富血小板血浆复合再生支架修复兔骨软骨缺损 被引量：9

1

作者 綦惠 靳少锋 +4 位作者 陈磊 景金珠 王猛 黎广平 孙磊 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期740-745,共6页

[目的]观察富血小板血浆(PRP)复合支架修复新西兰兔膝关节骨软骨缺损的效果。[方法]抽取成年新西兰兔静脉血,两次离心后获取PRP。采用10%Ca Cl2激活其中的血小板,ELISA法检测激活前后TGF-β的浓度。成年新西兰兔在股骨内髁软骨面上制备... [目的]观察富血小板血浆(PRP)复合支架修复新西兰兔膝关节骨软骨缺损的效果。[方法]抽取成年新西兰兔静脉血,两次离心后获取PRP。采用10%Ca Cl2激活其中的血小板,ELISA法检测激活前后TGF-β的浓度。成年新西兰兔在股骨内髁软骨面上制备骨软骨缺损模型。按缺损置入处理,将动物分为三组,分别是空白对照组、单纯支架组和PRP-支架组。术后6、12周取材,进行大体观察和国际软骨修复协会(ICRS)大体形态评分,此外,采用HE染色和番红O-固绿染色进行组织观察评估。[结果]PRP激活后TGF-β的浓度显著高于未激活时(P<0.05)。术后6周,单纯支架组与PRP-支架组的ICRS评分显著高于空白对照组(P<0.05);术后12周,单纯支架组与PRP-支架组的ICRS评分仍显著高于空白对照组(P<0.05),且PRP-支架组的评分显著高于单纯支架组(P<0.05)。HE染色与番红O-固绿染色表明,单纯支架组和PRP-支架组的修复明显优于空白对照组,且PRP-支架组的修复较单纯支架组更优。[结论]单纯支架能够促进兔膝关节骨软骨缺损的修复,但修复效果有限。激活后的PRP能够明显提高支架的作用,PRP-支架是此动物实验中最佳的骨软骨修复方式。 展开更多

关键词 骨软骨缺损 富血小板血浆 支架

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复合胶原海绵材料的体内外止血效果 被引量：7

2

作者 靳少锋 綦惠 +4 位作者 舒雄 杰永生 郑蕊 陈磊 孙磊 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2018年第2期216-221,共6页

背景:胶原材料具有良好的止血效果,但是单一胶原止血材料的吸水能力有限,血液浓缩效果不佳,所以止血效率并不理想。目的:观察复合胶原海绵止血材料的体内外止血效果。方法:以胶原、透明质酸和氯化钙为原料、碳化二酰亚胺为交联剂,制备... 背景:胶原材料具有良好的止血效果,但是单一胶原止血材料的吸水能力有限,血液浓缩效果不佳,所以止血效率并不理想。目的:观察复合胶原海绵止血材料的体内外止血效果。方法:以胶原、透明质酸和氯化钙为原料、碳化二酰亚胺为交联剂,制备复合胶原海绵止血材料。(1)细胞毒性实验:分别以复合胶原海绵止血材料浸提液、苯酚溶液及细胞培养液培养L929小鼠成纤维细胞,培养第2,4,7天,MTT法检测细胞增殖,判定材料毒性;(2)材料与全血的关系:将兔抗凝血分别滴于复合胶原海绵止血材料、进口止血材料及国产止血材料表面,扫描电镜观察材料与全血的关系;(3)体外凝血活性:将兔抗凝血分别滴于复合胶原海绵止血材料、进口止血材料及国产止血材料表面,采用凝血指数检测凝血效果;(4)体内止血效果:钻透18只兔肝叶,随机分3组,分别以复合胶原海绵止血材料、进口止血材料及国产止血材料止血,检测出血时间及出血量。结果与结论:(1)复合胶原海绵材料的细胞毒性为1级,合格;(2)与进口和国产止血材料相比较,复合胶原海绵止血材料既有利于血液中水分继续向纵深吸收又能同时网络血红蛋白、血小板等形成凝血块,还可看到孔隙交替向内部延伸,形成交替复杂的海绵状;(3)复合胶原海绵止血材料的凝血指数显著低于进口、国产止血材料(P<0.05);(4)复合胶原海绵止血材料组的出血时间及出血量明显低于进口止血材料组、国产止血材料组(P<0.05);(5)结果表明,复合胶原海绵止血材料具有的良好止血效果及生物相容性。 展开更多

