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丁酸钠对自身免疫性肝炎辅助性T淋巴细胞17及肝脏Toll样受体4信号通路的影响 被引量：6
1
作者 吴锦露 陈永平 +8 位作者 胡恩德 陈达之 陈璐 陆峰彬 李慧 许烂漫 黄瑜 林镯 王晓东 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 2018年第1期25-29,共5页
目的了解丁酸钠对小鼠自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis, AIH）Th17的调节作用及对肝脏Toll样受体（Toll-like receptors, TLR）4炎症通路的影响。 方法将50只6周龄雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法随机分为对照组、AIH组、丁酸钠... 目的了解丁酸钠对小鼠自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis, AIH）Th17的调节作用及对肝脏Toll样受体（Toll-like receptors, TLR）4炎症通路的影响。 方法将50只6周龄雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法随机分为对照组、AIH组、丁酸钠组和高纤维组，每组10只，余10只小鼠用于提取肝脏特异性抗原S-100。诱导AIH模型建立后，丁酸钠组予500 mg/（kg·d）丁酸钠灌胃治疗，高纤维组予订制高纤维饲料喂养，持续3周后处死。观察各组小鼠肝脏病理变化，血清ALT、AST、IL-17A和TNF-α水平，脾脏Th17比例、肝脏TLR4、髓样分化因子（myeloid differentiation factor, MyD）88表达情况。对各样本均数进行正态性检验和方差齐性分析，各样本均数比较采用单因素方差分析。结果丁酸钠组及高纤维组小鼠肝脏炎症细胞浸润及细胞坏死明显比AIH组减轻。对照组、AIH组、丁酸钠组及高纤维组ALT分别为（24.833±2.229）、（88.333±9.543）、（27.167±3.189）和（29.833±6.113） U/L，AST分别为（97.000±14.953）、（285.000±35.434）、（139.500±38.976）和（127.167±28.687） U/L，各组间差异均有统计学意义（F值分别为156.491、44.118，均P〈0.01）。丁酸钠组和高纤维组小鼠脾脏Th17比例及其转录因子维甲酸相关孤儿受体γt明显低于AIH组，差异均有统计学意义（F值分别为21.780和68.283，均P〈0.05）；AIH组小鼠肝脏TLR4和MyD88蛋白表达明显高于对照组，丁酸钠组及高纤维组表达则被抑制，差异均有统计学意义（F值分别为26.235、28.293，均P〈0.01）；与AIH组相比，丁酸钠组及高纤维组肝脏和外周血中IL-17和TNF-α表达均降低。结论丁酸钠对自身免疫性肝炎进行免疫调节，改善肝脏炎性反应。 展开更多
关键词 肝炎 自身免疫性 丁酸钠 高纤维饮食 辅助性T淋巴细胞17 Toll样受体4信号通路
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高脂饮食对自身免疫性肝炎肝损伤与焦亡的研究 被引量：5
2
作者 陈璐 陆峰彬 +8 位作者 叶韦玮 陈永平 陈达之 吴锦露 胡恩德 李慧 黄瑜 许烂漫 李骥 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 2018年第1期18-24,共7页
目的探讨高脂饮食（high-fat diet, HFD）对小鼠自身免疫性肝炎（autoimmune hepatits, AIH）肝脏损伤的影响。方法50只C57BL/6雄性小鼠选取6只为S-100制备组，剩余小鼠用随机数字法随机分成标准饮食组（standard chow, SC）、HFD组、AI... 目的探讨高脂饮食（high-fat diet, HFD）对小鼠自身免疫性肝炎（autoimmune hepatits, AIH）肝脏损伤的影响。