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平菇多糖中蛋白质脱除方法的比较 被引量：9
1
作者 王新嘉 雷国风 +1 位作者 翟志军 吴晓玉 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2017年第5期111-118,共8页
本试验以蛋白质脱除率、多糖保留率以及两因素的综合指标为评价指标,采用Sevage法、盐酸-乙醇等电点法和TCA法,分析比较其对平菇多糖脱蛋白效果的影响。试验结果表明,平菇多糖中蛋白质脱除率最高的为Sevage法,其次为TCA法;而多糖保留率... 本试验以蛋白质脱除率、多糖保留率以及两因素的综合指标为评价指标,采用Sevage法、盐酸-乙醇等电点法和TCA法,分析比较其对平菇多糖脱蛋白效果的影响。试验结果表明,平菇多糖中蛋白质脱除率最高的为Sevage法,其次为TCA法;而多糖保留率最高的为盐酸-乙醇等电点法,其次为TCA。综合考虑两因素的影响,以TCA法效果最好。利用Box-Behnken试验设计,获得TCA法脱蛋白工艺的回归方程,再经响应面分析,得出脱蛋白最佳方案,即:TCA浓度5.6%,处理时间33 min,处理温度48℃,此时其综合评价平均值为83.96%,蛋白质脱除率为89.5%,多糖保留率为78.4%。 展开更多
关键词 平菇 多糖 脱蛋白 响应面分析
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鱼腥藻PCC7120中琥珀酸半醛脱氢酶的初步表征及结构分析 被引量：2
2
作者 王小琴 李至敏 +2 位作者 雷国风 汤亚兰 李志敏 《生命科学研究》 CAS CSCD 2017年第4期318-324,共7页
蓝藻琥珀酸半醛脱氢酶催化琥珀酸半醛到琥珀酸的转化,使得蓝藻的三羧酸循环变得完整。BLAST序列分析预测鱼腥藻PCC7120中all3556基因编码琥珀酸半醛脱氢酶。为了证实all3556基因编码蛋白的催化功能,构建了p ET28a-all3556表达质粒,并在... 蓝藻琥珀酸半醛脱氢酶催化琥珀酸半醛到琥珀酸的转化,使得蓝藻的三羧酸循环变得完整。BLAST序列分析预测鱼腥藻PCC7120中all3556基因编码琥珀酸半醛脱氢酶。为了证实all3556基因编码蛋白的催化功能,构建了p ET28a-all3556表达质粒,并在大肠杆菌BL21(DE3)菌体中进行重组蛋白诱导表达;利用镍亲和层析方法对all3556蛋白进行了分离纯化。酶动力学测试表明all3556蛋白是一个NADP+-依赖型的琥珀酸半醛脱氢酶。生物信息学分析发现all3556蛋白和其他来源的琥珀酸半醛脱氢酶的氨基酸序列具有一定的同源性,在催化中心的氨基酸残基高度保守。 展开更多
关键词 鱼腥藻PCC7120 琥珀酸半醛脱氢酶(SSADH) 重组表达 蛋白质纯化及表征 结构分析
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柑橘果实采后绿霉病防治研究进展 被引量：2
3
作者 雷国风 李至敏 +1 位作者 王小琴 李志敏 《江苏农业科学》 2018年第21期27-30,共4页
柑橘类水果的采后病害在贮藏和运输期间会造成相当大的损失。绿霉病是柑橘类水果主要的采后疾病。综述植物源提取物、微生物保鲜剂、天然化合物、食品添加剂、公认安全化合物等物质在柑橘果实采后绿霉病防治中的应用情况。2种或多种方... 柑橘类水果的采后病害在贮藏和运输期间会造成相当大的损失。绿霉病是柑橘类水果主要的采后疾病。综述植物源提取物、微生物保鲜剂、天然化合物、食品添加剂、公认安全化合物等物质在柑橘果实采后绿霉病防治中的应用情况。2种或多种方法的联合使用将是柑橘绿霉病防治的发展方向之一。 展开更多
关键词 柑橘 指状青霉 植物源提取物 天然化合物 食品添加剂 拮抗菌
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蓝杆藻ATCC 51142中α-酮戊二酸脱羧酶的克隆与表达 被引量：1
4
作者 谢琮琮 许文武 +5 位作者 李至敏 王小琴 雷国风 张伟 黄婷 李志敏 《江苏农业科学》 2018年第19期37-39,共3页
