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猪瘟病毒及其猪瘟疫苗研究进展 被引量：40
1
作者 韩雪清 刘湘涛 赵启祖 《动物医学进展》 CSCD 2000年第2期1-7,共7页
猪瘟 ( HC)是猪的一种高度传染性疾病。它遍布于世界各国 ,对经济造成巨大的损失。中国猪瘟兔化弱毒疫苗在防治猪瘟中曾起到决定性作用 ,但近几年来出现免疫效果不理想 ,应用组织培养弱毒苗也发生免疫失败 ,究其原因比较多 .本文结合多... 猪瘟 ( HC)是猪的一种高度传染性疾病。它遍布于世界各国 ,对经济造成巨大的损失。中国猪瘟兔化弱毒疫苗在防治猪瘟中曾起到决定性作用 ,但近几年来出现免疫效果不理想 ,应用组织培养弱毒苗也发生免疫失败 ,究其原因比较多 .本文结合多年研究成果 ,对猪瘟病毒分子生物学特性和猪瘟疫苗研究进展进行了较为系统的综述 。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 猪瘟疫苗 分子生物学 研究进展
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免疫胶体金技术的应用及展望 被引量：41
2
作者 朱文钏 孔繁德 +4 位作者 林祥梅 徐淑菲 吴德峰 韩雪清 吴绍强 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期81-87,共7页
免疫胶体金技术是继三大标记技术(荧光素、放射性同位素和酶)后发展起来的固相标记免疫测定技术。免疫胶体金标记技术是以胶体金作为示踪标志物,应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。近年来,该技术在医学、动植物检疫、食品安全... 免疫胶体金技术是继三大标记技术(荧光素、放射性同位素和酶)后发展起来的固相标记免疫测定技术。免疫胶体金标记技术是以胶体金作为示踪标志物,应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。近年来,该技术在医学、动植物检疫、食品安全监督等各领域得到了日益广泛的应用。从胶体金技术的基本原理、制备方法、标记技术、应用现状及其优点等方面作一简要综述,并对该技术的发展前景作了展望。 展开更多
关键词 免疫胶体金技术 应用 展望
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毕赤酵母表达系统 被引量：20
3
作者 韩雪清 刘湘涛 尹双辉 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2003年第4期35-40,共6页
选择合适的表达系统是蛋白质体外成功表达的关键。毕赤酵母表达系统是一种新的、极具潜力的真核表达系统,其在蛋白质表达方面具有其它系统不可比拟的优点,正在得到越来越广泛的应用。较详细地综迷了毕赤酵母表达系统的特点、组成及影响... 选择合适的表达系统是蛋白质体外成功表达的关键。毕赤酵母表达系统是一种新的、极具潜力的真核表达系统,其在蛋白质表达方面具有其它系统不可比拟的优点,正在得到越来越广泛的应用。较详细地综迷了毕赤酵母表达系统的特点、组成及影响其表达的因素等。 展开更多
关键词 毕赤酵母 表达系统 真核表达系统 基因组表达
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牛结节性皮肤病病毒野毒株TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：31
4
作者 聂福平 孟向阁 +6 位作者 王昱 杨俊 李贤良 王国民 韩雪清 李应国 侯长军 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期403-409,共7页
