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探索式教学模式在研究生生物医学大型仪器课程中的应用和评价 被引量：2
1
作者 孙海丹 郭正光 +4 位作者 周军 骈红茹 杨明珠 王欣 郑直 《基础医学与临床》 2021年第3期459-462,共4页
目的尝试和评价生物医学大型仪器理论与实验课程的探索式教学(IT)模式,为该教学模式的常规实施提供依据。方法在课程中开展IT小实验,总结其设计、实施、效果等;采用教育测量学理论和统计学方法对问卷进行评价,采用信度、相关性和区分度... 目的尝试和评价生物医学大型仪器理论与实验课程的探索式教学(IT)模式,为该教学模式的常规实施提供依据。方法在课程中开展IT小实验,总结其设计、实施、效果等;采用教育测量学理论和统计学方法对问卷进行评价,采用信度、相关性和区分度对问卷进行质量分析。结果IT小实验分别在2017级和2018级研究生选学本课程的部分学生中开展,取得了初步成果。参加人数达23人;问卷信度良好(α=0.852);27题项中有23题,与中间值比较,均有显著性差异(P<0.05)。结论问卷具有较好的区分度、信度、相关性和总体覆盖性,可用于评价教学中IT模式的需求。IT实验的合理设计、难度适中和时间安排是影响其实施效果的主要因素。 展开更多
关键词 创新思维 探索式教学 问卷 教学效果
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基于磁珠捕获和连接的免核酸提取的恒温扩增技术 被引量：2
2
作者 邱栎臻 杨明珠 +1 位作者 骈红茹 郑直 《基础医学与临床》 2021年第11期1653-1657,共5页
目的建立基于磁珠捕获和连接的环介导恒温扩增(CLIP-LAMP)方法体系,以适用于大体积样品处理,为病原体检测提供一种新的技术方法。方法在NCBI数据库搜索免疫缺陷病毒(HIV)的一段保守序列,使用实验室特有软件根据该保守序列设计相应的捕... 目的建立基于磁珠捕获和连接的环介导恒温扩增(CLIP-LAMP)方法体系,以适用于大体积样品处理,为病原体检测提供一种新的技术方法。方法在NCBI数据库搜索免疫缺陷病毒(HIV)的一段保守序列,使用实验室特有软件根据该保守序列设计相应的捕获探针和检测探针。磁珠表面通过亲和作用偶联寡核苷酸来抓取捕获探针;由于特异性捕获探针的存在使得核酸提取步骤被省略,靶标DNA或RNA直接特异地结合捕获探针;检测探针经过连接步骤后作为最终模板参与荧光定量环介导恒温扩增反应。将此方法用于HIV体外转录(IVT)合成的RNA检测,并且评估方法的灵敏度和特异性。结果构建的方法体系成功应用于HIV的IVT检测;现阶段可以检测到32 CPs/μL。该方法有可能处理>1 mL的大体积样本,并且可在2 h内完成检测。结论建立了基于磁珠的CLIP-LAMP技术,为快速、简便地进行大体积病原体检测提供了新的方法和思路。 展开更多
关键词 磁珠 HIV 环介导恒温扩增
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CLIP-PCR直接检测血液中疟原虫雌性配子体特异转录产物s25 mRNA
3
作者 杨珺源 骈红茹 +1 位作者 杨明珠 郑直 《基础医学与临床》 2022年第1期139-144,共6页
目的建立一种疟原虫雌性配子体的分子检测法。方法根据疟原虫雌性配子体特异性mRNA靶标(待测靶序列)即动合子表面蛋白(s25)的转录产物,设计特异性的捕获探针和连接探针。血液样品经裂解释放的mRNAs,无需核酸提取,通过“三明治”杂交被... 目的建立一种疟原虫雌性配子体的分子检测法。方法根据疟原虫雌性配子体特异性mRNA靶标(待测靶序列)即动合子表面蛋白(s25)的转录产物,设计特异性的捕获探针和连接探针。血液样品经裂解释放的mRNAs,无需核酸提取,通过“三明治”杂交被捕获到96孔板表面。洗去未结合探针后,将结合在mRNA靶标上的连接探针进行连接,得到两端为特殊设计序列的单链扩增模板。再用通用引物进行染料法qPCR扩增,或在端部设计TaqMan探针序列,用通用引物和通用TaqMan探针进行探针法qPCR扩增。评价这一基于捕获和连接扩增的方法(CLIP-PCR)的灵敏度、特异性和重复性并与普通的RT-qPCR方法进行比较,将其应用于临床样品的检测。结果该CLIP-PCR具有较高的灵敏度和特异性。与普通的RT-qPCR一样,均可检测低至11拷贝数的s25 mRNA靶标;而且该CLIP-PCR操作更简便。该CLIP-PCR可准确检测到疟疾患者血液中的雌性配子体。可将96个样品的检测时间缩短至3 h。结论建立了灵敏高效的染料法和通用TaqMan探针法CLIP-PCR检测疟原虫雌性配子体,为疟疾传播的控制、配子体大规模筛查奠定了基础。 展开更多
关键词 疟原虫 配子体 检测方法 捕获 连接
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捕获和连接的环介导等温扩增技术
4
作者 骈红茹 杨明珠 郑直 《基础医学与临床》 CSCD 2020年第11期1537-1541,共5页
目的建立捕获和连接的环介导等温扩增(CLIP-LAMP)技术,为医学诊断和病原体检测提供新的技术手段。方法根据靶标DNA或RNA序列设计特异性的捕获探针和具有茎环结构的检测探针。无需核酸提取,直接裂解全血和干血片等样本后,通过捕获探针将... 目的建立捕获和连接的环介导等温扩增(CLIP-LAMP)技术,为医学诊断和病原体检测提供新的技术手段。方法根据靶标DNA或RNA序列设计特异性的捕获探针和具有茎环结构的检测探针。无需核酸提取,直接裂解全血和干血片等样本后,通过捕获探针将靶核酸固定于96孔板上。检测探针进行特异性的连接反应,形成扩增模板,进行荧光定量的环介导等温扩增反应。将此方法应用于疟疾的检测中,定量检测疟原虫的18S rRNA,评估方法的灵敏度、特异性和重复性,并将其应用于临床样本的检测。结果此法具有较高的灵敏度和特异性,可检测到低至0.01个/μL的疟原虫,较传统的镜检和RDT灵敏度高,可准确检测到疟原虫的感染样品。此方法可在4 h内完成96个样本的检测,快速高效。结论建立了一种捕获和连接的等温扩增技术,为疾病的分子诊断和基因筛查提供了新的灵敏、高效的方法。 展开更多
关键词 环介导等温扩增 核酸检测 疟原虫
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