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茉莉酸甲酯对芽期苦荞黄酮积累及相关基因表达的影响 被引量：25
1
作者 雒晓鹏 朱冬寅 +5 位作者 黄云吉 李茂菲 姚攀锋 高飞 李成磊 赵海霞 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期1040-1046,共7页
茉莉酸甲酯(Me JA)是一种新型植物内源激素,该激素可以参与植物黄酮类物质的合成代谢途径。本实验用100μmol/L茉莉酸甲酯溶液对芽期苦荞进行叶面喷施处理,于0~12 h采样。采用Al Cl3法测定处理前后苦荞的总黄酮含量,利用半定量RT-PCR检... 茉莉酸甲酯(Me JA)是一种新型植物内源激素,该激素可以参与植物黄酮类物质的合成代谢途径。本实验用100μmol/L茉莉酸甲酯溶液对芽期苦荞进行叶面喷施处理,于0~12 h采样。采用Al Cl3法测定处理前后苦荞的总黄酮含量,利用半定量RT-PCR检测苦荞黄酮代谢相关的3个Ft JAZ蛋白基因、3个Ft MYB转录因子以及6个关键酶的基因表达量,并对基因表达量与总黄酮含量进行了相关性分析。结果表明,经茉莉酸甲酯处理后,苦荞芽菜叶片总黄酮含量有所升高,各基因表达模式有所不同,其中Ft JAZ1、Ft JAZ2、Ft JAZ3、Ft MYB2以及Ft PAL基因表达量与总黄酮含量变化趋势相似,而Ft MYB3与Ft F3’H表达量与总黄酮含量变化趋势相反。相关性分析表明,总黄酮含量与Ft MYB2(相关系数为0.864)和Ft JAZ1(相关系数为0.863)显著正相关,与Ft MYB3负相关(相关系数为-0.70),与所有黄酮合成关键酶基因均成正相关。本研究为进一步揭示茉莉酸甲酯参与苦荞黄酮代谢调控的机制奠定了基础。 展开更多
关键词 茉莉酸甲酯 芽期苦荞 黄酮 基因表达
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苦荞转录因子基因FtMYB21的克隆及其非生物胁迫下的表达分析 被引量：20
2
作者 黄云吉 邓仁榆 +2 位作者 高飞 雒晓鹏 吴琦 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1939-1945,共7页
MYB转录因子是植物最大的转录因子家族之一,广泛参与植物各种生理生化过程。本研究根据苦荞花期转录组数据,筛选得到一条与拟南芥At MYB1同源性高的序列,采用RT-PCR技术克隆得到该基因,命名为Ft MYB21。生物信息分析表明,该基因编码蛋白... MYB转录因子是植物最大的转录因子家族之一,广泛参与植物各种生理生化过程。本研究根据苦荞花期转录组数据,筛选得到一条与拟南芥At MYB1同源性高的序列,采用RT-PCR技术克隆得到该基因,命名为Ft MYB21。生物信息分析表明,该基因编码蛋白含364个氨基酸,相对理论分子量40.0 k D,理论等电点p I 5.79。多重序列比对表明,其编码蛋白属于典型的R2R3型MYB转录因子。进化树分析表明,Ft MYB21蛋白与拟南芥参与抗逆的At MYB1聚为一簇。荧光定量PCR分析表明,Ft MYB21在高盐胁迫下表达量持续显著上升,72 h时达最大值,为对照组的3.35倍;在PEG干旱胁迫下该基因表达量迅速上调,6 h后趋于稳定,为对照组的1.8倍。因此,Ft MYB21基因可能参与苦荞抗高盐和干旱等非生物胁迫的应答反应,这为进一步理解苦荞的抗逆生理奠定了基础。 展开更多
关键词 苦荞 MYB转录因子 非生物胁迫 表达分析
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金荞麦花青素合酶基因的克隆及其表达与花青素量的相关性研究 被引量：16
3
作者 卜星星 雒晓鹏 +3 位作者 白悦辰 李成磊 陈惠 吴琦 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期985-989,共5页