为鉴别牛结节性皮肤病病毒野毒株(wild type lumpy skin disease virus,WT LSDV),本研究根据GenBank中发表的WT LSDV全基因组序列,设计并合成1对特异性引物和MGB探针,优化反应条件,建立了鉴别检测WT LSDV的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法。... 为鉴别牛结节性皮肤病病毒野毒株(wild type lumpy skin disease virus,WT LSDV),本研究根据GenBank中发表的WT LSDV全基因组序列,设计并合成1对特异性引物和MGB探针,优化反应条件,建立了鉴别检测WT LSDV的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法。结果显示,该方法仅对WT LSDV核酸有特异性扩增,对LSDV疫苗株等其他病毒核酸无交叉反应;标准曲线在一定浓度范围内呈现良好的线性关系,标准曲线为y=-3.361 x+34.979,R^2>0.999,扩增效率为98.39%,最低检测限为4.6 copies/μL。组内、组间重复性试验的变异系数均小于3%。对63份模拟临床样品的检测结果显示,本研究建立荧光定量PCR方法的阳性检出率为90.57%,OIE推荐的普通PCR方法的阳性检出率为64.15%,两种方法检测临床样品均为WT LSDV核酸阴性。结果表明,建立的WT LSDV TaqMan-MGB荧光定量PCR方法特异、敏感、快速、重复性好,且能快速准确地检测WT LSDV,适用于临床样品的鉴别检测,为该病的鉴别、监测、防控提供了技术支撑。 展开更多
关键词 牛结节性皮肤病病毒野毒株 荧光定量PCR TaqMan-MGB
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禽流感病毒分型基因芯片的研制 被引量：27
5
作者 韩雪清 林祥梅 +5 位作者 侯义宏 吴绍强 刘建 梅琳 贾广乐 杨泽晓 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1241-1249,共9页
【目的】禽流感病毒是一种全球重要的人和动物呼吸道病病原,快速确定其不同亚型对于全球流感监测具有重要的意义。本研究意在研制一种可同时鉴定禽流感病毒所有亚型的方法。【方法】根据GenBank上已发表的禽流感病毒不同亚型(16个HA亚型... 【目的】禽流感病毒是一种全球重要的人和动物呼吸道病病原,快速确定其不同亚型对于全球流感监测具有重要的意义。本研究意在研制一种可同时鉴定禽流感病毒所有亚型的方法。【方法】根据GenBank上已发表的禽流感病毒不同亚型(16个HA亚型和9个NA亚型)的基因序列,设计合成了25对特异性引物和1对通用引物,然后以各亚型病毒的参考株RNA作为模板,建立扩增不同亚型的多重RT-PCR方法。参考各亚型病毒靶cDNAs区域的保守序列设计了52条亚型特异的探针,进而利用扩增的各亚型病毒的靶cDNAs对其特异性进行评价。在此基础上,将设计好的探针点制到处理好的玻片上,制备了禽流感病毒分型鉴定基因芯片,结合所建立的扩增不同亚型的多重RT-PCR方法,开发了禽流感病毒亚型鉴定基因芯片试剂。利用收集自49个地区的2653份标本对其特异性和敏感性进行了初步评价。【结果】用于评价的各亚型参考毒株均出现良好的特异性杂交信号,检测的敏感度可达2.47PFU/mL或2.5ng靶DNA片段,而且与禽类常见的IBV、NDV等6种病毒均无交叉反应。【结论】证明该病毒分型基因芯片具有良好的特异性、敏感性。 展开更多
关键词 禽流感病毒 分型 基因芯片 杂交 检测
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亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立 被引量：18
6
作者 吴绍强 孙晓智 +4 位作者 林祥梅 刘建 韩雪清 贾广乐 梅琳 《检验检疫科学》 2008年第1期9-12,共4页
