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盐酸胍法构建骨肉瘤细胞适配体ssDNA文库可行性
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作者 魏唐文 魏兵 +5 位作者 黄丹菊 梁昭珺 张宇飞 王秀娟 傅桂莲 梁骥 《北华大学学报（自然科学版）》 CAS 2025年第1期49-54,共6页
目的 探讨链霉亲和素-生物素(Streptavidin-Biotin,STV-Biotin)系统偶联盐酸胍(Guanidine hydrochloride,G-HCl)法构建骨肉瘤细胞适配体文库的可行性。方法 将备选寡核苷酸文库与目标细胞(骨肉瘤细胞U2-OS)进行选择性结合,应用PCR法将... 目的 探讨链霉亲和素-生物素(Streptavidin-Biotin,STV-Biotin)系统偶联盐酸胍(Guanidine hydrochloride,G-HCl)法构建骨肉瘤细胞适配体文库的可行性。方法 将备选寡核苷酸文库与目标细胞(骨肉瘤细胞U2-OS)进行选择性结合,应用PCR法将与细胞结合的寡核苷酸扩增成双链DNA(Double stranded DNA,dsDNA);dsDNA被生物素标记后与Streptavidin Sepharose(S.S)亲和层析介质结合,应用G-HCl法解离并纯化,制备目标单链寡核苷酸(Single stranded DNA,ssDNA)文库,以经典NaOH法为对照;将两种方法制备的单链文库分别与U2-OS结合,进行亲和性、回收率比较。结果 G-HCl方法获得的筛选文库ssDNA与U2-OS亲和性及ssDNA回收率高于经典NaOH法。结论 STV-Biotin系统偶联G-HCl成功制备了用于骨肉瘤细胞的适配体,为肿瘤适配体ssDNA文库构建提供了新的思路与方法。 展开更多
关键词 适配体 骨肉瘤细胞 盐酸胍 PCR 单链寡核苷酸
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