方法50只C57BL/6雄性小鼠选取6只为S-100制备组，剩余小鼠用随机数字法随机分成标准饮食组（standard chow, SC）、HFD组、AIH＋SC组及AIH＋HFD组，喂饲1周后进行AIH造模，4周后处死小鼠，收集小鼠肝脏、脾脏、血清，进行HE染色观察肝组织病理学改变；检测小鼠血清中ALT和AST变化；蛋白质印迹法和实时PCR法检检测肝组织中Nod样受体蛋白3（NLR pyrin domain containing 3, NLRP3）和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1（cysteinyl aspartate specific proteinase, Caspase-1）的表达；ELISA试剂盒检测血清中TNF-α、IL-6和IL-1β的分泌量；流式细胞仪分析脾脏中Th17细胞的数量。各组间均数比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA），每两组间比较方差齐性采用SNK-q检验，方差不齐采用非参数检验。结果HFD组肝组织可见少许脂肪空泡形成，AIH＋SC组可见血管周围炎性反应，AIH＋HFD组可见炎性反应加重，出现少许空泡样脂肪变性。与SC组小鼠相比，AIH＋SC组和HFD组小鼠的血清ALT和AST水平有所增加，AIH＋HFD组上升最为明显，各组均数相比差异均具有统计学意义（F值分别为57.12和37.58，P均〈0.05）。SC组外周血中Th17占CD4＋T细胞的比例为（2.98±0.90）%，HFD组为（6.89±0.99）%，AIH＋SC组为（6.47±1.08）%，AIH＋HFD组为（9.96±0.83）%，各组之间比较及两两比较差异有统计学意义（F＝54.05，P〈0.05）。SC组各血清细胞因子浓度分别为IL-1β [（7.62±2.81） ng/L]、IL-6 [（106.54±53.08） ng/L]、TNF-α [（107.26±36.20） ng/L]；HFD组分别为IL-1β [（25.06±7.09） ng/L]、IL-6 [（220.11±47.41） ng/L]、TNF-α [（273.77±33.62） ng/L]；AIH＋SC组分别为IL-1β [（17.49±5.68） ng/L]、IL-6[（260.73±50.29） ng/L]、TNF-α [（250.49±81.63） ng/L]；AIH＋HFD分别为IL- 展开更多
关键词 肝炎 自身免疫性 脂肪因子类 高脂饮食 炎症小体 细胞焦亡
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半乳糖凝集素-3在大鼠肝纤维化组织中的表达及意义 被引量：3
3
作者 苏林红 陈达之 +2 位作者 王春莹 陈永平 刘俊 《医学研究杂志》 2012年第1期55-58,共4页
目的研究半乳糖凝集素-3(galectin-3,Gal-3)、转化生长因子β1(transforming growth factor beta-1,TGF-β1)、a-平滑肌肌动蛋白(a-smooth muscle actin,a-SMA)在肝纤维化大鼠模型中的动态表达及意义。方法雄性SD大鼠随机分为健康对照组... 目的研究半乳糖凝集素-3(galectin-3,Gal-3)、转化生长因子β1(transforming growth factor beta-1,TGF-β1)、a-平滑肌肌动蛋白(a-smooth muscle actin,a-SMA)在肝纤维化大鼠模型中的动态表达及意义。方法雄性SD大鼠随机分为健康对照组6只,肝纤维化模型组24只,采用二甲基亚硝胺(DMN)腹腔注射制备肝纤维化模型。分别在造模后2、4、6、8周门静脉采血检测血清ALT、AST、Alb,采用HE及Masson染色观察肝组织学变化,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同时间点肝脏galectin-3 mRNA的表达。结果正常肝组织中有galectin-3低表达,2周即升高,4周达高峰,6周下降,差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示,galectin-3水平与TGF-β1、a-SMA呈正相关(r=0.882～0.963,P<0.01)。结论 Galectin-3可能与肝纤维化的发生发展过程密切相关。 展开更多
关键词 半乳糖凝集素-3转化生长因子β1a-平滑肌肌动蛋白肝纤维化