以灭活的亚洲Ⅰ型口蹄疫细胞培养病毒为材料,通过在病毒基因组的3D区域设计3对引物,建立口蹄疫病毒的RT-LAMP检测方法,对反应体系中的MgSO4、Betaine、Bst DNA PoLymerase、dNTP、ThermoScriptTM Rnase H-Reverse Transcriptase、3对引... 以灭活的亚洲Ⅰ型口蹄疫细胞培养病毒为材料,通过在病毒基因组的3D区域设计3对引物,建立口蹄疫病毒的RT-LAMP检测方法,对反应体系中的MgSO4、Betaine、Bst DNA PoLymerase、dNTP、ThermoScriptTM Rnase H-Reverse Transcriptase、3对引物等成分以及反应条件(反应温度)分别进行优化,并进行敏感性和特异性确定。建立了亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒的RT-LAMP检测方法,可以采用琼脂糖凝胶电泳、颜色变化、生成的沉淀等现象或者直接采用荧光PCR仪判定反应结果,为口蹄疫的现场快速检测提供了一种更加简便快速的方法,可以满足现场检疫的需要。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 环介导等温扩增反应 LAMP 检测
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左旋咪唑对鸡免疫功能的增强作用 被引量：19
7
作者 韩雪清 李忠润 +1 位作者 刘湘涛 李彦敏 《中国兽医科技》 CSCD 1996年第3期31-32,共2页
左旋咪唑(Levamisolum)分子式为C_(11)H_(12)N_2S,是较理想的免疫调节剂,可使动物免疫功能低下的免疫水平调至正常,并能提高健康动物对疫苗的免疫应答水平,从而达到防治疾病的目的。Renoux等发现左旋咪唑对鼠感染布鲁氏杆菌和绵羊细胞... 左旋咪唑(Levamisolum)分子式为C_(11)H_(12)N_2S,是较理想的免疫调节剂,可使动物免疫功能低下的免疫水平调至正常,并能提高健康动物对疫苗的免疫应答水平,从而达到防治疾病的目的。Renoux等发现左旋咪唑对鼠感染布鲁氏杆菌和绵羊细胞免疫缺陷有增强作用。Parigrahy等试验证明左旋咪唑对免疫抑制的火鸡有免疫刺激作用。本试验的目的在于探讨左旋咪唑对鸡传染性法氏囊病(IBD)疫苗免疫应答是否有增强作用,并为IBD疫苗免疫寻求增强剂而提供试验依据。 1 材料和方法 1.1 材料左旋咪唑:陕西汉江药厂生产; 展开更多
关键词 左旋咪唑 鸡病 IBD 疫苗 免疫功能 增强作用
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D型流感病毒研究概述 被引量：17
8
作者 李茜 李霆 +2 位作者 吴绍强 林祥梅 韩雪清 《检验检疫学刊》 2017年第4期73-75,共3页
从病原学、致病性、致病机制、实验室诊断、流行情况等方面对D型流感病毒的最新研究进展进行概述,以期增强人们对该病毒的认识,并为该病的防控提供科学依据。
关键词 流感病毒 D型流感病毒 致病机制
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极具应用前景的生物学检测技术--生物传感器 被引量：16
9
作者 韩雪清 杨泽晓 林祥梅 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期141-147,共7页
生物传感器是近年逐渐发展起来的一种高新生物学分析检测技术,它将生物学或仿生学信号感应部件紧密连接或整合到传感系统内,具有特异、敏感、快速、便携以及操作简便等优点,发展非常迅速,并且被应用到医疗保健、食品工业、畜牧兽医等多... 生物传感器是近年逐渐发展起来的一种高新生物学分析检测技术,它将生物学或仿生学信号感应部件紧密连接或整合到传感系统内,具有特异、敏感、快速、便携以及操作简便等优点,发展非常迅速,并且被应用到医疗保健、食品工业、畜牧兽医等多个领域,已成为人们研究的热点之一。概述了生物传感器的概念与工作原理、分类、与主要领域的研究应用,分析了生物传感器的产业现状,优点与现存问题,并对其应用发展前景进行了展望。 展开更多
关键词 生物传感器 检测技术 研究进展
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牛结节性皮肤病病毒TaqMan-MGB荧光PCR检测方法的建立 被引量：17