关键词 透明质酸 胶原 止血 组织工程

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脂肪干细胞复合真皮脱细胞基质修复兔关节软骨缺损的实验研究 被引量：7

3

作者 舒雄 郑蕊 +4 位作者 杰永生 陈磊 靳少锋 綦惠 孙磊 《中国医药生物技术》 2017年第2期143-148,共6页

目的探讨脂肪间充质干细胞(ADSCs)复合小牛真皮脱细胞基质(ADM)参与修复兔膝关节软骨缺损的可行性。方法取自体新西兰兔的脂肪组织,采用酶消化分离培养ADSCs并传代,倒置相差显微镜观察细胞形态,FACS检测细胞表面特异性表达以鉴定细胞,... 目的探讨脂肪间充质干细胞(ADSCs)复合小牛真皮脱细胞基质(ADM)参与修复兔膝关节软骨缺损的可行性。方法取自体新西兰兔的脂肪组织,采用酶消化分离培养ADSCs并传代,倒置相差显微镜观察细胞形态,FACS检测细胞表面特异性表达以鉴定细胞,行成脂和成骨诱导鉴定。小牛真皮通过脱细胞、交联和冻干制备小牛ADM,ADSCs达到一定数量后接种于ADM得到细胞支架复合物。24只新西兰大白兔随机分A、B、C共三组,A组关节软骨缺损处外科缝合细胞支架复合物,B组软骨缺损处外科缝合ADM,C组软骨缺损不做任何处理。分别于术后第12周处死动物,修复处行大体、组织学检测。结果成功分离鉴定新西兰兔的脂肪干细胞。经重塑后真皮脱细胞基质支架材料表面光滑、孔隙均匀。ADSCs与ADM复合后,缺损处类软骨组织填充,修复区表面光滑;Ⅱ型胶原免疫组化显示,复合支架已被吸收,再生的软骨是阳性。结论新型小牛ADM支架材料与ADSCs生物相容性好,ADSCs与ADM复合向软骨诱导后可良好地修复关节软骨缺损,具有替代正常软骨的潜力。 展开更多

关键词 脂肪干细胞 真皮脱细胞基质 支架 关节软骨 组织工程

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脱细胞真皮基质/生物矿化胶原一体化骨软骨支架的制备及其生物相容性的研究 被引量：4

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作者 郑蕊 杰永生 +4 位作者 陈磊 靳少锋 綦惠 孙磊 舒雄 《中国医药生物技术》 2019年第2期121-126,共6页

目的成功制备脱细胞真皮基质/生物矿化胶原一体化骨软骨支架,并进行理化性质、生物力学与生物相容性评估,为骨软骨缺损修复提供理论依据。方法以物理和化学方法制备牛源脱细胞真皮基质,利用磷酸三钙和胶原,按照不同比例混合,利用自组装... 目的成功制备脱细胞真皮基质/生物矿化胶原一体化骨软骨支架,并进行理化性质、生物力学与生物相容性评估,为骨软骨缺损修复提供理论依据。方法以物理和化学方法制备牛源脱细胞真皮基质,利用磷酸三钙和胶原,按照不同比例混合,利用自组装和冻干技术,制备以脱细胞真皮基质支架为软骨层,生物矿化胶原为骨层的骨软骨一体化双相支架。通过大体观察、扫描电镜观察、生物力学等检测,对骨软骨一体化支架进行理化性质和力学性能评价。原代培养小鼠软骨细胞和成骨细胞,并分别种植在脱细胞真皮基质和生物矿化胶原双相支架上,利用细胞毒、死/活细胞染色和增殖实验等观察细胞生长情况,测定骨软骨一体化支架的生物相容性。结果大体观察表明支架各层间结合紧密,未出现明显不连续和相互分离。扫描电镜各层内的孔隙结构相互连通且均具有立体多维性,其中脱细胞真皮基质、生物矿化胶原和双相支架的孔径分别为(121.6±8.65)、(98.40±5.56)和(103.2±3.94)μm。同时三组支架的压缩模量分别为(41.05±11.69)、(108.0±12.71)和(84.98±8.51)k Pa,弹性模量分别为(17.24±3.93)、(28.98±3.31)和(21.74±2.92)k Pa。MTT法表明骨软骨一体化支架无细胞毒性。荧光显微镜观察显示,纵切的支架薄片上细胞生长分布均匀,表明支架生物相容性较好,CCK8实验表明支架可以维持良好的细胞活性。结论脱细胞真皮基质/生物矿化胶原骨双相支架中上下层间的理化性能展示了骨软骨组织结构和力学方面的双重仿生,为动物体内实验奠定了基础,有望成为治疗骨软骨缺损修复的一种新手段。 展开更多

