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高产中性蛋白酶菌株的筛选、优化及中试放大 被引量：3
1
作者 张文静 佟晔 +2 位作者 杨锡文 曹彦金 魏计东 《生物技术进展》 2022年第1期112-119,共8页
为筛选分离得到具有高产中性蛋白酶能力的菌株,同时研究菌株的发酵条件,在牛粪、猪粪堆肥时期采集样品,在以干酪素为唯一碳源的固体培养基上筛选分离得到19株产蛋白酶菌株。选取其中1株产酶效果最好的菌株PC2,其水解圈D/d值为4.25,酶活... 为筛选分离得到具有高产中性蛋白酶能力的菌株,同时研究菌株的发酵条件,在牛粪、猪粪堆肥时期采集样品,在以干酪素为唯一碳源的固体培养基上筛选分离得到19株产蛋白酶菌株。选取其中1株产酶效果最好的菌株PC2,其水解圈D/d值为4.25,酶活为10.74 U·mL^(−1)。结合形态学、生理生化以及16S rDNA分子生物学鉴定结果,认定其为枯草芽孢杆菌,革兰氏阳性菌。进一步对其进行摇瓶和中试放大条件优化,LB培养基37℃活化24 h,干酪素发酵培养基30℃发酵48 h,转速为180 r·min^(−1)。中试放大具体参数:50 L种子罐180~240 r·min^(−1),通气量20~30 L·min^(−1)。500 L发酵罐:添加1%小麦蛋白粉,100~180 r·min^(−1),通气量10~25 L·min^(−1)。发酵结束活菌含量44.58亿·mL^(−1),酶活29.48 U·mL^(−1),是初始值的2.745倍。研究结果可为探究含中性蛋白酶菌株的微生物菌剂奠定理论基础,并指导工业化菌剂的生产。 展开更多
关键词 蛋白酶 细菌 鉴定 发酵条件优化 中试放大
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海洋葡甘聚糖酶菌株的分离鉴定及酶学性质研究 被引量：6
2
作者 王强 李旭 +4 位作者 窦少华 张庆芳 魏计东 金连豆 迟乃玉 《中国酿造》 CAS 北大核心 2016年第6期65-69,共5页
以海泥和海水为样品,采用稀释涂布平板法初筛、摇瓶发酵复筛,得到一株葡甘聚糖酶高产菌Q1,测得酶活为187.68 U/m L。通过形态学、生理生化特征及16S rDNA序列分析,鉴定菌株Q1为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),其所产酶最适作用温度为3... 以海泥和海水为样品,采用稀释涂布平板法初筛、摇瓶发酵复筛,得到一株葡甘聚糖酶高产菌Q1,测得酶活为187.68 U/m L。通过形态学、生理生化特征及16S rDNA序列分析,鉴定菌株Q1为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),其所产酶最适作用温度为35℃,热稳定性较差;最适作用pH值为6.0,碱性条件下,pH稳定性较差;Cu^(2+)、Fe^(2+)、乙二胺四乙酸(EDTA)对该酶抑制性较强,Mg^(2+)对该酶抑制性较弱,NH_4^+对该酶的活性影响不明显,Na^+对该酶激活作用较弱,Mn^(2+)对该酶激活作用较强。该酶只在外源诱导物存在时,才能大量合成,说明该酶是诱导酶。 展开更多
关键词 海洋 葡甘聚糖酶 鉴定 枯草芽孢杆菌 酶学性质
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亚硝酸还原酶基因克隆、表达与纯化 被引量：2
3
作者 魏计东 张庆芳 +3 位作者 窦少华 于爽 迟乃玉 王晓辉 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2017年第14期101-105,共5页
该研究通过聚合酶链反应(PCR)方法从木糖氧化产碱菌(Achromobacter xylosoxidans DL-1)基因组DNA中成功克隆含铜亚硝酸还原酶基因。PCR测序表明该基因全长1083个核苷酸,编码360个氨基酸,预测其理论分子质量约38.924 k Da,等电点(p I)4.... 该研究通过聚合酶链反应(PCR)方法从木糖氧化产碱菌(Achromobacter xylosoxidans DL-1)基因组DNA中成功克隆含铜亚硝酸还原酶基因。PCR测序表明该基因全长1083个核苷酸,编码360个氨基酸,预测其理论分子质量约38.924 k Da,等电点(p I)4.83,命名为Cu NiR(Genbank登录号KX674378)。结构域分析该蛋白编码区包含信号肽,1个铜离子结合位点,1个氧化还原酶催化域。将Cu NiR基因构建到p ET22b载体,并转化至大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)BL21(DE3)中诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测显示目的蛋白可溶表达。利用镍柱亲和层析纯化重组蛋白,酶活检测显示比活力为123.82 U/mg,为后期含铜亚硝酸还原酶(Cu NiR)的生化性质表征奠定理论基础。 展开更多
关键词 木糖氧化产碱菌DL-1 含铜亚硝酸还原酶(Cu NiR) 克隆 表达 纯化
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海洋低温脂肪酶菌株的筛选鉴定、诱变育种及酶学性质研究
4
作者 魏计东 于爽 +1 位作者 张庆芳 迟乃玉 《江苏农业科学》 2018年第15期195-200,共6页
以海泥、海水为样品,经初筛、复筛得到1株脂肪酶高产菌FS119,测得酶活为17.8 U/m L。通过形态学、生理生化特征及16S rDNA序列分析,鉴定菌株FS119为液化沙雷氏菌(Serratia liquefaciens),对液化沙雷氏菌FS119进行物理化学合成诱变,筛选... 以海泥、海水为样品,经初筛、复筛得到1株脂肪酶高产菌FS119,测得酶活为17.8 U/m L。通过形态学、生理生化特征及16S rDNA序列分析,鉴定菌株FS119为液化沙雷氏菌(Serratia liquefaciens),对液化沙雷氏菌FS119进行物理化学合成诱变,筛选出1株高产诱变菌株FS119-1,该菌株遗传性能稳定,酶活达到24.9 U/m L,为原始菌株的1.4倍。该低温脂肪酶的最适反应温度为30℃,0℃时仍然有酶活;最适pH值为9,酸碱稳定性良好;K^+、Ca^(2+)、Mg^(2+)、Ba^(2+)对脂肪酶的活性有明显促进作用,Cu^(2+)、Mn^(2+)、EDTA对脂肪酶活性有严重抑制作用。 展开更多
关键词 海洋 低温脂肪酶 鉴定 诱变 液化沙雷氏菌 酶学性质
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