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利用皮肤干细胞的横向分化重建角膜上皮的初步研究 被引量：39
1
作者 黄冰 王智崇 +6 位作者 葛坚 陈系古 刘敬波 范志刚 陶靖 刘炳乾 郭芬芬 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期838-842,共5页
目的　观察皮肤干细胞在角膜基质上的分化发育情况 ,探讨皮肤干细胞重建角膜上皮的可能性。方法　将体外分离培养的 1～ 4代人和兔皮肤干细胞种植在兔角膜基质上 ,在体外和体内观察皮肤干细胞的分化发育情况。实验标本作HE染色及用人上... 目的　观察皮肤干细胞在角膜基质上的分化发育情况 ,探讨皮肤干细胞重建角膜上皮的可能性。方法　将体外分离培养的 1～ 4代人和兔皮肤干细胞种植在兔角膜基质上 ,在体外和体内观察皮肤干细胞的分化发育情况。实验标本作HE染色及用人上皮细胞角蛋白K19单克隆抗体和角膜上皮细胞特异性标志蛋白K3/K12抗体AE5进行免疫组织化学鉴定。结果　皮肤干细胞在角膜基质的调控下可以横向分化发育成表达角膜上皮细胞特异性标志蛋白K3/K12的细胞 ,呈现AE5抗体阳性 ;并可形成类似角膜上皮外观透明的多层细胞结构。结论　利用皮肤干细胞有可能重建角膜上皮 ,进行自体生物角膜的构建。 展开更多
关键词 皮肤干细胞 细胞横向分化 功能重建 角膜上皮 免疫组织化学 组织工程
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人羊膜诱导胚胎干细胞向表皮样干细胞的定向分化 被引量：24
2
作者 张仁礼 李海标 +2 位作者 黄冰 陈系古 李树浓 《中山医科大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第5期325-328,I002,共5页
【目的】探索体外定向诱导胚胎干细胞 (ES细胞 )分化为表皮样干细胞的条件 ,为研究其分化机理及寻找新的皮肤组织工程种子细胞奠定基础。【方法】将小鼠胚胎干细胞单独 (对照组 )或与人羊膜共培养 4～ 5d ,观察其形态分化 ,分别用β1整... 【目的】探索体外定向诱导胚胎干细胞 (ES细胞 )分化为表皮样干细胞的条件 ,为研究其分化机理及寻找新的皮肤组织工程种子细胞奠定基础。【方法】将小鼠胚胎干细胞单独 (对照组 )或与人羊膜共培养 4～ 5d ,观察其形态分化 ,分别用β1整合素免疫组化和流式细胞仪检测胚胎干细胞向表皮样干细胞的分化。【结果】与人羊膜共培养 4～ 5d后 ,ES细胞分化为表皮细胞样的单层细胞 ,细胞排列紧密 ,呈多边形 ,免疫组织化学染色后 ,多数细胞呈现 β1整合素阳性 ,对照组大量细胞死亡 ,未见 β1整合素阳性细胞 ;流式细胞仪检测结果显示 :实验组和对照组β1整合素阳性细胞分别为 81 4%和 8 4% ,两者比较差异显著 ,Z检验P <0 0 1。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 表皮样干细胞 羊膜 抗原 CD29 定向分化
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BALB/c小鼠胚胎干细胞系的建立及其嵌合体小鼠的获得 被引量：28
3
作者 黄冰 陈系古 +4 位作者 邓新燕 林以理 陈颖青 黄春浓 梁英杰 《细胞生物学杂志》 CSCD 北大核心 2001年第1期28-32,共5页
目的:建立BALB/c小鼠胚胎干细胞系,并用于制作嵌合体小鼠。方法:从BALB/c小鼠囊胚内分离培养内细胞团块。建系后,进行C_(57)BL/6小鼠受体囊胚腔注射,制作嵌合体小鼠。结果:建立了我国第一株BALB/c小鼠胚胎干细胞系。该细胞系具有典型的E... 目的:建立BALB/c小鼠胚胎干细胞系,并用于制作嵌合体小鼠。方法:从BALB/c小鼠囊胚内分离培养内细胞团块。建系后,进行C_(57)BL/6小鼠受体囊胚腔注射,制作嵌合体小鼠。结果:建立了我国第一株BALB/c小鼠胚胎干细胞系。该细胞系具有典型的ES细胞形态,碱性磷酸酶强阳性,核型正常以及具有分化为三种胚层组织的能力,并已产生5只嵌合体小鼠。结论:建立的BALB/c小鼠胚胎干细胞系具有胚胎干细胞的各种特点,可用于体内外诱导分化研究。在进一步观察生殖系嵌合情况后,决定是否可应用于基因打靶等转基因动物的制作。 展开更多