关键词 脱细胞真皮基质 生物矿化胶原 双相支架 骨软骨

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离心重力诱导脂肪间充质干细胞向软骨样细胞分化 被引量：2

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作者 舒雄 杰永生 +4 位作者 郑蕊 陈磊 靳少锋 綦惠 孙磊 《中国医药生物技术》 2018年第1期13-18,共6页

目的探讨离心重力对人脂肪来源间充质干细胞(hADSCs)向软骨样细胞分化以及对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法通过加载不同离心力(0、500、1000、2000、2500、3000×g)和持续时间(0、15、30、45、60 min)刺激脂肪干细胞分化为软... 目的探讨离心重力对人脂肪来源间充质干细胞(hADSCs)向软骨样细胞分化以及对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法通过加载不同离心力(0、500、1000、2000、2500、3000×g)和持续时间(0、15、30、45、60 min)刺激脂肪干细胞分化为软骨样细胞,并利用荧光定量PCR和Western blot检测Sox 9基因的上调表达来筛选条件,将培养的P3代h ADSCs分3组,对照组(不干预处理)、离心重力组和TGF-β3组(加入TGF-β3成软骨诱导剂),持续培养21 d后,通过阿利辛蓝和苏木精-伊红染色进行软骨分化鉴定,DMMB法测定胞外基质中GAG含量,荧光定量PCR测定Ⅱ型胶原基因表达,Western blot进一步检测对照组和离心重力组中Sox 9、β-catenin、GSK3β和p-GSK3β蛋白的表达。结果加载最适的离心重力(2500×g,30 min)刺激h ADSCs后,培养24 h,Sox 9的m RNA和蛋白表达显著上调。阿利辛蓝和苏木精-伊红染色显示,离心重力组和TGF-β3组中软骨表达呈阳性。GAG实验结果显示,TGF-β3组促GAG分泌的能力优于离心重力组(P<0.05),荧光定量PCR结果表明TGF-β3组其Ⅱ型胶原mRNA表达的能力高于离心重力组(P<0.05),Western blot结果显示,相比对照组,离心重力组中β-catenin和p-GSK3β的蛋白表达水平降低,而GSK3β和Sox 9蛋白表达升高。结论离心重力和TGF-β3诱导脂肪干细胞成软骨分化中的表达具有相似的能力,离心重力对h ADSCs诱导成软骨作用与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。 展开更多

关键词 人脂肪干细胞 超重力 SOX 9转录因子类 软骨分化

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HSP90β干扰和过表达慢病毒载体的构建及其在骨肉瘤细胞Saos-2中的表达 被引量：1