目的获取金荞麦花青素合成途径关键酶花青素合成酶(anthocyanins synthase,ANS)基因的全长序列,并进行序列分析;对花期金荞麦ANS基因在各组织中表达水平与花青素量的相关性进行分析。方法利用同源克隆技术获得ANS基因cDNA序列;采用半定... 目的获取金荞麦花青素合成途径关键酶花青素合成酶(anthocyanins synthase,ANS)基因的全长序列,并进行序列分析;对花期金荞麦ANS基因在各组织中表达水平与花青素量的相关性进行分析。方法利用同源克隆技术获得ANS基因cDNA序列;采用半定量RT-PCR对ANS表达量进行分析;采用分光光度法测量花青素量。结果金荞麦ANS基因cDNA包含一个1 077 bp的ORF,编码358个氨基酸,命名为FdANS。生物信息学分析表明,该基因编码蛋白与其他植物ANS蛋白氨基酸序列同源率较高。FdANS在花期金荞麦不同组织中的表达量分析表明,其表达量花>叶>茎>根,花青素量为花>叶>茎>根。结论在金荞麦中首次获得ANS基因的cDNA序列,编码蛋白具有ANS同源蛋白的典型特征。FdANS基因在金荞麦根、茎、叶和花中的表达量与花青素量具有相关性。 展开更多
关键词 金荞麦 花青素合酶 基因克隆 CDNA序列 花青素
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LED光源对芽期苦荞黄酮合成的影响 被引量：16
4
作者 雒晓鹏 卜星星 +4 位作者 赵海霞 李成磊 陈惠 王安虎 吴琦 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第3期86-89,共4页
以暗黑萌发6 d的苦荞芽为材料,分别采用LED红光(630 nm)、LED白光(540 nm)、LED蓝光(460 nm)、LED紫外光(385 nm)和普通荧光(混合波长),以光周期为16 h/8 h(昼/夜)27 ℃处理芽期苦荞3 d。采用半定量反转录-聚合酶链式反应(semi-quantita... 以暗黑萌发6 d的苦荞芽为材料,分别采用LED红光(630 nm)、LED白光(540 nm)、LED蓝光(460 nm)、LED紫外光(385 nm)和普通荧光(混合波长),以光周期为16 h/8 h(昼/夜)27 ℃处理芽期苦荞3 d。采用半定量反转录-聚合酶链式反应(semi-quantitative reverse transcription and polymerase chain reaction ,RT-PCR)分析苦荞子叶和胚轴中FtPAL、Ft4CL、FtCHS、FtFLS、FtF3H和FtANS 6 个黄酮合成途径酶基因的表达量,采用AlCl3法测定不同光源处理前后的总黄酮含量,并进行相关性分析。结果表明:光源影响总黄酮在子叶中的含量大小顺序为:暗<荧光<白光<红光<蓝光<紫外光,光源影响总黄酮在胚轴中的含量大小顺序为:黑暗<荧光<红光<白光<蓝光<紫外光;子叶中总黄酮含量与FtPAL、FtCHS、FtF3H和FtANS的表达显著相关(相关系数>0.75),其中与FtPAL相关性最高(相关系数为0.921);胚轴中总黄酮含量仅与Ft4CL表达显著相关(相关系数为0.975)。因此,光质能够调节芽期苦荞黄酮的积累,可选用UV-B、LED蓝光和红光这3 种组合光通过优化光控条件增加黄酮含量。 展开更多
关键词 LED光源 苦荞 芽期 黄酮 基因表达
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苦荞R2R3-MYB转录因子调控原花青素生物合成的研究 被引量：17
5
作者 王霜 雒晓鹏 +4 位作者 姚英俊 杨静静 陈英 伍琼 吴琦 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1911-1918,共8页
基于苦荞花期转录组数据,该研究筛选并克隆获得一个黄酮代谢相关的MYB类转录因子,并命名为FtMYB 23。该基因ORF框长879 bp,编码292个氨基酸;系统进化树分析显示,FtMYB23与SG5-MYB亚家族成员聚为一簇,属于典型的R2R3-MYB型转录因子。β-... 基于苦荞花期转录组数据,该研究筛选并克隆获得一个黄酮代谢相关的MYB类转录因子,并命名为FtMYB 23。该基因ORF框长879 bp,编码292个氨基酸;系统进化树分析显示,FtMYB23与SG5-MYB亚家族成员聚为一簇,属于典型的R2R3-MYB型转录因子。β-半乳糖苷酶滤纸分析表明,其具有转录激活活性。FtMYB 23过表达转基因拟南芥株系的表型分析表明,3个阳性株系的种皮颜色均呈现出比野生型更深的褐色,其叶中原花青素含量均极显著增加(P<0.01),分别为野生型的4.68、3.5和2.8倍。qRT-PCR分析表明,转基因拟南芥中黄酮合成相关的AtCHS、AtCHI、AtF 3 H、AtF 3′H、AtFLS、AtDFR和AtBAN等基因的表达量显著升高(P<0.05),而AtTT 12的表达量极显著降低(P<0.01)。研究认为,FtMYB23作为典型的Subgroup5-MYB(SG5-MYB)激活型转录因子,通过促进黄酮合成途径早期关键酶基因的表达,从而提高原花青素的合成与积累。 展开更多