关键词 BALB/C小鼠 胚胎干细胞系 嵌合体 建系
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小鼠胚胎干细胞在六种培养体系的培养观察 被引量：18
4
作者 黄冰 黄文革 +2 位作者 钟女奇 陈颖青 陈系古 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2000年第1期1-6,共6页
目的　观察小鼠胚胎干细胞在六种培养体系中的生长情况。方法　小鼠胚胎干细胞 (ESD3细胞株 )在以下六种培养体系中培养 :1 .原代小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF)有血清培养 ,2 .MEF无血清培养 ,3.SNL细胞有血清培养 ,4.LIF(白血病抑制因子 )... 目的　观察小鼠胚胎干细胞在六种培养体系中的生长情况。方法　小鼠胚胎干细胞 (ESD3细胞株 )在以下六种培养体系中培养 :1 .原代小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF)有血清培养 ,2 .MEF无血清培养 ,3.SNL细胞有血清培养 ,4.LIF(白血病抑制因子 )有血清无饲养层培养 ,5.LIF无血清无饲养层培养 ,6.大鼠肝细胞 (BRL)条件培养基培养。经体外培养 1 0代后 ,观察其克隆形态 ,同时进行碱性磷酸酶检测并将ES细胞接种于裸小鼠皮下 ,观察ESD3的未分化状态和多潜能性。结果　六种培养体系培养的ESD3具有典型的ES细胞克隆形态 :巢状 (集落状 )隆起生长 ,边缘清楚 ,表面平滑 ,结构致密 ;AKP强阳性 ;裸小鼠体内形成了由多种组织构成的畸胎瘤。结论　六种培养体系均能支持ESD3生长 ,并能保持其未分化性和多潜能性 ,为ES细胞的应用研究奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 观察 干细胞 血清培养 ES细胞 裸小鼠 饲养层 集落 克隆形态 小鼠胚胎 培养体系
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胶原/纤维蛋白止血效果观察 被引量：29
5
作者 赵士海 胡庆柳 +3 位作者 钟志勇 饶子亮 王刚 陈系古 《中国比较医学杂志》 CAS 2010年第5期61-65,共5页
目的研究胶原/纤维蛋白对新西兰兔的止血作用,并与胶原蛋白海绵止血效果作比较。方法选用胶原/纤维蛋白止血贴,对新西兰兔耳部动、静脉出血、耳表创面、股动脉割伤、肝损伤、体表创面进行止血试验,同时与胶原蛋白海绵止血效果作比较,观... 目的研究胶原/纤维蛋白对新西兰兔的止血作用,并与胶原蛋白海绵止血效果作比较。方法选用胶原/纤维蛋白止血贴,对新西兰兔耳部动、静脉出血、耳表创面、股动脉割伤、肝损伤、体表创面进行止血试验,同时与胶原蛋白海绵止血效果作比较,观察其止血时间、失血量、敷料与创面的粘合等情况,并定期观察创面愈合、体内吸收和抗炎情况。结果胶原/纤维蛋白复合止血贴组、胶原蛋白海绵组新西兰兔耳动、静脉、耳表创面、股动脉割伤、标准肝创伤的止血时间与对照组比较,差异显著(P<0.05)。胶原/纤维蛋白复合止血贴组新西兰兔耳动、静脉、耳表创面的止血时间与胶原蛋白海绵组,差异显著(P<0.05)。胶原/纤维蛋白复合止血贴组、胶原蛋白海绵组动物的耳表创面、标准肝创伤失血量与对照组比较,差异显著(P<0.05)。体内标准肝创伤、体表创伤后期观察,胶原/纤维蛋白复合止血贴与胶原蛋白海绵均能在21d内完全吸收,未见炎症反应。结论胶原/纤维蛋白复合止血贴对新西兰兔耳动脉割伤、耳静脉割伤、耳标创伤、股动脉割伤和标准肝损伤模型都具有明显的止血作用,体表创面伤口恢复良好,体内吸收速度快,具有一定的抗炎作用,而且在新西兰兔耳动脉、耳静脉割伤和耳表创伤的止血效果明显优于胶原蛋白海绵。胶原/纤维蛋白复合止血贴是一种较安全有效的局部止血生物材料。 展开更多