6

作者 舒雄 刘辉琦 +5 位作者 杰永生 郑蕊 綦惠 陈磊 靳少锋 冉宇靓 《现代肿瘤医学》 CAS 2020年第7期1057-1062,共6页

目的:获得热休克蛋白90β(HSP90β)基因干扰和过表达慢病毒表达系统,并检测其在人骨肉瘤细胞株Saos-2中的表达水平。方法:设计合成shRNA,以慢病毒表达质粒构建HSP90β干扰和过表达载体,酶切电泳、测序技术鉴定载体构建是否成功。重组病... 目的:获得热休克蛋白90β(HSP90β)基因干扰和过表达慢病毒表达系统,并检测其在人骨肉瘤细胞株Saos-2中的表达水平。方法:设计合成shRNA,以慢病毒表达质粒构建HSP90β干扰和过表达载体,酶切电泳、测序技术鉴定载体构建是否成功。重组病毒转染H1299细胞,以嘌呤霉素筛选稳定转染的Saos-2细胞,通过荧光显微镜观察计数获得转染效率。将感染好的细胞分为干扰NC组(NEG-shRNA)、干扰组(shRNA-HSP90β)、过表达NC对照组(NEG-pEZ)及过表达组(pEZ-HSP90β)。通过qRT-PCR与Western blotting分别从mRNA和蛋白表达水平验证目的基因的干扰和过表达水平。结果:插入慢病毒表达载体的基因片段与目的基因的碱基序列完全一致。病毒包装成功后,嘌呤霉素最小致死浓度1μg/ml,感染复数200,感染人Saos-2的感染效率达80%,其中shRNA-HSP90β组干扰效率为86.35%,pEZ-HSP90β组的mRNA相对表达量增加2. 8倍。进一步研究发现,shRNA-HSP90β组较NEG-shRNA组中HSP90β蛋白表达明显降低,p EZ-HSP90β组较NEG-p EZ组HSP90β蛋白表达增加。结论:HSP90β基因干扰和过表达慢病毒载体构建成功,并能够在Saos-2中稳定表达。 展开更多

关键词 骨肉瘤细胞 HSP90β 慢病毒载体 RNA干扰 过表达

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慢病毒介导的干扰及过表达HSP90β对人骨肉瘤细胞系MG-63侵袭的影响 被引量：1

7

作者 刘辉琦 杰永生 +4 位作者 郑蕊 綦惠 陈磊 靳少锋 舒雄 《中国高原医学与生物学杂志》 2021年第3期151-158,共8页

目的通过慢病毒介导的干扰及过表达探讨HSP90β对人骨肉瘤细胞系MG-63侵袭的影响。方法使用慢病毒构建干扰、过表达HSP90β的质粒,通过琼脂糖电泳、测序法鉴定构建慢病毒质粒转染H1299细胞使用嘌呤霉素对MG-63转染细胞进行筛选,计算转... 目的通过慢病毒介导的干扰及过表达探讨HSP90β对人骨肉瘤细胞系MG-63侵袭的影响。方法使用慢病毒构建干扰、过表达HSP90β的质粒,通过琼脂糖电泳、测序法鉴定构建慢病毒质粒转染H1299细胞使用嘌呤霉素对MG-63转染细胞进行筛选,计算转染效率实验分干扰对照组(negative control-shRNA)、HSP90p干扰组(HSP90β-shRNA)、过表达对照组(negative control-pEZ)及HSP90β过表达组(HSP90β-pEZ)。以实时荧光定量PCR、Western-blot法检测mRNA和蛋白表达水平。用Transwell小室法检测MG-63侵袭能力。结果插入片段与目的基因序列一致。嘌呤霉素MG-63细胞株最小致死浓度为3 pg/mL,感染复数(multiplicity of m-fection,MOI)为200,感染效率为80%。HSP90β干扰效率为81.15%,过表达组HSP90βmRNA及蛋白相对表达增加(P<0.01)。干扰组HSP90βmRNA及蛋白的相对表达量下降(P<0.01)。与亲本细胞相比,shRNA-HSP90β组MG-63细胞的侵袭能力下降(P<0.01),而pEZ-HSP90β组MG-63细胞侵袭能力增强(P<0.05)。shRNA-HSP90β组的MMP2、Snail表达减少,E-cadherin表达增加,而PEZ-HSP90β组的MMP2、Snail表达增加,E-cadherin表达减少。结论干扰及过表达HSP90β的人骨肉瘤细胞系MG-63构建成功,并稳定表达;HSP90β可通过抑制E-cadherin表达增加MMP2、Snail表达,增强骨肉瘤细胞MG-63的侵袭性。 展开更多