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姜黄素衍生物C66对转化生长因子-β刺激的大鼠肝星状细胞增殖和活化的研究 被引量：1
4
作者 陈泽 陈达之 +4 位作者 萧云蕾 肖茜茜 王永林 许烂漫 陈永平 《中华传染病杂志》 CSCD 北大核心 2017年第8期492-497,共6页
目的观察姜黄素衍生物C66对TGF-β刺激的大鼠肝星状细胞（HSC）增殖及α-平滑肌动蛋白（R-SMA）、Ⅰ型胶原表达的影响及其与大麻素受体（CB）1的关系。方法体外培养HSC-T6细胞，分为对照组、C66不同浓度组（1、2、5、10和20／,tool／L... 目的观察姜黄素衍生物C66对TGF-β刺激的大鼠肝星状细胞（HSC）增殖及α-平滑肌动蛋白（R-SMA）、Ⅰ型胶原表达的影响及其与大麻素受体（CB）1的关系。方法体外培养HSC-T6细胞，分为对照组、C66不同浓度组（1、2、5、10和20／,tool／L），细胞计数试剂盒一8检测其吸光度（A）值。选取最佳C66作用浓度及时间，分为对照组、TGF-β干预组、TGF＋β＋CB1拮抗剂组、TGF-β＋C66干预组、TGF-β＋CB1拮抗剂＋C66联合干预组，分别培养48h，以蛋白质印迹法、实时荧光定量PCR检测CB1、α—SMA、I型胶原蛋白及mRNA的表达，以蛋白质印迹法检测磷酸化c—jun氨基末端激酶（p-JNK）、C—jun氨基末端激酶（JNK）表达水平。多样本均数方差齐性者采用LSD法进行两两比较，方差不齐者采用DunnettT3检验，组间比较采用单因素方差分析。结果C66能有效抑制HSCT6增殖，呈现浓度和时间依赖性，其中10μmol／LC66作用48h对HSC—T6的抑制效果最明显，抑制率为54％。与对照组相比，单独TGF-β1干预组CB1、Ⅰ型胶原、α-SMA蛋白表达明显升高，差异均有统计学意义（￡值分别为6．188、3．48和20．64，均P〈0．05）。与对照组相比，单独TGF-β1干预组CB1、I型胶原、Ⅰ-SMAmRNA相对表达显著升高，差异均有统计学意义（￡值分别为4．705、9．492和38．27，均P〈0．05）。与对照相组比，TGF—B1干预组p-JNK水平显著升高，差异有统计学意义（t=9．567，P〈0．05）。结论C66能有效抑制HSC—T6细胞的增殖及胶原合成，且联合使用CB1拮抗剂效果更明显，该过程可能涉及JNK磷酸化水平的调节，有助于理解肝纤维化发生、发展的机制及为治疗肝纤维化寻找新的靶点。 展开更多
关键词 姜黄素衍生物 肝星状细胞 肝纤维化 c—jun氨基末端激酶
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微小核糖核酸-34a对肝星状细胞增殖及活化的影响
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作者 宋梅 王玉群 +6 位作者 曹肃婷 林镯 许烂漫 施可庆 王雅琴 陈永平 陈达之 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期66-70,共5页
目的观察慢病毒表达载体介导微小核糖核酸-34a（miRNA-34a）体外转染肝星状细胞-T6（HSC-T6）后对肝星状细胞增殖率及活化的影响，探讨miRNA-34a在肝纤维化中可能的作用。方法体外培养HSC-T6细胞，分别对miRNA一34a重组慢病毒组和空白... 目的观察慢病毒表达载体介导微小核糖核酸-34a（miRNA-34a）体外转染肝星状细胞-T6（HSC-T6）后对肝星状细胞增殖率及活化的影响，探讨miRNA-34a在肝纤维化中可能的作用。方法体外培养HSC-T6细胞，分别对miRNA一34a重组慢病毒组和空白对照病毒组转染肝星状细胞，细胞计数试剂盒（CCK-8试剂盒）检测细胞增殖抑制率，实时荧光定量PCR（RT-PCR）、Western印迹法检测HSC-T6细胞转化生长因子-β1（TGF-β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和基质金属蛋白酶3（MMP3）mRNA及蛋白表达。组间差异采用单因素方差分析，方差齐性者两两比较采用LSD法，方差不齐者采用DunnettT3检验，相关性检验采用Pearson直线相关分析。结果转染效率为80％；与空白对照病毒组相比，转染后RT-PCR显示，miRNA-34a重组慢病毒组miRNA-34amRNA的含量是3．6，其表达量明显升高；miRNA-34a重组慢病毒组肝星状细胞增殖率明显降低（24、48及72h的F值分别为9．048、168．070、812．390，均P〈0．05）；TGF-β1和a-SMAmRNA的表达量均降低，相对于空白对照病毒组的含量分别为0．28和0．13；TGF-β1和α-SMA蛋白表达量均降低（F=64．444、90．577，均P〈0．05）；而MMP3表达量明显升高（F=374．584，P〈0．05）。结论miRNA-34a能抑制肝星状细胞增殖和活化，有望在治疗肝纤维化中发挥作用。 展开更多