关键词 胶原/纤维蛋白 止血 新西兰兔
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小鼠胚胎干细胞的培养 被引量：12
6
作者 都同功 陈系古 +4 位作者 刘兰英 俞生 钟女奇 黄冰 林学颜 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 1999年第1期26-30,共5页
ＥＳ细胞的培养应满足促进细胞增殖和抑制细胞分化而保持其高度未分化潜能。我们用胚胎成纤维细胞作为饲养层，培养基ＤＭＥＭ中加白血病抑制因子的方法来培养ＥＳ细胞。培养的ＥＳ细胞呈集落状生长，细胞排列紧密，呈未分化状态。胚胎... ＥＳ细胞的培养应满足促进细胞增殖和抑制细胞分化而保持其高度未分化潜能。我们用胚胎成纤维细胞作为饲养层，培养基ＤＭＥＭ中加白血病抑制因子的方法来培养ＥＳ细胞。培养的ＥＳ细胞呈集落状生长，细胞排列紧密，呈未分化状态。胚胎成纤维细胞作为饲养层是分离培养ＥＳ细胞最普遍使用而且有效的方法。本文还围绕ＥＳ细胞培养中的促进增殖和抑制分化这两个方面的影响因素进行了讨论。 展开更多
关键词 ES细胞 成纤维细胞 干细胞 小鼠胚胎 饲养层 集落 分化潜能 DMEM 细胞分化 增殖
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基因敲除动物的研究和应用 被引量：19
7
作者 卢丽 陈系古 黄冰 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2006年第2期152-156,共5页
目的基因敲除动物是近十几年来发展起来的在个体水平上研究基因功能的一类实验动物,它以基因敲除技术和胚胎干细胞技术为基础,在生命科学研究的各个领域得到了广泛应用。最近两年发展起来的RNA干扰技术仍然不能代替它。本文综述了基因... 目的基因敲除动物是近十几年来发展起来的在个体水平上研究基因功能的一类实验动物,它以基因敲除技术和胚胎干细胞技术为基础,在生命科学研究的各个领域得到了广泛应用。最近两年发展起来的RNA干扰技术仍然不能代替它。本文综述了基因敲除动物在各医学生物领域的研究与应用、浅谈其与RNA干扰技术的比较及其发展前景。 展开更多
关键词 小鼠 基因敲除 干细胞移植 RNA干扰
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中药银杏叶对老年痴呆症小鼠学习记忆能力的影响 被引量：17
8
作者 谢超敏 郑桂兰 +5 位作者 钟志勇 饶子亮 邝少松 王刚 严家荣 陈系古 《中国比较医学杂志》 CAS 2010年第9期26-29,共4页
目的研究中药银杏叶与西药脑复康片对老年痴呆症小鼠学习记忆能力恢复效果的差异。方法 KM小鼠随机分为对照组、模型组、银杏叶组和脑复康组,各组20只。除对照组外,其余组采用腹腔注射D-半乳糖和灌胃AlCl3进行造模,连续60 d。银杏叶组... 目的研究中药银杏叶与西药脑复康片对老年痴呆症小鼠学习记忆能力恢复效果的差异。方法 KM小鼠随机分为对照组、模型组、银杏叶组和脑复康组,各组20只。除对照组外,其余组采用腹腔注射D-半乳糖和灌胃AlCl3进行造模,连续60 d。银杏叶组和脑复康组自造模起给予相应的药物,连续60 d。试验结束后测定小鼠学习记忆能力,测定脑组织中乙酰胆碱酯酶活性、过氧化脂质(MDA)含量、超氧化岐化酶(SOD)活性、Na+、K+-ATPase、游离钙离子含量和进行脑神经元细胞计数。结果与模型组比较,银杏叶组动物潜伏期明显延长,错误次数降低(P<0.05);银杏叶组动物脑组织SOD活性明显升高(P<0.05),MDA含量、Ca+浓度含量、乙酰胆碱酯酶活性显著性降低(P<0.05),与对照及脑复康组比较未见显著差异(P>0.05);银杏叶组动物大脑海马锥体细胞数与模型组比较明显升高(P<0.01),大脑皮质神经元细胞数与模型组比较无明显差异(P>0.05)。结论中药银杏叶改善小鼠学习记忆障碍的作用与西药脑复康片相似。 展开更多