关键词 MG-63 HSP90β RNA干扰 过表达 侵袭

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激活的富血小板血浆促进Pellet培养的脂肪间充质干细胞成软骨样分化 被引量：1

8

作者 舒雄 杰永生 +4 位作者 郑蕊 陈磊 靳少锋 綦惠 孙磊 《中国医药生物技术》 2018年第4期328-334,共7页

目的探讨激活的富血小板血浆(PRP)对Pellet培养的人脂肪来源间充质干细胞向软骨样细胞分化及相关信号通路的影响。方法添加不同比例(5%、10%和15%)的激活PRP,检测不同培养时间(1、3、5、7、9、11 d)脂肪干细胞的增殖能力。将采用Pellet... 目的探讨激活的富血小板血浆(PRP)对Pellet培养的人脂肪来源间充质干细胞向软骨样细胞分化及相关信号通路的影响。方法添加不同比例(5%、10%和15%)的激活PRP,检测不同培养时间(1、3、5、7、9、11 d)脂肪干细胞的增殖能力。将采用Pellet培养的P3代的h ADSCs分为3组,对照组、激活PRP组和含TGF-β3的软骨诱导组,持续培养21 d后,阿利新蓝和苏木精-伊红染色进行软骨分化鉴定,real-time PCR测定Sox-9、Aggrecan和II型胶原的基因表达,DMMB法测定胞外基质中GAG含量,Western blot进一步检测对照组和激活PRP组中Sox-9、Gli-1和BMP-2蛋白的表达。结果 MTT实验结果显示,在10%激活PRP培养条件下,11 d的生长时间内hADSCs的增殖率最适宜。阿利新蓝和苏木精-伊红染色显示,激活PRP组和软骨诱导组中软骨表达呈阳性。Real-time PCR结果表明软骨诱导组其Sox-9、Aggrecan和II型胶原mRNA表达的能力高于激活PRP组(P<0.05)。GAG实验结果显示,软骨诱导组促GAG分泌的能力优于激活PRP组(P<0.05)。Western blot结果显示,相比对照组,激活PRP组中伴随Gli-1和BMP-2的蛋白表达升高,而Sox-9蛋白表达随之升高。结论激活PRP刺激hADSCs的最适增殖能力的浓度比例为10%。激活PRP和软骨诱导剂对脂肪干细胞成软骨分化中的诱导表达具有相似的能力,激活PRP对h ADSCs诱导成软骨作用与Hedgehog和BMP信号通路有关。 展开更多

关键词 富血小板血浆 脂肪干细胞 Pellet培养 软骨分化

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拖厂4所幼儿园2318名儿童生长发育与营养状况调查 被引量：1

9

作者 靳少锋 吕惠萍 《中国误诊学杂志》 CAS 2007年第10期2416-2417,共2页

关键词 身高 体重 营养状况 儿童营养

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脂肪间充干细胞复合骨软骨一体化支架修复兔骨软骨缺损的实验研究

