利用分子环化技术提高瘤胃微生物木聚糖酶热稳定性 被引量：5

1

作者 周可鑫 王欢 +8 位作者 朱鑫涛 郑安琪 李锘 孙小宝 高德英 安培培 王佳堃 钱国英 王谦 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期920-931,共12页

在高温下保持催化活性是工业酶的重要性质。近年来,采用基因工程、蛋白质工程技术提高野生酶进行催化活性或耐热等性质取得了重要进展。文中利用新近建立起来的异肽键介导的SpyTag/SpyCatcher系统对瘤胃微生物来源的木聚糖酶XYN11-6进... 在高温下保持催化活性是工业酶的重要性质。近年来,采用基因工程、蛋白质工程技术提高野生酶进行催化活性或耐热等性质取得了重要进展。文中利用新近建立起来的异肽键介导的SpyTag/SpyCatcher系统对瘤胃微生物来源的木聚糖酶XYN11-6进行分子环化,获得稳定的环化酶C-XYN11-6。在60℃、70℃和80℃下处理10 min,C-XYN11-6的残余活性为81.53%、73.98%和64.41%,分别是相同条件下线性蛋白L-XYN11-6残余活性的1.48、2.92、3.98倍。经60–90℃热处理10 min后,C-XYN11-6仍保持可溶状态,而L-XYN11-6几乎完全聚沉。内源荧光和8-苯胺-1-萘磺酸(8-anilino-1-naphthalenesulfonic acid,ANS)结合荧光光谱分析显示,较之L-XYN11-6,热处理环境中C-XYN11-6更能够维持其构象稳定。值得注意的是,分子环化提高了C-XYN11-6对0.1–50 mmol/L Ca^2+或0.1 mmol/L Cu^2+的耐受能力。综上所述,文中利用SpyTag/SpyCatcher系统获得热稳定性和离子稳定性提高的环化酶,为工业酶的分子改良及扩大其在工业领域的应用建立了良好基础。 展开更多

关键词 瘤胃 木聚糖酶 分子环化 底物降解 热稳定性

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湖羊瘤胃微生物GH9家族葡聚糖酶基因IDSGLUC9-25的表达与功能表征

2

作者 徐晓锋 韩俊彦 +7 位作者 丁钰杰 廖静 高德英 张骥 王佳堃 尹尚军 王谦 徐洁皓 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期755-766,共12页

【目的】葡聚糖酶是饲用添加剂的重要成分,本研究旨在从湖羊消化道微生物中挖掘性质优良的GH9家族葡聚糖酶基因,用于研发新型饲用酶制剂。【方法】从湖羊瘤胃微生物cDNA中扩增IDSGLUC9-25基因,在大肠杆菌中进行异源表达,对重组蛋白进行... 【目的】葡聚糖酶是饲用添加剂的重要成分,本研究旨在从湖羊消化道微生物中挖掘性质优良的GH9家族葡聚糖酶基因,用于研发新型饲用酶制剂。【方法】从湖羊瘤胃微生物cDNA中扩增IDSGLUC9-25基因,在大肠杆菌中进行异源表达,对重组蛋白进行诱导表达和纯化,研究重组蛋白的酶学性质和底物水解模式。【结果】IDSGLUC9-25基因编码527个氨基酸,包含一个CelD_N结构和一个GH9家族催化结构域;重组蛋白rIDSGLUC9-25分子量约为62.7 kDa,最适反应温度和pH分别为40℃和6.0,在30–50℃下活性较高,在pH 4.0–8.0范围内能够保持较高的稳定性,经pH4.0–8.0缓冲液处理1h后残余活性均大于90%;底物谱分析表明,rIDSGLUC9-25能催化大麦β-葡聚糖、苔藓地衣多糖、魔芋胶和木葡聚糖,比活性分别为(443.55±24.48)、(65.56±5.98)、(122.37±2.85)和(159.16±7.73)U/mg;利用薄层色谱法(thinlayer chromatography,TLC)和高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)分析水解产物发现,rIDSGLUC9-25降解大麦葡聚糖主要生成纤维三糖(占总还原糖64.19%±1.19%)和纤维四糖(占总还原糖26.24%±0.12%),催化地衣多糖主要生成纤维三糖(占总还原糖78.46%±0.89%)。【结论】本研究报道了一种来自密螺旋体属细菌的内切β-1,4-葡聚糖酶IDSGLUC9-25(EC3.2.1.4),能高效催化多糖底物生成纤维三糖和纤维四糖,为研发饲用酶制剂和制备低聚寡糖建立基础。 展开更多

关键词 湖羊 消化道微生物 葡聚糖酶 IDSGLUC9-25 纤维寡糖

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贝伐珠单抗注射液联合替莫唑胺同步放疗治疗脑转移的疗效及安全性 被引量：3