10
作者 聂福平 王昱 +7 位作者 黄秋华 杨俊 韩雪清 唐昌杰 袁曾壮 王国民 候长军 李应国 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1129-1134,共6页
为建立快速、特异鉴别检测牛结节性皮肤病病毒(LSDV)的方法,本研究参照GenBank中发表的LSDV全基因组序列,设计并合成一对特异性引物和探针,经优化条件,建立了可鉴别LSDV的TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法可特异性检测LS... 为建立快速、特异鉴别检测牛结节性皮肤病病毒(LSDV)的方法,本研究参照GenBank中发表的LSDV全基因组序列,设计并合成一对特异性引物和探针,经优化条件,建立了可鉴别LSDV的TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法可特异性检测LSDV,而与山羊痘病毒、绵羊痘病毒、牛痘病毒和猪痘病毒均无交叉反应;标准曲线在各浓度范围内呈现良好的线性关系,该方法建立的标准曲线方程为y=-3.141x+32.10,线性相关系数为0.999,扩增效率达到108%,最低检出下限为1.48 copies/L;组内、组间重复性试验的变异系数均小于2%。采用此方法对52份模拟临床样品和112份临床样本的检测结果显示:32份模拟阳性样品检出LSDV核酸阳性,20份模拟阴性样品未检出LSDV;而用OIE推荐的普通PCR方法仅检出28份模拟阳性样品的LSDV核酸阳性,24份模拟样品的LSDV核酸阴性(其中20份为模拟阴性样品,4份为模拟阳性样品);两种方法均未从112份临床样品中检出LSDV核酸阳性。上述结果表明,荧光PCR的敏感性明显优于普通PCR,能够快速准确地检测LSDV,适用于临床样品的检测,为外来疫病防控提供了技术支撑。 展开更多
关键词 牛结节性皮肤病病毒 荧光定量PCR TAQMAN-MGB探针
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贝类派琴虫实时荧光定量PCR检测方法的建立和应用 被引量：14
11
作者 吴绍强 李海艳 +6 位作者 林祥梅 郑腾 李西峰 刘建 梅琳 韩雪清 贾广乐 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2009年第5期58-63,共6页
选择派琴虫保守的核糖体DNAITS-2区域设计引物和TaqMan探针,通过对反应体系和反应条件进行优化,建立了实时荧光定量PCR检测派琴虫的方法。所构建方法检测质粒模板DNA的动态范围为2.6×101～2.6×107拷贝,敏感度可检测到26拷贝质... 选择派琴虫保守的核糖体DNAITS-2区域设计引物和TaqMan探针,通过对反应体系和反应条件进行优化,建立了实时荧光定量PCR检测派琴虫的方法。所构建方法检测质粒模板DNA的动态范围为2.6×101～2.6×107拷贝,敏感度可检测到26拷贝质粒DNA,而且与包拉米原虫、隐孢子虫等其他寄生性原虫无交叉反应,也不受贝类组织DNA的干扰。利用本研究所建立的方法对来自我国山东、福建等不同沿海海域的30份贝类样品进行检测,检出阳性样品3份。研究表明,本研究所构建的派琴虫实时荧光定量PCR检测方法具有快速、灵敏和特异等优点,可满足国内养殖场及进出口水生动物携带派琴虫的检测需要。 展开更多
关键词 派琴虫 贝类 实时荧光PCR 检测
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急、慢性猪瘟病毒分离株和疫苗株E2基因的序列分析 被引量：10
12
作者 刘伯华 刘湘涛 +3 位作者 韩雪清 赵启祖 李明晖 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期568-575,共8页
