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表达β-珠蛋白基因的安全性慢病毒载体的优化
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作者 韩亚丽 杨冠恒 +2 位作者 陈雁雯 龚秀丽 张敬之 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期50-57,共8页
目的：慢病毒载体（lentiviral vector,LVV）是一种有效的基因治疗导入系统。拟用已研发的携带人的β-珠蛋白基因自删除慢病毒载体,优化其表达有效性和提高其病毒颗粒数。方法：比较三款不同的启动子预测软件的分析结果,分别构建三种不... 目的：慢病毒载体（lentiviral vector,LVV）是一种有效的基因治疗导入系统。拟用已研发的携带人的β-珠蛋白基因自删除慢病毒载体,优化其表达有效性和提高其病毒颗粒数。方法：比较三款不同的启动子预测软件的分析结果,分别构建三种不同长度启动子的表达β-珠蛋白基因（β-globin）的LVV,并对其Ⅱ号内含子进行部分删减;用经优化的LVV转导β-地中海贫血（β-地贫）的小鼠诱导性多能性干细胞（induced pluripotent stem cells,iPSC）后,用此iPSC制备嵌合体小鼠模型;经RT-PCR、血涂片瑞氏吉姆萨染色等观察分析其功能性代偿的潜能。研究结果：经优化后的自删除慢病毒载体病毒对其病毒颗粒数的滴度影响不大（2.3×10^（11）LPs/ml）,可在嵌合体小鼠模型体内检测到正常人β-珠蛋白基因的功能性表达。结论：优化了表达人β-珠蛋白基因的自删除LVV。 展开更多
关键词 Β-地中海贫血 自删除慢病毒载体 优化 基因治疗
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病毒滴度和插入子长度对慢病毒载体介导的转基因小鼠整合率的影响
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作者 郭歆冰 龚秀丽 +2 位作者 陈雁雯 方彧聃 张敬之 《实验动物与比较医学》 CAS 2013年第3期185-189,共5页
目的研究病毒滴度和插入子长度对于慢病毒载体介导的转基因小鼠整合率的影响。方法制备了18种不同长度插入子的慢病毒载体，通过受精卵卵周隙注射的方法获得转基因小鼠，然后通过PCR技术检测其转基因小鼠的整合率，并对所生成的数据进... 目的研究病毒滴度和插入子长度对于慢病毒载体介导的转基因小鼠整合率的影响。方法制备了18种不同长度插入子的慢病毒载体，通过受精卵卵周隙注射的方法获得转基因小鼠，然后通过PCR技术检测其转基因小鼠的整合率，并对所生成的数据进行统计学分析。结果插入子长度在较短（〈2kb）的情况下，病毒滴度达到2×10^8就可获得较高的整合率，在插入子长度稍长（4-5kb）的情况下，需要1×10^9滴度才能获得较高的整合率，而在插入子长度大于6kb的情况下，未能用该方法获得转基因小鼠。结论滴度的增加能有效提高慢病毒载体制备转基因小鼠的整合率，而当滴度适中（-2×10^8）时，整合率随插入子长度的增加而下降。 展开更多
关键词 慢病毒载体 转基因小鼠 整合率 滴度 插入子长度
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