关键词 银杏叶 脑复康 阿尔茨海默症 小鼠 学习记忆
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转基因显微注射的剂量控制与效果分析 被引量：12
9
作者 李智 俞生 +2 位作者 都同功 黄冰 陈系古 《中国实验动物学杂志》 1998年第2期65-69,共5页
为了分析转基因显微注射的注射剂量对胚胎发育效果的影响，用尖端直径为０．５～１．０ｕｍ的显微注射针在不同气压和不同时间的条件下进行微注射测试，并对１３３枚小鼠受精卵分别注射不同剂量，观察注射后胚胎发充情况。实验采用的气... 为了分析转基因显微注射的注射剂量对胚胎发育效果的影响，用尖端直径为０．５～１．０ｕｍ的显微注射针在不同气压和不同时间的条件下进行微注射测试，并对１３３枚小鼠受精卵分别注射不同剂量，观察注射后胚胎发充情况。实验采用的气压电控式显微注射器，具有注射时间短（ｍｓｅｃ），注射的可控性和可重复性好的特点，在相同条件下重复注射时，误差小于０．００４ｐｌ。结果表明，小鼠受精卵原核内注射剂量在２～４ｐｌ时，胚胎体外发育不受影响，当大于１０ｐｌ时，胚胎在注射后１ｈ内全部死亡，也证明了注射针尖端直径小于１．０ｕｍ时，导致细胞损伤和影响胚胎发育的主要因素是注射剂量的大小。因此，对于小鼠胚胎原核内注射剂量２～４ｐｌ是较为合适的“ 展开更多
关键词 注射剂量 小鼠 原核 胚胎 显微注射 注射针 不同剂量 转基因 受精卵 注射时间
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银屑病动物模型 被引量：14
10
作者 袁媛 朱健平 陈系古 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2008年第1期70-73,共4页
银屑病是一种长期困扰人类的疾病,具有病程长、易复发、难治愈的特点,其病因及发病机制至今尚未完全清楚。银屑病动物模型的建立对揭示该病遗传背景、发病机制及开发新药等都有极大的促进作用。因此,国内外学者在该领域进行了大量的研... 银屑病是一种长期困扰人类的疾病,具有病程长、易复发、难治愈的特点,其病因及发病机制至今尚未完全清楚。银屑病动物模型的建立对揭示该病遗传背景、发病机制及开发新药等都有极大的促进作用。因此,国内外学者在该领域进行了大量的研究。本文就银屑病动物模型的研究状况作一综述。 展开更多
关键词 银屑病 动物模型
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不同条件下培养小鼠胚胎干细胞 被引量：14
11
作者 都同功 黄冰 +3 位作者 钟女奇 邓新燕 陈颖青 陈系古 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期190-192,T002,共4页
关键词 胚胎 干细胞 小鼠
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睾丸性不育动物模型的建立 被引量：14
12
作者 刘风华 杨冬梓 +5 位作者 王沂峰 梁晓萍 彭文明 曹长安 陈系古 郭忠敏 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2007年第2期125-129,共5页