利用反转录 (RT)及套式PCR(N -PCR)扩增并测定了 6株具有不同表症近期甘肃省猪瘟流行野毒及C -株细胞疫苗毒的主要免疫原E2基因的核苷酸序列。序列分析比较结果表明 ,6株流行野毒与C -株疫苗毒的核苷酸同源性为 82 %～ 84 % ,流行野毒... 利用反转录 (RT)及套式PCR(N -PCR)扩增并测定了 6株具有不同表症近期甘肃省猪瘟流行野毒及C -株细胞疫苗毒的主要免疫原E2基因的核苷酸序列。序列分析比较结果表明 ,6株流行野毒与C -株疫苗毒的核苷酸同源性为 82 %～ 84 % ,流行野毒之间的核苷酸同源性在 89%～99%之间 ,并且明显可分为二个组群 ,病毒株所属组群与其临床症状有一定的相关性。流行野毒与C -株毒在中和抗原决定簇上有部分氨基酸存在性质差异 ,可能影响C -株毒对流行野毒的中和滴度。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2基因 序列分析 分离株 疫苗株
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我国近期猪瘟分子流行病学动态 被引量：15
13
作者 孙世琪 靳野 +8 位作者 郭慧琛 尚佑军 魏旭文 马军武 韩雪清 邱伯根 梁原祥 刘湘涛 谢庆阁 《动物医学进展》 CSCD 2004年第6期69-71,共3页
利用反转录聚合酶链式反应 (RT PCR)及测序技术 ,测定 2 0 0 2年分离于我国甘肃、湖南、海南、青海等省的 9株猪瘟野毒的E2基因序列 ,并与C 株疫苗毒进行同源性比较 ,绘制CSFV系统发生树。结果表明 ,近期分离于我国的 9株野毒与C 株核... 利用反转录聚合酶链式反应 (RT PCR)及测序技术 ,测定 2 0 0 2年分离于我国甘肃、湖南、海南、青海等省的 9株猪瘟野毒的E2基因序列 ,并与C 株疫苗毒进行同源性比较 ,绘制CSFV系统发生树。结果表明 ,近期分离于我国的 9株野毒与C 株核苷酸序列间的同源性在80 .7%～ 99.1 %,氨基酸同源性在 89.3%～98.9%。9株野毒分属于 2个不同的组群 ,其中 5株与我国经典的石门强毒和C 株疫苗毒同属于Subgroups1 .1 ,另 4株属于与C 株有较大差异的Subgroup2 .1。 展开更多
关键词 中国 猪瘟 分子流行病学 动态分析
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中国猪瘟兔化弱毒株(C-株)兔脾组织毒主要保护性抗原E2(gp55)基因序列分析 被引量：11
14
作者 韩雪清 李红卫 +11 位作者 刘湘涛 李小兵 马军武 涂长春 胡弘博 殷震 蒋帅 刘伯华 赵启祖 李健强 李忠润 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期52-57,共6页
利用反转录 (RT)及套式PCR(N PCR)方法扩增了中国猪瘟兔化弱毒株 (C 株 )兔脾组织毒主要保护性抗原E2 (gp55)基因 ,成功地将其克隆并测定了核苷酸序列 ,与国内外已发表的猪瘟病毒 (HCV)E2基因序列比较的结果是 :C 株兔脾毒与C 株细胞 (S... 利用反转录 (RT)及套式PCR(N PCR)方法扩增了中国猪瘟兔化弱毒株 (C 株 )兔脾组织毒主要保护性抗原E2 (gp55)基因 ,成功地将其克隆并测定了核苷酸序列 ,与国内外已发表的猪瘟病毒 (HCV)E2基因序列比较的结果是 :C 株兔脾毒与C 株细胞 (SK6)毒、C 株疫苗 (犊牛睾丸细胞 ,HCLV C)毒、HCV SM株 (石门 )毒、Brescia株 (荷兰 )毒、Alfort株 (德国 )毒的E2核苷酸序列同源性分别为 98 87%、98 34 %、94 58%、91 0 0 %、80 78% ;氨基酸同源性分别为 98 95%、97 37%、94 2 2 %、91 60 %、89 2 3%。对C 株兔脾毒与C 株细胞毒、经典强毒及国内流行野毒E2上的A、B、C三个中和性抗原区的氨基酸组成进行了比较 ,其结果为 :C 株兔脾毒与C 株细胞毒的差异很小甚至没有差异 ,而与流行野毒及经典强毒在B、C区有较大的差异。我国经典强毒石门毒与国内80年代和 90年代流行毒之间有明显的差异 ,表明我国猪瘟流行毒株发生了变化。 展开更多