关键词 微小核糖核酸 星形细胞 肝硬化 转化生长因子Β1 肌动蛋白类 基质金属蛋白酶3
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kielin／chordin样蛋白在肝纤维化模型中的动态表达及骨形成蛋白-7干预后的表达变化
6
作者 宋梅 陈永平 +3 位作者 陈少隆 陈达之 阳韬 林镯 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期587-592,共6页
目的观察kielin／chordin样蛋白（kcp）在肝纤维化小鼠模型中的动态表达及骨形成蛋白-7（BMP-7）干预对其表达的影响，探讨治疗肝纤维化的新靶点。方法健康雄性ICR小鼠50只，分为正常对照组（10只）、模型组（30只）和BMP-7干预组（10... 目的观察kielin／chordin样蛋白（kcp）在肝纤维化小鼠模型中的动态表达及骨形成蛋白-7（BMP-7）干预对其表达的影响，探讨治疗肝纤维化的新靶点。方法健康雄性ICR小鼠50只，分为正常对照组（10只）、模型组（30只）和BMP-7干预组（10只），模型组再按造模不同时间点分4、8、12周3个亚组，每组10只。模型组小鼠皮下注射四氯化碳制备肝纤维化小鼠模型，BMP-7干预组在造模后第8周开始腹腔注射人重组BMP-7，持续4周。造模后各组小鼠下腔静脉采血测定血清ALT、AST和Alb；肝组织经HE和Masson染色后光学显微镜下观察各组病理变化；采用RT-PCR、免疫组织化学和Western印迹法分别检测各组kcpmRNA及蛋白表达情况。各组间均数比较采用单因素方差分析。结果模型组血清AI。T、AST升高，Alb降低，12周时达峰值，BMP-7干预组有所缓解，各组间比较，差异有统计学意义（F值=23．501、34．600、16．244，均P〈0．05）。正常对照组kcpmRNA和蛋白表达很低，模型组则逐渐升高，BMP-7干预组有所缓解，差异有统计学意义（F值=30．362、10．727，P〈0．01或0．05）。kcpmRNA表达水平与转化生长因子81（TGF-131）、BMP-7mRNA表达水平均呈正相关（r=0．760、0．769，均P〈0．05）。结论BMP-7能改善小鼠肝纤维化；kcp可能参与肝纤维化发生发展过程，有望成为肝纤维化治疗的新靶点。 展开更多
关键词 骨形态发生蛋白质类 转化生长因子Β1 RNA 信使 肝硬化 疾病模型 动物
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曲古抑菌素A对s-100诱导的小鼠自身免疫性肝炎的影响
7
作者 胡恩德 昊锦露 +6 位作者 陈永平 陈达之 李骥 许烂漫 陆峰彬 陈璐 黄瑜 《中华传染病杂志》 CSCD 北大核心 2017年第12期734-738,共5页
目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂——曲古抑菌素A（trichostatin A，TSA）对s-100诱导的小鼠自身免疫性肝炎的影响。 方法将26只6周龄C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和TSA组，每组6只，另外8只小鼠用于提取肝组织s-100蛋白。模型组... 目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂——曲古抑菌素A（trichostatin A，TSA）对s-100诱导的小鼠自身免疫性肝炎的影响。 方法将26只6周龄C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和TSA组，每组6只，另外8只小鼠用于提取肝组织s-100蛋白。模型组和TSA组小鼠腹腔注射s-100和完全弗氏佐剂，建立小鼠自身免疫性肝炎模型，第21天，TSA组小鼠连续7 d腹腔注射TSA 2 mg/（kg·d），对照组和模型组小鼠腹腔注射等量含1%二甲基亚砜的0.9%氯化钠溶液。