目的:探讨制作睾丸性不育动物模型的方法。方法:①X-射线局部照射:取8～10周龄的BALB/c雄鼠70只,分实验组1、2、3、4、5、6和对照组各10只。实验组1、2、3、4、5、6分别用1000、1200、1400、1600、1800、2000cGy6种不同的剂量照射睾丸局... 目的:探讨制作睾丸性不育动物模型的方法。方法:①X-射线局部照射:取8～10周龄的BALB/c雄鼠70只,分实验组1、2、3、4、5、6和对照组各10只。实验组1、2、3、4、5、6分别用1000、1200、1400、1600、1800、2000cGy6种不同的剂量照射睾丸局部10min;对照组不做任何处理。做受孕试验。②环磷酰胺腹腔注射:取4～5周龄的雄鼠40只,分实验组1、2、3和对照组各10只。实验组分别以30、5070mg/kg体重剂量的环磷酰胺腹腔注射,每周2次,连续注射5周;对照组腹腔注射生理盐水。做受孕试验。③达菲林腹腔注射:取8～10周龄的雄鼠20只,分实验组和对照组各10只。实验组腹腔注射0.375mg/ml达菲林0.4m,l对照组腹腔注射生理盐水0.4ml。做受孕试验。④通过脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)、苏木精-伊红(HE)染色及免疫组化等病理学检查鉴定。未使雌鼠受孕的雄性小鼠定为睾丸性不育,共30只。结果:①X-射线局部照射:实验组1、2的雄鼠分别于X-射线照射后10、15d使雌鼠受孕;实验组3、4的雄鼠,经观察3个月也未能使雌鼠受孕;实验组5、6的雄鼠,于X-射线照射后第5d和第2d死亡;对照组雄鼠皆于3d内使雌鼠受孕。②环磷酰胺腹腔注射:实验组1雄鼠体重增加7g左右,停药后9～14d恢复生育能力,使雌鼠受孕;实验组2雄鼠体重增加4g左右,停药后观察3个月未使雌鼠受孕;实验组3雄鼠体重不增,呈消瘦状,分别于用药第3、4、5周相继死亡;对照组雄鼠皆于3d内使雌鼠受孕。③达菲林腹腔注射:实验组雄鼠于停药后3周左右使雌鼠受孕;对照组雄鼠皆于3d内使雌鼠受孕。④TUNEL结果:对照组睾丸组织偶见凋亡细胞,占(0.71±0.12)%;睾丸性不育组睾丸组织凋亡细胞数量明显增加,占(10.36±1.48)%,两者比较差异有显著性(P<0.05)。HE染色:对照组睾丸组织正常,生精小管呈饱满椭圆形,各级生精细胞排列有序,内含大量精子� 展开更多
关键词 睾丸 不育 动物模型
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体外诱导小鼠胚胎干细胞分化为神经干细胞的实验研究 被引量：13
13
作者 陶靖 葛坚 +5 位作者 黄冰 王智崇 郭彦 余克明 陈慧怡 陈系古 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期289-292,T001,共5页
目的 :探讨体外诱导小鼠胚胎干细胞 (ESCs)分化为神经干细胞 (NSCs)的可能性。方法 :ESCs经胚胎体阶段 ,以视黄酸及视网膜m櫣ｌｌｅｒ细胞诱导 ,在NSCs选择性培养基中筛选培养扩增 7d ,观察形态变化 ,采用RT-PCR法检测nestin、glutamin... 目的 :探讨体外诱导小鼠胚胎干细胞 (ESCs)分化为神经干细胞 (NSCs)的可能性。方法 :ESCs经胚胎体阶段 ,以视黄酸及视网膜m櫣ｌｌｅｒ细胞诱导 ,在NSCs选择性培养基中筛选培养扩增 7d ,观察形态变化 ,采用RT-PCR法检测nestin、glutaminase、Brn - 3基因表达及免疫细胞化学法检测nestin等NSCs特异性标志物 ,并对其扩增及分化能力进行观察。结果 :ESCs经初级诱导 ,NSCs选择性培养基筛选培养 7d后 ,形成大量神经球样结构 ,可扩增传代。绝大部分神经球样结构呈nestin抗原阳性 ,整合BrdU ,表达nestin、glutaminase、Brn - 3基因 ,且可分化为神经元及神经胶质样细胞。结论 :视黄酸及m櫣ｌｌｅｒ细胞诱导的ＥＳＣｓ,经选择性培养基筛选培养可获得NSCs 。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 神经再生 小鼠 神经干细胞 青光眼
