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鹅源星状病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用
被引量：
7
1
作者
苏世博
蒲路莎
+2 位作者
陈
肖
韩
赵丽丽
陈
洪岩
《中国比较医学杂志》
CAS
北大核心
2021年第3期43-48,共6页
目的建立一种可快速诊断鹅源星状病毒的荧光定量PCR方法。方法分析比对NCBI下载的鹅源星状病毒全基因组序列,在其ORF1a保守区设计一对特异性引物及Taq Man探针,优化反应条件,建立标准曲线,并验证其特异性,敏感性和稳定性。结果该方法最...
目的建立一种可快速诊断鹅源星状病毒的荧光定量PCR方法。方法分析比对NCBI下载的鹅源星状病毒全基因组序列,在其ORF1a保守区设计一对特异性引物及Taq Man探针,优化反应条件,建立标准曲线,并验证其特异性,敏感性和稳定性。结果该方法最低检测线限为1.50×10^(2)copies/μL,批内和批间检测变异系数分别小于0.5%和4%,且对其他常见水禽病毒无特异性扩增。临床应用结果显示检出率明显高于常规RT-PCR方法。结论建立了一种鹅源星状病毒的Taq Man荧光定量PCR方法,该方法特异性强,灵敏度高且重复性良好,适用于鹅源星状病毒的早期检测和定量分析。
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关键词
鹅源星状病毒
荧光定量PCR
雏鹅痛风
检测方法
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职称材料
鹅源星状病毒ORF2基因原核表达及遗传进化分析
被引量：
4
2
作者
蒲路莎
苏世博
+2 位作者
陈
肖
韩
赵丽丽
陈
洪岩
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2020年第5期789-797,共9页
应用RT-PCR方法扩增鹅源星状病毒(goose astrovirus,GoAstV)HLJ01株的ORF2基因,将扩增产物克隆至pET32a原核表达载体,并在大肠埃希菌BL21进行表达。通过SDS-PAGE分析表明,重组菌诱导后得到大小约为106 ku的ORF2蛋白,与理论值相符。将诱...
应用RT-PCR方法扩增鹅源星状病毒(goose astrovirus,GoAstV)HLJ01株的ORF2基因,将扩增产物克隆至pET32a原核表达载体,并在大肠埃希菌BL21进行表达。通过SDS-PAGE分析表明,重组菌诱导后得到大小约为106 ku的ORF2蛋白,与理论值相符。将诱导表达的蛋白经镍亲和层析柱纯化后免疫小鼠制备多克隆抗体,并测定其抗体效价。Western-blotting结果显示,ORF2蛋白可被鼠抗GoAstV阳性血清识别。序列分析表明,该毒株与其他鹅源星状病毒参考毒株的核苷酸相似性介于37.8%~99.3%之间,HLJ-1801分离株与已发表的8株鹅源星状病毒毒株位于同一分支,表明其属于一种新型星状病毒成员。利用原核表达系统成功高效地表达了GoAstV ORF2蛋白,融合蛋白以包涵体形式存在。本试验成功获得了纯化的ORF2重组蛋白和小鼠抗GoAstV多克隆抗体,为进一步研究ORF2蛋白对星状病毒感染的诊断试剂的研发奠定了基础。
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关键词
鹅星状病毒
ORF2
原核表达
遗传进化分析
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职称材料
DHV-Ⅰ和DEV双重荧光定量PCR方法的建立
被引量：
3
3
作者
陈
肖
韩
刘海燕
+2 位作者
苏世博
赵丽丽
陈
洪岩
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第2期169-175,共7页
为建立快速特异的能够鉴别诊断DHV-I和DEV的荧光定量PCR方法,根据NCBI中I型鸭肝炎病毒和鸭肠炎病毒的保守序列,采用Beacon Designer 7.5软件,设计了2对特异性引物和2条用不同荧光基团标记的TaqMan探针。接着,对反应条件进行优化,验证其...