10

作者 杰永生 郑蕊 +4 位作者 陈磊 靳少锋 孙磊 舒雄 綦惠 《中国医药生物技术》 2020年第5期469-474,共6页

目的探讨脂肪间充质干细胞复合骨软骨一体化支架修复兔骨软骨缺损的效果及其临床应用的可能性和优势。方法成年新西兰大白兔构建骨软骨缺损动物模型。A组为空白对照组,仅做缺损手术;B组为骨软骨一体化支架组,植入不含细胞的支架;C组为... 目的探讨脂肪间充质干细胞复合骨软骨一体化支架修复兔骨软骨缺损的效果及其临床应用的可能性和优势。方法成年新西兰大白兔构建骨软骨缺损动物模型。A组为空白对照组,仅做缺损手术;B组为骨软骨一体化支架组,植入不含细胞的支架;C组为负载脂肪间充质干细胞的骨软骨一体化支架组。术后6、12周取材,进行大体观察,根据国际软骨修复协会(ICRS)组织学评分标准评分,HE染色和番红O-固绿染色进行组织学评估。结果术后6周,一体化支架组与ADSCs复合一体化支架组的ICRS评分显著高于空白对照组(P<0.05);术后12周,一体化支架组与ADSCs复合支架组的ICRS评分仍显著高于空白对照组(P<0.05),且ADSCs复合一体化支架组的评分显著高于一体化支架组(P<0.05)。HE染色、甲苯胺蓝与番红O-固绿染色表明,一体化支架组和ADSCs复合一体化支架组的修复明显优于空白对照组,且ADSCs复合一体化支架组的修复较一体化支架组更优。结论骨软骨一体化支架能够促进兔膝关节骨软骨缺损的修复,但修复效果有限。ADSCs能够明显提高支架的作用,ADSCs复合一体化支架是此次动物实验中最佳的骨软骨修复方式。 展开更多

关键词 骨软骨 一体化支架 脂肪间充质干细胞 软骨分化

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真皮脱细胞基质复合骨髓间充质干细胞修复比格犬关节软骨缺损

11

作者 靳少锋 郑蕊 +4 位作者 杰永生 陈磊 綦惠 孙磊 舒雄 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2020年第4期532-537,共6页

背景:真皮来源细胞外基质作为软骨修复支架为软骨组织的生长提供空间支持,同时促进细胞黏附和增殖,骨髓间充质干细胞具有向软骨细胞诱导分化的作用,两者单独应用均有不足。目的:探索比格犬骨髓间充质干细胞复合小牛真皮脱细胞基质修复... 背景:真皮来源细胞外基质作为软骨修复支架为软骨组织的生长提供空间支持,同时促进细胞黏附和增殖,骨髓间充质干细胞具有向软骨细胞诱导分化的作用,两者单独应用均有不足。目的:探索比格犬骨髓间充质干细胞复合小牛真皮脱细胞基质修复比格犬膝关节软骨缺损的可行性。方法:抽取比格犬骨髓血,采用密度梯度离心法获取骨髓间充质干细胞并传代。取新生小牛背部真皮组织,通过物理和化学方法脱除细胞成分,制备真皮脱细胞基质。真皮脱细胞基质表面缓慢滴加0.2 mL细胞悬浮液至完全覆盖支架,放在37℃、体积分数为5%CO2培养箱中静置48h备用。选取12只成年比格犬构建膝关节软骨缺损动物模型,随机分为3组:支架复合骨髓间充质干细胞组软骨缺损处缝合真皮脱细胞基质复合自体骨髓间充质干细胞;单纯支架组软骨缺损处缝合真皮脱细胞基质;模型对照组不进行处理。术后12周获取比格犬右膝关节组织,进行体视显微镜观察、苏木精-伊红染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色。结果与结论:(1)扫描电镜显示骨髓间充质干细胞在脱细胞基质中黏附和生长良好;(2)苏木精-伊红染色显示,支架复合骨髓间充质干细胞组修复平面略低于周边正常组织,修复组织与周围软骨整合很好,单纯支架组软骨缺损处为纤维组织填充,模型对照组缺损周边仅有少量修复;(3)Ⅱ型胶原免疫组化染色显示,支架复合骨髓间充质干细胞组软骨缺损处为类软骨组织填充,单纯支架组软骨缺损处为纤维组织填充,模型对照组软骨缺损处无修复组织填充;(4)结果表明,新型小牛真皮脱细胞基质具有良好的生物相容性,可以促进骨髓间充质干细胞增殖,自体骨髓间充质干细胞与真皮脱细胞基质复合物可有效修复比格犬膝关节软骨缺损。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 真皮脱细胞基质 膝关节软骨缺损 软骨修复 类软骨组织 细胞黏附 细胞增殖

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