关键词 苦荞 R2R3-MYB 转录因子 原花青素
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金荞麦查尔酮异构酶的基因克隆及其花期表达与黄酮量分析 被引量：11
6
作者 雒晓鹏 白悦辰 +3 位作者 高飞 李成磊 陈惠 吴琦 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1481-1485,共5页
目的获取金荞麦总黄酮合成途径的关键酶查尔酮异构酶(chalcone isomerase,CHI)基因的全长序列,并进行序列分析;对花期金荞麦CHI基因在各组织中的表达与总黄酮量进行分析。方法利用同源克隆技术获得金荞麦查尔酮异构酶基因(FdCHI)的cDNA... 目的获取金荞麦总黄酮合成途径的关键酶查尔酮异构酶(chalcone isomerase,CHI)基因的全长序列,并进行序列分析;对花期金荞麦CHI基因在各组织中的表达与总黄酮量进行分析。方法利用同源克隆技术获得金荞麦查尔酮异构酶基因(FdCHI)的cDNA序列;采用半定量RT-PCR对CHI表达量进行分析,并采用AlCl3法测量总黄酮量。结果金荞麦FdCHI基因cDNA包含一个750 bp的ORF,编码249个氨基酸,命名为FdCHI。生物信息学分析表明该编码蛋白与其他植物CHI氨基酸序列同源率较高。FdCHI在花期金荞麦不同组织中的表达量分析表明,其表达量花>根>叶>茎,总黄酮量为花>叶>茎>根。结论在金荞麦中首次获得CHI基因的cDNA序列,编码蛋白具有CHI同源蛋白的典型特征。FdCHI基因在金荞麦茎、叶和花中的表达量与总黄酮量具有相关性,但在根中表达量与总黄酮量相关性较小。 展开更多
关键词 金荞麦 查尔酮异构酶 基因克隆 表达水平 总黄酮
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苦荞查尔酮合酶基因FtCHS1启动子的克隆及分析 被引量：8
7
作者 赵学荣 杨燕 +4 位作者 雒晓鹏 姚攀锋 王安虎 赵海霞 吴琦 《植物科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期543-550,共8页
采用染色体步移技术,从苦荞(Fagopyrum tataricum Gaertn.)中克隆获得Ft CHS1基因5'端侧翼序列,共1038 bp,将其命名为PFt CHS1。生物信息学分析表明,PFt CHS1中A/T碱基含量为63.5%,含有4个可能的转录起始位点,分别位于起始密码子上... 采用染色体步移技术,从苦荞(Fagopyrum tataricum Gaertn.)中克隆获得Ft CHS1基因5'端侧翼序列,共1038 bp,将其命名为PFt CHS1。生物信息学分析表明,PFt CHS1中A/T碱基含量为63.5%,含有4个可能的转录起始位点,分别位于起始密码子上游-684^-734、-692^-742、-920^-970、-929^-979 bp处,该序列包含TATA-Box和CAAT-Box等启动子核心元件以及与光、低温和激素应答等相关的功能元件。本研究进一步构建了PFt CHS1-p BI101植物表达载体,并瞬时转化拟南芥(Arabidopsis thaliana L.)叶片,结果显示该序列可驱动GUS报告基因的表达。低温(4℃)和光照(UV-B)处理苦荞幼芽后,采用荧光定量PCR技术分析Ft CHS1基因的表达量,结果表明PFt CHS1可响应低温和紫外环境胁迫,从而引起Ft CHS1基因表达量发生变化。 展开更多
关键词 苦荞 查尔酮合酶基因 启动子 序列分析
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滇重楼鲨烯合酶基因PpSQS的克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量：7
8
作者 高飞 雒晓鹏 +4 位作者 陶亮 李成磊 丁春邦 陈惠 吴琦 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第13期2086-2091,共6页