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成体干细胞的分化潜能及在修复重建中的应用前景 被引量：8
14
作者 潘兴华 韩毅冰 +1 位作者 郭坤元 陈系古 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 2002年第5期329-332,共4页
目的　探讨成体干细胞 (AS细胞 )的分化潜能性及在临床修复重建中应用的可能。方法　检索医学和生物医学文献数据库中关于 AS细胞研究的相关报道 ,并对 AS细胞的最新研究进展作简要总结。结果　 AS细胞存在于成体的各种组织中 ,具有自... 目的　探讨成体干细胞 (AS细胞 )的分化潜能性及在临床修复重建中应用的可能。方法　检索医学和生物医学文献数据库中关于 AS细胞研究的相关报道 ,并对 AS细胞的最新研究进展作简要总结。结果　 AS细胞存在于成体的各种组织中 ,具有自我更新能力和分化潜能性 ;部分成体干细胞 ,如骨髓、皮肤、肝及脂肪等组织中的 AS细胞 ,具有多向分化潜能 ,可向无关组织类型的成熟细胞横向分化 ;AS细胞是组织更新与修复的起源细胞 ,且与肿瘤的发生和衰老密切相关。结论　 AS细胞具有多向分化潜能 。 展开更多
关键词 成体干细胞 分化潜能 修复重建 再生医学
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骨髓间充质干细胞的分离培养及在精原细胞培养条件下生物学特征的观察 被引量：10
15
作者 刘风华 杨冬梓 +5 位作者 王沂峰 梁晓萍 彭文明 曹长安 陈系古 郭忠敏 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2005年第5期350-355,共6页
目的体外分离、培养、纯化小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),并观察MSCs在精原细胞培养条件下的生物学特征,为体内诱导MSCs分化为精原细胞奠定基础。方法①分离5～6周龄的BALB/c小鼠胫骨、股骨,冲出骨髓,以Percoll密度梯度离心法和贴壁法相... 目的体外分离、培养、纯化小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),并观察MSCs在精原细胞培养条件下的生物学特征,为体内诱导MSCs分化为精原细胞奠定基础。方法①分离5～6周龄的BALB/c小鼠胫骨、股骨,冲出骨髓,以Percoll密度梯度离心法和贴壁法相结合的方法分离、培养、纯化MSCs;②通过动态观察、苏木精伊红(HE)染色、透射电镜观察、免疫组化检测细胞表面标记等鉴定MSCs;③用ELISA法检测MSCs培养上清中白细胞介素6(IL6)、IL8、粒细胞集落刺激因子(G CSF)、干细胞因子(SCF)等细胞因子的相对含量,与相应对照组比较;④取第3代MSCs,分组进行诱导培养观察,对照组用基本培养液培养MSCs,实验组用条件培养液诱导培养MSCs。通过显微镜下动态观察、HE染色、免疫组化等方法观察诱导结果。结果①获得纯化的MSCs;②动态观察培养细胞具有不断增殖的干细胞特性,HE染色细胞呈梭形,透射电镜观察细胞较幼稚,免疫组化检测细胞表面标记CD44、CD90呈阳性,从而鉴定了MSCs;③MSCs培养上清中IL6、IL8、G CSF、SCF等的含量显著高于对照组(P<0.05);④实验组细胞形态发生变化,CD29、CD117和Oct4免疫组化染色阳性;对照组细胞形态不变,CD29、CD117和Oct4免疫组化染色阴性。结论①用Percoll密度梯度离心法和贴壁法相结合的方法可获得纯化的MSCs; 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 细胞培养 精原细胞 生物学特征
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绿色荧光蛋白嵌合体小鼠的建立和鉴定 被引量：8
16
