Zn^2+对该酶有不同程度的抑制作用,其中0.5 mmol/L的Cu^2+和Fe^2+对Cas9核酸酶有完全抑制作用。【结论】异源表达并纯化出具有较高纯度和较高酶活力的酿脓链球菌Cas9核酸酶,并对其酶学特性进行了初步研究,该结果对CRISPR/Cas9技术的进一步推广和应用有一定的指导意义。 展开更多
关键词 酿脓链球菌Cas9核酸酶 纯化 硫酸铵沉淀 亲和层析 酶学特性
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S100A8/A9通过Wnt/β-catenin促进口腔鳞癌的侵袭迁移 被引量：2
3
作者 蒋岑 马洪 +3 位作者 胡赟 周可 孙俊泽 鲍玲娜 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2022年第12期1971-1978,共8页
目的研究外源性钙结合蛋白A8/A9(S100A8/A9)通过Wnt/β-catenin促进口腔鳞癌(OSCC)细胞CAL-27和SCC-25迁移和侵袭能力。方法分别或共同添加S100A8、S100A9蛋白培养CAL-27、SCC-25,蛋白印记法(Western blot)检测β-catenin的表达情况;免... 目的研究外源性钙结合蛋白A8/A9(S100A8/A9)通过Wnt/β-catenin促进口腔鳞癌(OSCC)细胞CAL-27和SCC-25迁移和侵袭能力。方法分别或共同添加S100A8、S100A9蛋白培养CAL-27、SCC-25,蛋白印记法(Western blot)检测β-catenin的表达情况;免疫荧光鉴定添加S100A8/A9蛋白培养CAL-27、SCC-2548 h后β-catenin的表达;加入20μg/ml Wnt/β-catenin通路抑制剂Dickkopf相关蛋白1(DKK-1),Western blot和实时定量荧光PCR(qPCR)检测β-catenin的表达;采用Transwell实验比较正常对照组(Control组)、添加S100A8/A9蛋白组、加入DKK-1组、加入DKK-1并添加S100A8/A9蛋白回复组的细胞侵袭和迁移能力;Western blot实验检测细胞髓细胞瘤病毒癌基因(c-Myc)和细胞周期蛋白D(cyclinD1)的表达。结果S100A8、A9能激活Wnt/β-catenin通路,与S100A8和S100A9分别培养相比,共同培养时CAL-27和SCC-25细胞中的β-catenin表达随着时间上调,qPCR结果与Western blot结果一致;在免疫荧光实验中,SCC-25及CAL-27细胞的细胞质和细胞核内均观察到β-catenin表达量变化,SCC-25及CAL-27细胞内β-catenin蛋白在48 h表达量增加(P<0.05);加入DKK-1,Western blot和qPCR显示β-catenin的表达降低(P<0.001);添加S100A8/A9组细胞迁移和侵袭数多于Control组(P<0.001),添加DKK-1抑制剂组细胞侵袭迁移数量减少,加入DKK-1并添加S100A8/A9蛋白回复组细胞侵袭迁移数量减少,提示DKK-1能够抑制外源性S100A8/A9蛋白对SCC-25及CAL-27细胞的侵袭迁移能力的促进作用,差异有统计学意义(P<0.001);加入Wnt/β-catenin通路抑制剂DKK-1,Western blot实验显示Wnt/β-catenin通路关键分子c-Myc和cyclinD1的表达降低(P<0.001)。结论外源性S100A8/A9蛋白可通过激活Wnt/β-catenin信号通路,促进SCC-25和CAL-27细胞的侵袭和迁移。 展开更多
关键词 S100A8/A9 WNT/Β-CATENIN DKK-1 侵袭 迁移
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S100A8/A9蛋白对人舌鳞癌SCC-25及CAL-27细胞侵袭的影响 被引量：1
4
作者 鲍玲娜 马洪 +1 位作者 李超 孙俊泽 《贵州医科大学学报》 CAS 2019年第11期1283-1287,共5页
目的:探讨外源性S100A8/A9蛋白对人舌鳞癌细胞SCC-25及CAL-27侵袭能力的影响。方法:人舌鳞癌SCC-25及CAL-27细胞分别分为实验组及对照组,实验组用5 mg/L S100A8/A9蛋白干预24 h,对照组添加等量培养基;采用Transwell小室侵袭实验检测SCC... 目的:探讨外源性S100A8/A9蛋白对人舌鳞癌细胞SCC-25及CAL-27侵袭能力的影响。方法:人舌鳞癌SCC-25及CAL-27细胞分别分为实验组及对照组,实验组用5 mg/L S100A8/A9蛋白干预24 h,对照组添加等量培养基;采用Transwell小室侵袭实验检测SCC-25及CAL-27细胞侵袭情况,实时定量PCR(RT-qPCR)检测SCC-25及CAL-27细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及MMP-9基因的表达情况。结果:与对照组比较,实验组SCC-25及CAL-27细胞在Transwell小室中降解人工基底膜并穿过聚碳酸酯膜的能力增强(P<0.05),且实验组SCC-25及CAL-27细胞MMP-2及MMP-9的基因相对表达量增加(P<0.05)。结论:5 mg/L外源性S100A8/A9蛋白能增强舌癌SCC-25及CAL-27细胞的侵袭能力,其机制可能与S100A8/A9蛋白影响两种细胞中MMP-2及MMP-9表达有关。 展开更多