α-酮戊二酸脱羧酶催化α-酮戊二酸的非氧化脱羧生成琥珀酸半醛,其在琥珀酸半醛脱氢酶的作用下转化为琥珀酸,蓝藻的三羧酸循环由于这2个酶的存在而变得完整。Blast序列分析发现,蓝杆藻ATCC 51142中cce4227基因编码α-酮戊二酸脱羧酶。... α-酮戊二酸脱羧酶催化α-酮戊二酸的非氧化脱羧生成琥珀酸半醛,其在琥珀酸半醛脱氢酶的作用下转化为琥珀酸,蓝藻的三羧酸循环由于这2个酶的存在而变得完整。Blast序列分析发现,蓝杆藻ATCC 51142中cce4227基因编码α-酮戊二酸脱羧酶。为了证实cce4227基因编码蛋白的催化功能,从蓝杆藻ATCC 51142基因组中克隆cce4227基因,然后构建pET28a-cce4227表达质粒。将该质粒与p Tf16分子伴侣质粒共转化BL21(DE3)大肠杆菌感受态细胞后进行重组蛋白的诱导表达。利用镍亲和层析方法对cce4227蛋白进行分离纯化,得到纯度> 95%的cce4227蛋白,菌体蛋白收率约为12 mg/g。酶动力学测试表明,cce4227蛋白是1个焦磷酸硫胺素(TPP)依赖型的α-酮戊二酸脱羧酶。 展开更多
关键词 蓝杆藻ATCC51142 α-酮戊二酸脱羧酶 基因克隆 重组表达 蛋白质纯化
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鱼腥藻PCC 7120中all3556蛋白的表达与纯化 被引量：1
5
作者 王小琴 李至敏 +1 位作者 雷国风 李志敏 《江西农业学报》 CAS 2017年第5期1-4,共4页
琥珀酸半醛脱氢酶在生物体中发挥重要的生理功能。通过BLAST序列分析,发现鱼腥藻PCC 7120中all3556基因编码琥珀酸半醛脱氢酶。实验通过常规PCR从鱼腥藻PCC 7120基因组中克隆了all3556基因,将该基因构建到p ET-28a载体上并在大肠杆菌BL2... 琥珀酸半醛脱氢酶在生物体中发挥重要的生理功能。通过BLAST序列分析,发现鱼腥藻PCC 7120中all3556基因编码琥珀酸半醛脱氢酶。实验通过常规PCR从鱼腥藻PCC 7120基因组中克隆了all3556基因,将该基因构建到p ET-28a载体上并在大肠杆菌BL21(DE3)菌体中表达。经过SDS-PAGE电泳,结果表明:all3556蛋白可以在该表达体系中高效可溶性表达。利用镍亲和层析纯化方法得到了纯度大于95%的all3556蛋白,蛋白收率约为27 mg/g菌体。研究为进一步阐明all3556蛋白的催化功能及机制奠定了重要基础。 展开更多
关键词 鱼腥藻PCC 7120 all3556蛋白 蛋白表达与纯化
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蓝杆藻ATCC51142中琥珀酸半醛脱氢酶的原核表达及生化表征
6
作者 谢琮琮 李至敏 +3 位作者 王小琴 雷国风 张伟 李志敏 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期2933-2943,共11页
【背景】蓝藻中生成琥珀酸的三羧酸循环途径与其他物种不同。由于α-酮戊二酸脱羧酶和琥珀酸半醛脱氢酶的存在使得蓝藻的三羧酸循环途径变得完整。琥珀酸半醛脱氢酶催化琥珀酸半醛氧化为琥珀酸,在蓝藻中广泛存在。【目的】克隆、表达和... 【背景】蓝藻中生成琥珀酸的三羧酸循环途径与其他物种不同。由于α-酮戊二酸脱羧酶和琥珀酸半醛脱氢酶的存在使得蓝藻的三羧酸循环途径变得完整。琥珀酸半醛脱氢酶催化琥珀酸半醛氧化为琥珀酸,在蓝藻中广泛存在。【目的】克隆、表达和纯化蓝杆藻ATCC51142中cce4228基因编码蛋白,并对其进行生化表征。【方法】以蓝杆藻ATCC51142基因组为模板克隆得到cce4228基因,将其插入到原核表达载体pET-28a上,在大肠杆菌BL21(DE3)细胞中进行异源表达,利用Ni-NTA树脂纯化cce4228蛋白。运用紫外分光光度法和生物信息学方法表征重组cce4228蛋白生化特性。【结果】构建了pET-28a-cce4228重组表达质粒,重组cce4228蛋白在大肠杆菌中得到可溶性表达,获得了纯度大于90%的cce4228蛋白。酶动力学测试和生物信息学分析结果显示,cce4228蛋白是一个NADP+-依赖型的琥珀酸半醛脱氢酶。【结论】蓝杆藻ATCC51142中cce4228基因编码一个偏好NADP+辅因子的琥珀酸半醛脱氢酶,cce4228蛋白的生化表征结果为进一步深入研究cce4228蛋白的结构功能关系及催化机制奠定了基础。 展开更多
关键词 蓝杆藻ATCC51142 琥珀酸半醛脱氢酶 原核表达 蛋白纯化及表征
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