作者 招霞 马芸 +6 位作者 陈系古 葛坚 黄冰 邓新燕 喻瓴 赖英荣 黄春浓 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第5期784-790,共7页
为研究嵌合体动物中供体胚胎干细胞 (ES)在宿主胚胎发育中的走向和定位 ,同时探讨绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因在转基因动物制作中的应用价值 ,本研究将pEGFP N1基因导入小鼠ES D3 细胞系 ,得到稳定表达GFP的胚胎干细胞亚系ES D3 ... 为研究嵌合体动物中供体胚胎干细胞 (ES)在宿主胚胎发育中的走向和定位 ,同时探讨绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因在转基因动物制作中的应用价值 ,本研究将pEGFP N1基因导入小鼠ES D3 细胞系 ,得到稳定表达GFP的胚胎干细胞亚系ES D3 GFP ,通过对昆明小鼠的囊胚腔注射 ,获得了 4只表达绿色荧光蛋白的嵌合体小鼠。其中 1只存活至成年 ,3只出生时死亡。荧光显像及组织PCR检测显示了绿色荧光蛋白在小鼠体内的嵌合情况。以绿色荧光为指标可实现活体水平的动态观察 ,本实验首次观察到以GFP为指标所示的机体嵌合情况与根据毛色嵌合推测的机体嵌合情况存在很大差异 ,以GFP为嵌合指标更加全面而准确 ;但不排除GFP对小鼠发育存在一定毒性的可能 ;另外 ,有结果显示供体ES细胞在宿主体内除了大片补丁状嵌合外 ,还存在细胞散在嵌合的情况 ,后者提示了在组织中利用GFP对ES细胞实施单细胞追踪和实时观察的可行性 。 展开更多
关键词 小鼠 嵌合体 体内 观察 供体 ES细胞 宿主 绿色荧光蛋白(GFP) 绿色荧光蛋白 体胚
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骨髓间充质干细胞向“类精子”分化的动物实验鉴定 被引量：8
17
作者 刘风华 杨冬梓 +5 位作者 王沂峰 梁晓萍 彭文明 曹长安 陈系古 郭忠敏 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2007年第4期309-311,共3页
目的：鉴定骨髓间充质干细胞（MSCs）异体移植后是否分化为“类精子”。方法：①制作睾丸去势的动物模型：取4周龄雄性白色BALB／c小鼠40只，用环磷酰胺腹腔注射法制作睾丸绝育的动物模型，随机分成实验组和对照组各20只；②制备种子细... 目的：鉴定骨髓间充质干细胞（MSCs）异体移植后是否分化为“类精子”。方法：①制作睾丸去势的动物模型：取4周龄雄性白色BALB／c小鼠40只，用环磷酰胺腹腔注射法制作睾丸绝育的动物模型，随机分成实验组和对照组各20只；②制备种子细胞（MSCs）：取5-6周龄雄性灰色129小鼠10只，以Percoll密度梯度离心法和贴壁法相结合的方法分离、培养、纯化MSCs。待细胞生长至数量足够多时，用生理盐水制备成浓度为1×10^6／ml的细胞悬液；③异种系小鼠MSCs睾丸异体移植：实验组用盲打法给每只小鼠睾丸注射上述制备的129小鼠的MSCs悬液。对照组睾丸注射生理盐水；④移植后的观察：另取8～10周龄雌性白色BALB／c小鼠40只，分别与实验组和对照组的40只雄性小鼠按雌雄1：1合笼，观察雌鼠受孕情况。结果t实验组：有8只雌鼠分别于合笼后31—46（平均38．5）d怀孕，受孕率为40％，产下的小鼠皆为白色。对照组：1只雌鼠怀孕，受孕率为5％，产下的小鼠为白色。子代鼠皆为白色，提示129小鼠的MSCs未能分化为有功能的“类精子”，使BALB／c小鼠的子代携带129小鼠的基因而呈现预想中的黑白相间的“花色”。两组受孕率差异有显著性（P〈0．05），提示MSCs对睾丸损伤有促进愈合作用。结论：异品系的MSCs睾丸移植后未能分化为有功能的“类精子”，但对睾丸损伤有促进愈合作用。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 细胞培养 细胞分化 “类精子” 小鼠