关键词 舌肿瘤 癌 钙卫蛋白 细胞侵袭 基质金属蛋白酶-2 基质金属蛋白酶-9
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钙卫蛋白调控口腔鳞癌细胞侵袭迁移作用机制
5
作者 孙俊泽 马洪 +1 位作者 胡赟 鲍玲娜 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期769-774,共6页
目的:研究钙卫蛋白(S100A8/A9蛋白)对OSCC细胞迁移和侵袭能力的影响及其相关机制。方法:CCK8法检测不同浓度S100A8/A9蛋白处理细胞后的增殖活性,确定合适浓度后,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,Western blot和细胞免疫荧光... 目的:研究钙卫蛋白(S100A8/A9蛋白)对OSCC细胞迁移和侵袭能力的影响及其相关机制。方法:CCK8法检测不同浓度S100A8/A9蛋白处理细胞后的增殖活性,确定合适浓度后,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,Western blot和细胞免疫荧光染色检测1μg/ml S100A8/A9蛋白下OSCC细胞内p-p38MAPK表达分布,RT-qPCR检测OSCC细胞中与侵袭转移相关基因的表达情况。结果:1μg/ml S100A8/A9蛋白作用下,OSCC细胞增殖活性增加(P<0.05),细胞迁移和侵袭数增多(P<0.001);S100A8/A9抑制剂组细胞迁移和侵袭数减少(P<0.001);p-p38MAPK蛋白表达上调(P<0.05);S100A8/A9组MMP-2 mRNA和MMP-9 mRNA表达上调,抑制剂组MMP-2 mRNA和MMP-9 mRNA表达下调(P<0.001)。结论:1μg/ml S100A8/A9蛋白可能通过活化p38MAPK通路促进OSCC细胞迁移和侵袭,上调MMP-2 mRNA和MMP-9 mRNA。 展开更多
关键词 钙卫蛋白 侵袭 迁移 基质金属蛋白酶 P38丝裂原活化蛋白激酶
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钙卫蛋白S100A8/A9对口腔鳞癌细胞增殖和迁移的影响
6
作者 鲍玲娜 马洪 李超 《贵州医科大学学报》 CAS 2019年第9期1034-1038,共5页
目的:研究钙卫蛋白S100A8/A9对口腔鳞癌(OSCC)细胞SCC-25增殖和迁移能力的影响。方法:选取人舌鳞状细胞癌细胞SCC-25作为模型细胞,将S100A8和S100A9人重组蛋白以质量比1∶1均匀混合形成钙卫蛋白S100A8/A9,分别以0mg/L(对照组)、5、10、2... 目的:研究钙卫蛋白S100A8/A9对口腔鳞癌(OSCC)细胞SCC-25增殖和迁移能力的影响。方法:选取人舌鳞状细胞癌细胞SCC-25作为模型细胞,将S100A8和S100A9人重组蛋白以质量比1∶1均匀混合形成钙卫蛋白S100A8/A9,分别以0mg/L(对照组)、5、10、20、30和40mg/L的浓度作用于SCC-25细胞24及48h,观察钙卫蛋白S100A8/A9对SCC-25细胞增殖能力的影响;选取5mg/L钙卫蛋白S100A8/A9处理SCC-25细胞,采用Transwell小室及细胞划痕实验观察S100A8/A9对SCC-25细胞的侵袭及迁移能力的影响。结果:5、10、20、30和40mg/L钙卫蛋白S100A8/A9作用下SCC-25细胞24h时的增殖能力较对照组增强(P<0.05),5、10、20和30mg/L钙卫蛋白S100A8/A9作用下SCC-25细胞48h时的增殖能力表现出相同趋势,但40mg/L钙卫蛋白S100A8/A9作用SCC-25细胞48h时的增殖能力较对照组减弱(P<0.05);Transwell小室实验显示,5mg/L钙卫蛋白S100A8/A9作用的实验组穿过聚碳酸酯膜的SCC-25细胞数目多于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);划痕实验结果显示,5mg/L钙卫蛋白S100A8/A9作用的实验组在24、48及72h后细胞划痕面积明显小于对照组。结论:5mg/L钙卫蛋白S100A8/A9促进SCC-25细胞的增殖和迁移。 展开更多
关键词 口腔鳞状细胞癌 细胞增殖 细胞迁移分析 细胞运动 钙卫蛋白
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