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基于孔雀石绿/核酸适配体的免标记荧光法检测中药中的赭曲霉素A 被引量：1
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作者 杨圆圆 邓峥嵘 +1 位作者 高仕超 郭丽敏 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期1818-1825,共8页
该文报道了一种基于孔雀石绿/核酸适配体的免标记荧光法检测中药中的赭曲霉素A(OTA)。孔雀石绿本身荧光信号微弱,与赭曲霉素A的核酸适配体作用后,G-四链体结构的核酸适配体为孔雀石绿提供一个保护的微环境,使其荧光信号显著增强。再加入... 该文报道了一种基于孔雀石绿/核酸适配体的免标记荧光法检测中药中的赭曲霉素A(OTA)。孔雀石绿本身荧光信号微弱,与赭曲霉素A的核酸适配体作用后,G-四链体结构的核酸适配体为孔雀石绿提供一个保护的微环境,使其荧光信号显著增强。再加入OTA之后,核酸适配体会优先与OTA结合,从而使孔雀石绿游离于核酸适配体之外,其荧光信号随之减弱。基于此,该文以OTA的核酸适配体为识别元件,孔雀石绿为荧光探针,建立了一种基于核酸适配体的荧光法检测中药中的OTA。并对金属离子、核酸适配体和孔雀石绿的浓度等影响实验结果的主要因素进行了进一步的优化。在最佳实验条件下对OTA进行了检测,实验发现,随着OTA浓度的增大,荧光信号逐渐减弱,在20~1000 nmol·L^(-1),OTA浓度与荧光信号比值ΔF/F呈线性相关(ΔF=F_(0)-F,F_(0)为核酸适配体/孔雀石绿的荧光信号,F为OTA/核酸适配体/孔雀石绿的荧光信号),检出限为7.1 nmol·L^(-1),R^(2)=0.995。为考察该方法的特异性,该实验选择了3种与OTA结构相似的物质以及2种可能和OTA共存的真菌毒素进行交叉反应率实验和特异性实验。交叉反应率实验表明这些干扰物不会引起检测体系明显的荧光信号变化,而特异性实验显示了当干扰物与OTA混合后,混合物产生的荧光信号与OTA的荧光信号接近,说明即使与干扰物共存,OTA的检测也不会受到影响,说明方法具有良好的特异性;方法也展现了良好的重复性和稳定性。仅对中药进行简单的离心和稀释,方法即可用于中药葛根、苦参、香加皮中OTA的检测,回收率在91.50%~121.3%。该方法不需要复杂的中药预处理,操作简单,检测成本低,检测时间短,而且方法将核酸适配体应用于中药质量鉴定中,进一步拓展了核酸适配体的应用范围。 展开更多
关键词 核酸适配体 孔雀石绿 赭曲霉素A 荧光 免标记
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基于磁球的竞争适配体法检测中药中赭曲霉素A
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作者 高仕超 秦美君 +1 位作者 李赟 郭丽敏 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期2764-2768,共5页
目的基于磁球的竞争适配体法检测中药中赭曲霉素A。方法以赭曲霉素A的适配体为识别元件,荧光素FAM为荧光探针,磁球为载体,发展了一种竞争的适配体法检测赭曲霉素A。FAM标记的适配体(F-Aptamer)与修饰在磁球上的适配体互补链(c-DNA)杂交... 目的基于磁球的竞争适配体法检测中药中赭曲霉素A。方法以赭曲霉素A的适配体为识别元件,荧光素FAM为荧光探针,磁球为载体,发展了一种竞争的适配体法检测赭曲霉素A。FAM标记的适配体(F-Aptamer)与修饰在磁球上的适配体互补链(c-DNA)杂交而结合在磁球上,并随着磁性分离离开溶液,溶液的荧光信号弱;在溶液中加入赭曲霉素A后,赭曲霉素A与c-DNA竞争性的与F-Aptamer结合,与赭曲霉素A结合的F-Aptamer留在溶液中,从而使溶液的荧光信号增强。结果c12-DNA做互补链,在50 nmol/L的FAM-Aptamer、20 nmol/L的Ca^(2+)和pH8.0的缓冲溶液下,方法检出限低至0.2 nmol/L,展现出良好的选择性,同时只需对样品进行简单处理即可实现赭曲霉素A在中药中的检测。结论本实验将适配体技术和纳米材料结合并应用于中药中真菌毒素的检测,为中药质量鉴定提供了新思路。 展开更多
关键词 赭曲霉素A 适配体 中药 荧光 磁球
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