检测各组小鼠血清ALT和AST水平，观察肝组织病理学。蛋白质免疫法检测肝组织内核因子-κB和乙酰化组蛋白H3；实时定量PCR检测肝组织内核因子-κB、HDAC3、TLR4及TNF-α mRNA水平；ELISA法检测血清TNF-α。各组间比较采用t检验。 结果对照组、模型组和TSA组小鼠血清ALT分别为（122.00±45.29）、（459.33±167.58）和（217.33±49.25） U/L，对照组、TSA组与模型组比较，差异均有统计学意义（t值分别为4.76、3.41，均P〈0.05）；AST分别为（127.83±18.55）、（389.67±87.14）和（249.50±71.72） U/L，与模型组比较，差异均有统计学意义（t值分别为7.20、3.04，均P〈0.05）。TSA减轻了s-100诱导的肝组织病理炎症；模型组小鼠肝组织中核因子-κB蛋白、核因子-κB mRNA、TNF-α mRNA、HDAC3 mRNA和TLR4 mRNA的相对表达量分别为2.43±0.42、9.51±0.36、10.53±0.74、2.90±0.22和4.50±0.73，较对照组1.28±0.49、1.28±0.49、1.06±0.14、1.72±0.73和1.01±0.31明显升高（t值分别为4.68、37.14、30.69、4.33和10.85，均P〈0.05），TSA组核因子-κB蛋白、核因子-κB mRNA、TNF-α mRNA、HDAC3 mRNA及TLR4 mRNA相对表达量分别为1.30±0.36、1.30±0.36、2.38±0.36、2.13±0.32和2.40±0.51，也明显低于模型组（t值分别为4.58、30.62、24.12、2.81、5.81，均P〈0.05）。对照组、模型组和TSA组小鼠血清TNF-α分别为（122.37±68.12）、（1 361.44±207.13）和� 展开更多
关键词 组蛋白去乙酰化酶 曲古抑菌素A 核因子-ΚB 肿瘤坏死因子-α 肝炎 自身免疫性
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骨成形蛋白7对大鼠肝星状细胞增殖的抑制作用
8
作者 王春莹 陈达之 +5 位作者 刘俊 李春艳 林镯 阳韬 陆小蒟 陈永平 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期195-199,共5页
目的研究骨成形蛋白7（BMP7）对大鼠肝星状细胞（HSC）增殖的抑制作用。方法体外培养HSC—T6细胞，分为对照组、TGFβ1组、TGFβ1＋BMP7组和TGFβ1＋BMP7＋Noggin组。RT—PCR法检测果蝇蛋白质1（smadl）、α-平滑肌肌动蛋白（mSMA）、gr... 目的研究骨成形蛋白7（BMP7）对大鼠肝星状细胞（HSC）增殖的抑制作用。方法体外培养HSC—T6细胞，分为对照组、TGFβ1组、TGFβ1＋BMP7组和TGFβ1＋BMP7＋Noggin组。RT—PCR法检测果蝇蛋白质1（smadl）、α-平滑肌肌动蛋白（mSMA）、gremlin和纤维连接蛋白（FN）mRNA的表达，Western印迹法检测磷酸化smadl／5／8（P-smadl／5／8）、α-SMA、gremlin蛋白的表达。采用单因素方差分析、LSD检验、Dunnett T3检验和Pearson直线相关分析进行统计学处理。结果对照组HSC—T6细胞中可见P—smadl／5／8、α-SMA、gremlin及FN的表达，TGFβ1刺激后表达量明显增加，差异有统计学意义（均P〈0．05）。与TGFβ1组比较，TGFβ1＋BMP7组α—SMA、gremlin及FN表达下调，但P—smadl／5／8蛋白表达增加（1．613±0．031比2．503±0．014±34．89，P〈0．05）。TGFβ1＋BMP7＋Noggin组α-SMA、gremlin及FN表达较TGFβ1＋BMP7组增加，而P-smadl／5／8蛋白表达下调（t=34．05，P〈0．05）。smad1mRNA在各组表达均无显著变化。结论BMP7对α—SMA、gremlin和FN均有较强的抑制作用。 展开更多
关键词 骨形态发生蛋白7 果蝇蛋白质类 磷酰化 肌 平滑肌动蛋白 纤连蛋白类
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