关键词 猪瘟 兔化弱毒株 兔脾组织毒E2基因 序列分析
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聚酯纤维新产品开发现状及发展前景 被引量：7
15
作者 韩雪清 《合成纤维工业》 CAS CSCD 1999年第4期30-35,共6页
介绍了新合纤的发展历程，综述了国内外聚酯纤维新产品开发及应用现状，分析了国内新产品开发所存在的问题，提出应“一条龙”开发新产品。
关键词 聚酯纤维 产品开发 现状 趋势
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口蹄疫病毒3A基因在大肠杆菌中的高效表达 被引量：9
16
作者 薛青红 刘湘涛 +2 位作者 张彦明 韩雪清 谢庆阁 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期539-542,共4页
将口蹄疫病毒 (Foot and MouthDiseaseVirus,FMDV)的 3A基因克隆到线形化的原核表达载体pProEX HTb中 ,转化大肠杆菌BL2 1和DH5α ,经氨苄抗性筛选得到阳性克隆 ,IPTG诱导表达。SDS PAGE和Westbolt结果证实大肠杆菌菌体不可溶性蛋白中富... 将口蹄疫病毒 (Foot and MouthDiseaseVirus,FMDV)的 3A基因克隆到线形化的原核表达载体pProEX HTb中 ,转化大肠杆菌BL2 1和DH5α ,经氨苄抗性筛选得到阳性克隆 ,IPTG诱导表达。SDS PAGE和Westbolt结果证实大肠杆菌菌体不可溶性蛋白中富含 3A蛋白 ,说明3A蛋白在表达产物中以包涵体的形式存在 ,所表达的蛋白含量占菌体蛋白的 2 9 2 %。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 3A基因 大肠杆菌 高效表达
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猪瘟病毒流行毒株E2基因密码子优化及在酵母中的高效表达 被引量：13
17
作者 韩雪清 刘湘涛 +2 位作者 张永国 张涌 谢庆阁 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期560-568,共9页
密码子的偏嗜性是影响基因异源表达的重要参数之一 ,优化密码子序列能够提高外源基因的表达水平。野生型猪瘟病毒E2基因在毕赤酵母中的表达量较低 ,为了提高E2基因在毕赤酵母中的表达水平 ,利用PCR基础上的定点突变技术将E2基因上的毕... 密码子的偏嗜性是影响基因异源表达的重要参数之一 ,优化密码子序列能够提高外源基因的表达水平。野生型猪瘟病毒E2基因在毕赤酵母中的表达量较低 ,为了提高E2基因在毕赤酵母中的表达水平 ,利用PCR基础上的定点突变技术将E2基因上的毕赤酵母低利用密码子突变为其高利用率的简并密码子。结果表明 ,替换野生型E2基因上 2 4个酵母低利用密码子后 ,E2基因在酵母中表达水平有较显著提高 。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2基因 密码子优化 酵母中 表达
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猪瘟病毒E2基因抗原结构域A、B、C、D区在大肠杆菌中的表达 被引量：9
18
作者 张永国 刘湘涛 +3 位作者 韩雪清 胡建和 张彦明 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期182-185,共4页