3

作者 高艳梅 党凌波 +4 位作者 王亚丽 马丽 邓宁 高德英 李雅 《现代肿瘤医学》 CAS 北大核心 2021年第19期3372-3375,共4页

目的:探讨贝伐珠单抗注射液联合替莫唑胺同步放疗治疗脑转移的疗效及安全性。方法:于2016年01月至2018年06月,将我院救治的60例脑转移患者纳入研究,按照随机数字表法将患者随机分为两组,30例每组。对照组实施替莫唑胺同步放疗,观察组实... 目的:探讨贝伐珠单抗注射液联合替莫唑胺同步放疗治疗脑转移的疗效及安全性。方法:于2016年01月至2018年06月,将我院救治的60例脑转移患者纳入研究,按照随机数字表法将患者随机分为两组,30例每组。对照组实施替莫唑胺同步放疗,观察组实施贝伐珠单抗注射液联合替莫唑胺同步放疗,比较两组患者的临床总有效率、癌因性疼痛评分、癌因性疲乏评分、生存质量评分、不良反应发生率、远期存活率。结果:观察组患者临床总有效率为70.00%,高于对照组的43.33%(P<0.05)。治疗后3个月、6个月,观察组患者癌因性疼痛评分、癌因性疲乏评分均低于对照组(P<0.05),观察组患者生存质量评分高于对照组(P<0.05)。观察组患者恶心呕吐、骨髓抑制、贫血、脱发、白细胞减少、血小板减少等不良反应发生率与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。随访2年,观察组患者1年存活率、2年存活率均高于对照组(P<0.05)。结论:在替莫唑胺同步放疗基础上应用贝伐珠单抗注射液,可提高脑转移患者的近期疗效,有效控制病情,减轻癌因性疼痛和疲乏症状,有利于提高患者生存质量和远期存活率,且不良反应未增加,安全性良好。 展开更多

关键词 脑转移 替莫唑胺 贝伐珠单抗 放疗 化疗 靶向治疗

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公路翻浆的成因及对策研究 被引量：1

4

作者 唐松玲 李玉奎 高德英 《黑龙江交通科技》 2003年第3期23-23,25,共2页

针对引发公路翻浆的水文、土质、气候、行车等几个主要因素及其相互关系 ,提出了因地制宜的对策 ,如提高路基、换土、铺设垫层。

关键词 公路翻浆 原因分析 对策 防治措施 路基 病害整治 铺设垫层法 换土法

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立体定向伽玛射线全身治疗系统治疗体部恶性肿瘤318例近期疗效分析

5

作者 顾松 高德英 +1 位作者 刘晓莹 邓彦荣 《肿瘤学杂志》 CAS 2009年第10期937-939,共3页

[目的]分析立体定向伽玛射线全身治疗系统(超级伽玛刀)治疗体部恶性肿瘤的近期疗效。[方法]体部恶性肿瘤患者318例(其中经病理证实284例),采用超级伽玛刀治疗,肿瘤直径<3cm者,用70%～90%的等剂量曲线覆盖靶区,单次周边剂量4～6Gy,总... [目的]分析立体定向伽玛射线全身治疗系统(超级伽玛刀)治疗体部恶性肿瘤的近期疗效。[方法]体部恶性肿瘤患者318例(其中经病理证实284例),采用超级伽玛刀治疗,肿瘤直径<3cm者,用70%～90%的等剂量曲线覆盖靶区,单次周边剂量4～6Gy,总剂量35～50Gy;肿瘤直径3～5cm者,用60%～70%等剂量曲线覆盖靶区,单次周边剂量3～6Gy,总剂量35～45Gy;肿瘤直径>5cm者,用50%～60%等剂量曲线覆盖靶区,单次周边剂量3～6Gy,总剂量25～42Gy。一般分6～15次,每日或隔日治疗1次。[结果]CT示CR95例(29.9%),PR186例(58.5%),NC12例(3.8%),总有效率88.4%。提高生存质量,无严重毒副反应和并发症。[结论]超级伽玛刀治疗体部肿瘤症状改善明显,近期疗效显著,是体部恶性肿瘤患者的一种较为理想的治疗方法。 展开更多

关键词 体部恶性肿瘤 放射疗法 立体定向 Γ射线

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湖羊瘤胃微生物葡聚糖酶基因GH5-47的原核表达与酶学性质研究 被引量：1

6

作者 尉俏女 高德英 +5 位作者 王佳堃 田健 李平 诸辉 尹尚军 王谦 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2021年第5期197-203,共7页