目的:克隆滇重楼鲨烯合酶(squalene synthase,SQS)基因(PpSQS),对该基因进行序列分析及原核表达。方法:采用同源克隆和RACE技术获得PpSQS的cDNA,并对其进行生物信息学分析;构建原核表达载体pET-30b(+)-PpSQS,在大肠杆菌Escherich coli B... 目的:克隆滇重楼鲨烯合酶(squalene synthase,SQS)基因(PpSQS),对该基因进行序列分析及原核表达。方法:采用同源克隆和RACE技术获得PpSQS的cDNA,并对其进行生物信息学分析;构建原核表达载体pET-30b(+)-PpSQS,在大肠杆菌Escherich coli BL21(DE3)中进行诱导表达。结果:PpSQS基因cDNA全长1 498 bp,包含1个1 212 bp的开放阅读框(ORF),可编码403个氨基酸;PpSQS理论标准分子质量为46.36 kDa,等电点为pI 6.83;SDS-PAGE分析表明,经1 mmol.L-1IPTG诱导后,重组PpSQS蛋白在大肠杆菌中获得表达。结论:首次获得了滇重楼PpSQS基因cDNA全长序列,该基因编码产物具有植物SQS同源蛋白的典型特征,实现重组PpSQS在大肠杆菌中的表达。 展开更多
关键词 滇重楼 鲨烯合 基因克隆 原核表达
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苦荞锌指蛋白基因FtLSD1的克隆及其对非生物胁迫的应答 被引量：4
9
作者 高飞 姚攀锋 +3 位作者 雒晓鹏 李成磊 吴琦 姚慧鹏 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期669-673,共5页
根据苦荞(Fagopyrum tataricum)花期转录组数据,分别以苦荞DNA和cDNA为模板,克隆得到1个苦荞C2C2型锌指蛋白基因FtLSD1(GenBank登录号KP252134)的DNA序列和cDNA序列,采用实时荧光定量PCR方法,研究了FtLSD1基因在非生物胁迫下的表达模式... 根据苦荞(Fagopyrum tataricum)花期转录组数据,分别以苦荞DNA和cDNA为模板,克隆得到1个苦荞C2C2型锌指蛋白基因FtLSD1(GenBank登录号KP252134)的DNA序列和cDNA序列,采用实时荧光定量PCR方法,研究了FtLSD1基因在非生物胁迫下的表达模式。结果显示:苦荞FtLSD1基因DNA全长2 427bp,由6个外显子和5个内含子构成,符合GU-AG剪切原则;cDNA序列包含一个528bp开放阅读框,编码175个氨基酸,具有LSD1家族的典型结构域;UV-B照射和水杨酸处理均能使FtLSD1基因的表达量上升,且UV-B处理在6h达到最大,为0h(CK)的3.84倍;水杨酸处理于10h达到最大,为0h(CK)的3.44倍,而4℃冷胁迫下该基因表达量保持稳定。推测该基因可能参与苦荞抗UV-B和高浓度水杨酸等非生物胁迫的应答反应,为苦荞的抗逆性研究提供新的视角。 展开更多
关键词 苦荞 锌指蛋白LSD1 基因克隆 非生物胁迫
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苦荞转录因子基因FtbHLH4的克隆及其对非生物胁迫的应答 被引量：1
10
作者 周婧 高飞 +4 位作者 张润敏 雒晓鹏 黄云吉 李成磊 吴琦 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期2399-2404,共6页
根据苦荞花期转录组数据,克隆得到1个苦荞bHLH类转录因子基因,命名为FtbHLH4。采用实时荧光定量PCR技术,分析了非生物胁迫对苦荞芽期FtbHLH4基因表达的影响。序列分析表明,苦荞FtbHLH4基因DNA全长1 852bp,由7个外显子和6个内含子构成,符... 根据苦荞花期转录组数据,克隆得到1个苦荞bHLH类转录因子基因,命名为FtbHLH4。采用实时荧光定量PCR技术,分析了非生物胁迫对苦荞芽期FtbHLH4基因表达的影响。序列分析表明,苦荞FtbHLH4基因DNA全长1 852bp,由7个外显子和6个内含子构成,符合GT-AG剪接原则;cDNA序列包含1个1 062bp的开放阅读框,编码353个氨基酸,具有bHLH类蛋白典型的螺旋-环-螺旋保守结构域。在脱落酸(ABA)、NaCl和PEG模拟干旱胁迫下,苦荞芽期FtbHLH4基因表达量均持续上升,至48h时达最大,分别为胁迫前的11.3倍、12.0倍和6.1倍。而在冷胁迫和UV-B胁迫下,苦荞芽期FtbHLH4基因表达量迅速下降,分别于6h和12h降低至胁迫前的24%和23%。研究推测FtbHLH4基因以不同机制参与了苦荞对非生物胁迫的应答过程。 展开更多
关键词 苦荞 转录因子bHLH 基因克隆 非生物胁迫
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