采用PCR技术扩增出猪瘟病毒E2基因抗原结构域A、B、C、D区并克隆于PGEM Teasy载体上,测序结果表明插入的为猪瘟病毒E2基因抗原结构域,切出目的基因,将目的基因克隆到表达质粒pProEX HTb中,获得重组质粒经PCR、酶切和序列分析鉴定E2基因... 采用PCR技术扩增出猪瘟病毒E2基因抗原结构域A、B、C、D区并克隆于PGEM Teasy载体上,测序结果表明插入的为猪瘟病毒E2基因抗原结构域,切出目的基因,将目的基因克隆到表达质粒pProEX HTb中,获得重组质粒经PCR、酶切和序列分析鉴定E2基因抗原结构域插入的位置、大小和读码框均正确,SDS PAGE检测表明受体菌经IPTG诱导后能表达E2基因抗原结构域蛋白,Westernblot检测表明受体菌诱导表达E2基因抗原结构域蛋白可与猪瘟阳性血清发生特异性反应。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2基因抗原结构域 A区 B区 C区 D区 大肠杆菌 基因表达
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兔出血症病毒与欧洲野兔综合征病毒复合RT-PCR检测方法的建立 被引量：13
19
作者 王印 杨泽晓 +3 位作者 韩雪清 汪开毓 姚学萍 白瑜 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1165-1170,共6页
为建立用于兔出血症病毒(RHDV)和欧洲野兔综合征病毒(EBHSV)诊断鉴别的快速检测方法,根据GenBank中的RHDV和EBHSV基因组序列,设计合成5条特异性引物和9条重叠延伸引物,分别以通过重叠延伸PCR人工合成的EBHSV VP60基因中359bp基因片段构... 为建立用于兔出血症病毒(RHDV)和欧洲野兔综合征病毒(EBHSV)诊断鉴别的快速检测方法,根据GenBank中的RHDV和EBHSV基因组序列,设计合成5条特异性引物和9条重叠延伸引物,分别以通过重叠延伸PCR人工合成的EBHSV VP60基因中359bp基因片段构建的重组质粒pGM-T-EBHSV和RHDV RT-PCR产物构建的pGM-T-RHDV为模板,经过反应条件的优化、敏感性试验和特异性试验,初步建立了RHDV和EBHSV的复合RT-PCR检测方法,并对20份临床样品和5份RHDV人工感染样品进行了检测。结果表明,建立的复合RT-PCR方法具有良好的特异性和敏感性,可分别扩增出RHDV和EBHSV的特异性目的片段192bp和335bp,对2种病毒的检测限度均可达到50copies的目的基因片段,兔巴氏杆菌、兔大肠杆菌和沙门氏菌核酸扩增均为阴性。样品检测结果显示,5份人工感染样品的RHDV检出率为100%,20份临床样品的RHDV检测为阴性。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 欧洲野兔综合征病毒 反转录-聚合酶链反应 重叠延伸PCR
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猪囊尾蚴磷蛋白在毕赤酵母中的表达及初步应用 被引量：11
20
作者 苏彩霞 才学鹏 +3 位作者 韩雪清 骆学农 郑亚东 窦永喜 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期424-427,共4页
将猪囊虫磷蛋白P2基因克隆到毕赤酵母表达系统分泌性表达载体pPIC9K中 ,构建了重组表达载体pPIC9K P2。经测序证明基因序列完全正确 ,从而大量制备重组质粒pPIC9K P2 ,并用SalⅠ、BglⅡ两种内切酶分别线性化 ,然后分别电转化毕赤酵母菌... 将猪囊虫磷蛋白P2基因克隆到毕赤酵母表达系统分泌性表达载体pPIC9K中 ,构建了重组表达载体pPIC9K P2。经测序证明基因序列完全正确 ,从而大量制备重组质粒pPIC9K P2 ,并用SalⅠ、BglⅡ两种内切酶分别线性化 ,然后分别电转化毕赤酵母菌种GS115 ,采用G418抗性梯度筛选得到高拷贝重组菌株 ,利用MM和MD培养基鉴定重组菌株Mut表型 ,然后用甲醇进行诱导表达 ;并对表达产物通过SDS PAGE、Western blot和ELISA分析 ,结果表明 ,重组菌株成功地分泌表达了分子量大小为 12 6kD ,表达量占分泌总蛋白的 3 3 % ,且具有免疫反应活性的重组磷蛋白 。 展开更多
关键词 猪囊尾蚴磷蛋白 毕赤酵母 表达 囊虫病
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