葡聚糖是谷物类饲料中主要的一种抗营养因子,β-葡聚糖酶能打断β-葡聚糖主链糖环间的糖苷键并释放出低聚寡糖或单糖,作为饲用酶制剂在畜牧生产中具有重要应用价值。本课题组前期采用宏转录学技术筛选获得多个葡聚糖酶基因候选序列,本... 葡聚糖是谷物类饲料中主要的一种抗营养因子,β-葡聚糖酶能打断β-葡聚糖主链糖环间的糖苷键并释放出低聚寡糖或单糖,作为饲用酶制剂在畜牧生产中具有重要应用价值。本课题组前期采用宏转录学技术筛选获得多个葡聚糖酶基因候选序列,本研究利用PCR技术扩增瘤胃微生物cDNA获得新型葡聚糖酶基因GH5-47,采用同源重组技术构建相应的大肠杆菌工程菌。结果表明:GH5-47蛋白的理论分子量和等电点分别为40.6 ku和4.62;重组GH5-47在pH4.0~6.0或50℃以下较为稳定,其最适反应pH为5.0,最适反应温度为50℃,对0.5~10 mmol/L K^(+)或EDTA表现较强耐受能力;重组GH5-47能催化大麦葡聚糖、苔藓地衣多糖和魔芋胶底物,最大反应速率(Vmax)分别为1 111、895.8、15.15μmol/(min·mg protein)。此外,该蛋白对魔芋胶具有一定降解能力。本研究克隆、表达了一种来自瘤胃未培养微生物的新型葡聚糖酶GH5-47,该酶属弱酸性、嗜温的多底物活性酶。 展开更多

关键词 反刍动物 瘤胃微生物 葡聚糖酶 原核表达 酶学性质

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小学数学“五字”教学法1+1=?

7

作者 高德英 《黑河教育》 1997年第1期36-37,共2页

长期以来,由于传统教学思想的影响,课堂教学存在着种种弊端。其表现为:(一)颠倒了教与学的关系。课堂教学中,一般是教师讲,学生听,教师演示学生看,学生处于被动的状态。(二)教师在课堂上只讲一二个例题,然后由学生模仿例题做练习,这种... 长期以来,由于传统教学思想的影响,课堂教学存在着种种弊端。其表现为:(一)颠倒了教与学的关系。课堂教学中,一般是教师讲,学生听,教师演示学生看,学生处于被动的状态。(二)教师在课堂上只讲一二个例题,然后由学生模仿例题做练习,这种教学方法不但学生获得知识的信息少,还形成了老师怎样教,学生就怎样学的信赖思想,从而限制了学生的思维能力。(三)课堂时间多数被教师讲课占用了, 展开更多

关键词 课堂教学 教学法 小学数学 教学方法 思维能力 教师 传统教学 课堂时间 教与学 思想

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基于异肽键连接的分子粘合剂研究进展

8

作者 高德英 曹佳雯 +3 位作者 孙小宝 周可鑫 张铁涛 王谦 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期607-615,共9页

异肽键分子粘合剂是多肽链中的赖氨酸(Lys)残基和天冬酰胺或天冬氨酸(Asn/Asp)残基侧链自发结合形成的不可逆共价键,具有良好的特异性和稳定性。该反应可在极短的时间完成,且不需要特定的理化环境和催化剂。文中结合近年来国内外学者对... 异肽键分子粘合剂是多肽链中的赖氨酸(Lys)残基和天冬酰胺或天冬氨酸(Asn/Asp)残基侧链自发结合形成的不可逆共价键,具有良好的特异性和稳定性。该反应可在极短的时间完成,且不需要特定的理化环境和催化剂。文中结合近年来国内外学者对异肽键分子粘合剂的研究进展,综述了异肽键分子粘合剂的来源、类型、形成机制及其介导的分子环化和蛋白拓扑结构,并讨论了其在合成疫苗、水凝胶和细菌纳米生物反应器等领域的应用前景。 展开更多

关键词 异肽键 分子环化 机制 SpyTag/SpyCatcher 应用

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师专生的阅览爱好浅析

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作者 高德英 《天中学刊》 1987年第1期83-84,共2页

我校学生阅览室共有八百多种期刊。借阅时采取的是半开架,压证借阅,当班还清的方法。每到阅览时间,室内常常座无空席。同学们在阅览期刊中有什么样的爱好?他们阅览的目的和动机是什么?通过阅览期望获得哪些方面的知识?这些问题都是我们... 我校学生阅览室共有八百多种期刊。借阅时采取的是半开架,压证借阅,当班还清的方法。每到阅览时间,室内常常座无空席。同学们在阅览期刊中有什么样的爱好?他们阅览的目的和动机是什么?通过阅览期望获得哪些方面的知识?这些问题都是我们阅览室工作人员应该熟悉和掌握的。为此,两年来,我实地观察,个别了解;最近,我又把所有室内期刊粗略地分为六类(因为我们是综合性的阅览室,这些分类并非科学和准确,只是为了调查的方便),以同学们喜爱阅读哪类期刊为题目,利用去年十月份(因为这个月是老生进入二年级,新生刚入校不久,有一定代表性)的借阅单。 展开更多

