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题名应用于基因编辑的核糖核蛋白复合体的构建与活性验证
被引量：2
- 1
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作者
高伟欣
黄火清
赵晶
张鑫
杨宁
杨浩萌
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机构
中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
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出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第8期60-68,共9页
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基金
国家重点研发计划(2021YFC2100204)。
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文摘
CRISPR/Cas9基因编辑技术具有操作简单、成本低廉和编辑效率高等优点,已经被广泛应用于动物、植物、微生物的基因编辑研究。在该技术体系中,发挥核酸剪切功能的是Cas9蛋白和guideRNA(gRNA)组装而成的核糖核蛋白复合体,即RNP(ribonucleoprotein)复合体。目前,应用体外组装的RNP复合体直接递送进入受体细胞进行基因编辑的研究越来越多,成为提高编辑效率、降低脱靶率的有效手段。本研究以获得具有高效剪切活性的RNP复合体为试验目的,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达了Cas9蛋白,并通过His-tag亲和树脂对重组Cas9蛋白进行了纯化;同时,通过T7转录试剂盒对gRNA进行体外转录和纯化,使纯化的Cas9蛋白和gRNA自发组装成RNP复合体,经体外活性检测,RNP复合体具有很好的DNA双链剪切活性;将其与donor DNA共同转化到黑曲霉菌株,成功敲除了目标蛋白,编辑效率达到90%以上。本研究获得的RNP复合体,可以应用于丝状真菌的基因编辑,节约了试验时间与成本,并推动RNP介导的基因编辑技术在更多领域的应用。
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关键词
Cas9蛋白
RNP复合体
大肠杆菌
活性验证
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Keywords
Cas9 protein
RNP complex
Escherichia coli
activity detection
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分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
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题名从新鲜番茄中提取番茄红素的条件优化
被引量：1
- 2
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作者
黄进
高伟欣
乔汉桢
王金荣
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机构
河南工业大学
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出处
《饲料研究》
CAS
北大核心
2019年第9期86-90,共5页
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基金
NSFC-河南联合基金项目(项目编号:U1404323)
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文摘
采用单因素试验研究时间、温度和料液比对番茄红素提取率的影响。在单因素试验的基础上,用L9(34)正交试验,寻找影响番茄红素提取率的最佳水平组合。试验在440~510 nm范围内测量番茄红素的吸光度,以确定番茄红素的最大吸收波长,在番茄红素的最大吸收波长下,比较不同种类的有机溶剂的提取效果,寻找提取效果较好的溶剂。然后绘制标准曲线。根据单因素试验和正交试验结果计算番茄红素的含量。试验结果显示,番茄红素的最大吸收波长是475 nm,利用乙酸乙酯作为提取溶剂时,提取效果最好。单因素试验结果显示,番茄红素的提取率随着提取时间、温度和料液比的增加而增加。当时间、温度和料液比分别达到70 min、45℃和1∶3后,提取率不再上升。正交试验显示,番茄红素提取的最优组合是A2B1C2。综合单因素和正交试验结果,用乙酸乙酯作溶剂时,影响番茄红素提取的各因素的最佳水平组合为:提取时间70 min、提取温度40℃、料液比1∶3。
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关键词
番茄红素
有机溶剂
正交试验
提取工艺
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Keywords
lycopene
organic solvent
orthogonal experiment
extraction process
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分类号
S816
[农业科学—饲料科学]
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