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人工真皮替代物的构建及其生物相容性评价 被引量：11
18
作者 谢举临 利天增 +3 位作者 祁少海 黄冰 陈系古 卞徽宁 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期37-38,共2页
目的　构建人工真皮替代物并评价其生物相容性。方法　取自健康小白猪的异种皮肤先用 0 .5 %安多福浸泡消毒后 ,在无菌操作下 ,取厚度为 0 .3～ 0 .4mm ,经胰蛋白酶消化、冷冻干燥及戊二醛等处理后检测其理化性能和生物学相容性。结果... 目的　构建人工真皮替代物并评价其生物相容性。方法　取自健康小白猪的异种皮肤先用 0 .5 %安多福浸泡消毒后 ,在无菌操作下 ,取厚度为 0 .3～ 0 .4mm ,经胰蛋白酶消化、冷冻干燥及戊二醛等处理后检测其理化性能和生物学相容性。结果　去细胞真皮底物具有良好的弹性、强度和组织学结构 ;人包皮成纤维细胞均能在 5～ 10min内很好地粘附 ,且生长良好 ,说明人工真皮对细胞生长无毒性 ;人工真皮在大鼠体内的免疫排斥反应轻微 ,组织相容性好。结论　本实验所构建的人工真皮具有良好的理化性能 ,生物相容性好 ,免疫排斥反应小 ,且成本低、来源广 ,是构建组织工程皮肤理想的真皮材料。 展开更多
关键词 人工真皮替代物 构建 生物相容性 评价 组织工程
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猴脑血管缺血模型复制及骨髓间充质干细胞移植治疗 被引量：9
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作者 潘兴华 贺斌 +6 位作者 庞荣清 刘力 和占龙 唐隆旺 李进领 张步振 陈系古 《热带医学杂志》 CAS 2006年第5期533-536,532,F0004,共6页
目的建立猕猴局灶性血管缺血性脑损伤模型,评价自体骨髓间充质干细胞移植治疗脑损伤的疗效及临床治疗可行性。方法用导管介入法从股动脉将栓子输送至大脑中动脉使大脑中动脉分支动脉栓塞,诱发局灶性缺血性脑损伤,经CT扫描确认脑损伤及... 目的建立猕猴局灶性血管缺血性脑损伤模型,评价自体骨髓间充质干细胞移植治疗脑损伤的疗效及临床治疗可行性。方法用导管介入法从股动脉将栓子输送至大脑中动脉使大脑中动脉分支动脉栓塞,诱发局灶性缺血性脑损伤,经CT扫描确认脑损伤及部位和行为学观察符合脑损伤要求。分离扩增自体骨髓间充质干细胞至第4代,于脑血管栓塞后30d,在CT引导下将4×108细胞/kg骨髓间充质干细胞移植到脑损伤部位,每月1次连续观察脑损伤面积及行为学变化。结果脑血管栓塞前造影明显可见左侧大脑中动脉血管树及其分支分布情况,栓塞后血管造影证实额颞区无血管显示,随后连续CT扫描见额颞叶区明显梗死灶,行为学观察可见血管栓塞对侧前后肢运动功能严重障碍。间充质干细胞移植后3个月可见脑损伤面积明显缩小,脑神经功能明显改善,半年后脑损伤面积进一步缩小,脑神经功能基本恢复正常。结论自体骨髓间充质干细胞移植有助于缺血性脑损伤结构修复和功能恢复。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 缺血性脑损伤 移植
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嵌合体动物技术研究进展 被引量：5
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作者 马芸 陈系古 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2002年第4期250-254,共5页
关键词 嵌合体动物 研究进展 全能性细胞导入 ES细胞
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