关键词 师专生 阅览室工作 座无空席 思想品德修养 任务决定 政治理论 精神生活 幸福观 金钱观 研究刊物

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湖羊瘤胃微生物葡聚糖酶基因IDSGluc5-31的克隆、表达与性质研究

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作者 李锘 高德英 +4 位作者 曹佳雯 孙小宝 何波 王佳堃 王谦 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2022年第9期220-227,共8页

β-葡聚糖酶是一类催化β-葡聚糖降解成为纤维寡糖的糖苷水解酶,其作为饲用酶制剂在畜牧生产中具有重要应用价值。本研究旨在从前期采用宏转录学技术获取的碳水化合物活性酶序列中挖掘新型葡聚糖酶基因。从瘤胃微生物cDNA中扩增获得新... β-葡聚糖酶是一类催化β-葡聚糖降解成为纤维寡糖的糖苷水解酶,其作为饲用酶制剂在畜牧生产中具有重要应用价值。本研究旨在从前期采用宏转录学技术获取的碳水化合物活性酶序列中挖掘新型葡聚糖酶基因。从瘤胃微生物cDNA中扩增获得新型葡聚糖酶基因IDSGluc5-31,并构建相应的大肠杆菌工程菌。重组工程菌BL21/pET28a/IDSGluc5-31经1 mmol/L IPTG,16℃诱导表达16 h后,收集菌体、破碎后进行亲和层析,纯化的IDSGLUC5-31用于酶学性质分析。结果表明:IDSGLUC5-31的理论分子量和等电点分别为46.6 ku和4.89,呈现GH5家族典型的(β/α)_(8)桶状催化结构域。重组IDSGLUC5-31的最适反应温度和pH分别为40℃和6.0,在40℃以下或pH 5.0~7.0较为稳定,对0.1~10 mmol/L Na^(+)、0.1~1 mmol/L Ca^(2+)或Mg^(2+)表现较强耐受能力。IDSGLUC5-31能高效催化大麦葡聚糖和苔藓地衣多糖,Vmax分别为508.7、240.1μmol/(min·mg)。处理20 h后,大麦葡聚糖和苔藓地衣多糖的水解产物均为纤维三糖(产量为0.94、0.87 mg/mL)和纤维四糖(产量为0.56、0.23 mg/mL),提示IDSGLUC5-31是一种内切β-葡聚糖酶。综上,本研究获取并表征了一种来自瘤胃未培养微生物的葡聚糖酶IDSGLUC5-31,为研发新型饲用酶制剂和功能性寡糖提供参考。 展开更多

关键词 瘤胃微生物 葡聚糖酶 异源表达 酶学性质 底物水解

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中学英语教学初探

11

作者 高德英 《大观周刊》 2011年第14期41-41,共1页

兴趣是推动学生学习英语的关键因素。作为教师应该在提高自身综合素质的基础上，通过与学生建立和谐的师生关系；帮助学生明确学习目的；指导学生学习方法，排除障碍；开展各项活动为学生创造学习语境，来激发学生学习英语的兴趣，使他... 兴趣是推动学生学习英语的关键因素。作为教师应该在提高自身综合素质的基础上，通过与学生建立和谐的师生关系；帮助学生明确学习目的；指导学生学习方法，排除障碍；开展各项活动为学生创造学习语境，来激发学生学习英语的兴趣，使他们真正学到知识，提高能力。 展开更多

关键词 中学 英语 教学 初探

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板图在中学历史教学中的应用

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作者 高德英 杨贵姿 《山东教育》 1999年第Z5期71-71,共1页

在中学历史教学中，有些内容比较复杂、抽象，单靠口头讲述难以讲清、讲好。在讲授这些内容时，板图可以起到很好的辅助作用。所谓板图，就是在黑板上所画的图式或图表，它可以使复杂、抽象的教学内容简洁化、直观化。一、板图的特点板... 在中学历史教学中，有些内容比较复杂、抽象，单靠口头讲述难以讲清、讲好。在讲授这些内容时，板图可以起到很好的辅助作用。所谓板图，就是在黑板上所画的图式或图表，它可以使复杂、抽象的教学内容简洁化、直观化。一、板图的特点板图作为历史教学的一个重要辅助手段，... 展开更多

关键词 中学历史 板图 邓小平理论 教学内容 马克思主义 毛泽东思想 教学中 历史事件 中学历史教学 红军长征

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