为建立快速特异的能够鉴别诊断DHV-I和DEV的荧光定量PCR方法,根据NCBI中I型鸭肝炎病毒和鸭肠炎病毒的保守序列,采用Beacon Designer 7.5软件,设计了2对特异性引物和2条用不同荧光基团标记的TaqMan探针。接着,对反应条件进行优化,验证其特异性及敏感性。结果,该方法特异性好,对鹅细小病毒、番鸭细小病毒、禽流感病毒、新城疫病毒、鸭坦布苏病毒、禽网状内皮增生病毒、禽呼肠弧病毒、减蛋综合征病毒、鸭甲肝病毒3型9种病毒检测,均无荧光信号。而且其灵敏度高,对DHV-I和DEV的最小检出量均为200拷贝。利用所建立的荧光定量PCR方法对江苏徐州采集的166份肛拭子进行检测,检出I型鸭肝炎病毒13份(阳性率为7.8%),鸭肠炎病毒75份(阳性率为45%)。上述结果表明,本研究建立了灵敏度高特异性强的DHV-I和DEV双重荧光定量PCR方法。
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关键词
Ⅰ型鸭肝炎病毒
鸭肠炎病毒
双重荧光定量
原文传递
题名
鹅源星状病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用
被引量：
7
1
作者
苏世博
蒲路莎
陈
肖
韩
赵丽丽
陈
洪岩
机构
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室/国家禽类实验动物资源库
出处
《中国比较医学杂志》
CAS
北大核心
2021年第3期43-48,共6页
基金
国家十三五重点研发计划子课题(2016YFD0500800)
黑龙江省青年科学基金项目(QC2018033)
+1 种基金
黑龙江省自然科学基金重点项目(ZD2016006)
中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(1610302020008,1610302017013)。
文摘
目的建立一种可快速诊断鹅源星状病毒的荧光定量PCR方法。方法分析比对NCBI下载的鹅源星状病毒全基因组序列,在其ORF1a保守区设计一对特异性引物及Taq Man探针,优化反应条件,建立标准曲线,并验证其特异性,敏感性和稳定性。结果该方法最低检测线限为1.50×10^(2)copies/μL,批内和批间检测变异系数分别小于0.5%和4%,且对其他常见水禽病毒无特异性扩增。临床应用结果显示检出率明显高于常规RT-PCR方法。结论建立了一种鹅源星状病毒的Taq Man荧光定量PCR方法,该方法特异性强,灵敏度高且重复性良好,适用于鹅源星状病毒的早期检测和定量分析。
关键词
鹅源星状病毒
荧光定量PCR
雏鹅痛风
检测方法
Keywords
goose-origin astrovirus
RT-qPCR
gosling gout
detection method
分类号
R-33 [医药卫生]
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职称材料
题名
鹅源星状病毒ORF2基因原核表达及遗传进化分析
被引量：
4
2
作者
蒲路莎
苏世博
陈
肖
韩
赵丽丽
陈
洪岩
机构
黑龙江八一农垦大学动物科技学院
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
出处
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2020年第5期789-797,共9页
基金
黑龙江省青年基金(QC2018033)
国家十三五重点研发计划(2016YFD0500800)
+1 种基金
黑龙江省自然科学基金重点项目(ZD201606)
中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(1610302017013)。
文摘
应用RT-PCR方法扩增鹅源星状病毒(goose astrovirus,GoAstV)HLJ01株的ORF2基因,将扩增产物克隆至pET32a原核表达载体,并在大肠埃希菌BL21进行表达。通过SDS-PAGE分析表明,重组菌诱导后得到大小约为106 ku的ORF2蛋白,与理论值相符。将诱导表达的蛋白经镍亲和层析柱纯化后免疫小鼠制备多克隆抗体,并测定其抗体效价。Western-blotting结果显示,ORF2蛋白可被鼠抗GoAstV阳性血清识别。序列分析表明,该毒株与其他鹅源星状病毒参考毒株的核苷酸相似性介于37.8%~99.3%之间,HLJ-1801分离株与已发表的8株鹅源星状病毒毒株位于同一分支,表明其属于一种新型星状病毒成员。利用原核表达系统成功高效地表达了GoAstV ORF2蛋白,融合蛋白以包涵体形式存在。本试验成功获得了纯化的ORF2重组蛋白和小鼠抗GoAstV多克隆抗体,为进一步研究ORF2蛋白对星状病毒感染的诊断试剂的研发奠定了基础。
关键词
鹅星状病毒
ORF2
原核表达
遗传进化分析
Keywords
goose astrovirus
ORF2
prokaryotic expression
Phylogenetic analysis
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
DHV-Ⅰ和DEV双重荧光定量PCR方法的建立
被引量：
3
3
作者
陈
肖
韩
刘海燕
苏世博
赵丽丽
陈
洪岩
机构
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室
出处
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第2期169-175,共7页
基金
国家十三五重点研发计划项目子课题(2016YFD0500800)
黑龙江省青年科学基金项目(QC2018033)
+1 种基金
黑龙江省自然科学基金重点项目(ZD2016006)
中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(1610302020008,1610302017013)。
文摘
为建立快速特异的能够鉴别诊断DHV-I和DEV的荧光定量PCR方法,根据NCBI中I型鸭肝炎病毒和鸭肠炎病毒的保守序列,采用Beacon Designer 7.5软件,设计了2对特异性引物和2条用不同荧光基团标记的TaqMan探针。接着,对反应条件进行优化,验证其特异性及敏感性。结果,该方法特异性好,对鹅细小病毒、番鸭细小病毒、禽流感病毒、新城疫病毒、鸭坦布苏病毒、禽网状内皮增生病毒、禽呼肠弧病毒、减蛋综合征病毒、鸭甲肝病毒3型9种病毒检测,均无荧光信号。而且其灵敏度高,对DHV-I和DEV的最小检出量均为200拷贝。利用所建立的荧光定量PCR方法对江苏徐州采集的166份肛拭子进行检测,检出I型鸭肝炎病毒13份(阳性率为7.8%),鸭肠炎病毒75份(阳性率为45%)。上述结果表明,本研究建立了灵敏度高特异性强的DHV-I和DEV双重荧光定量PCR方法。
关键词
Ⅰ型鸭肝炎病毒
鸭肠炎病毒
双重荧光定量
Keywords
duck hepatitis virus typeⅠ
duck plague
double fluorescence quantification
分类号
S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
鹅源星状病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用
苏世博
蒲路莎
陈
肖
韩
赵丽丽
陈
洪岩
《中国比较医学杂志》
CAS
北大核心
2021
7
下载PDF
职称材料
2
鹅源星状病毒ORF2基因原核表达及遗传进化分析
蒲路莎
苏世博
陈
肖
韩
赵丽丽
陈
洪岩
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2020
4
下载PDF
职称材料
3
DHV-Ⅰ和DEV双重荧光定量PCR方法的建立
陈
肖
韩
刘海燕
苏世博
赵丽丽
陈
洪岩
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2021
3
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