目的根据构建的人致病性纳尔逊海湾病毒(NBVs)M3基因片段质粒,纯化融合蛋白制备NBVs M3多克隆抗体。方法利用构建的纳尔逊海湾病毒(NBVs)M3基因质粒Pris His MB-M3,转化至大肠埃希菌(E.coil)BL21(DE3)感受态细胞中,异丙基-β-D-硫代半...目的根据构建的人致病性纳尔逊海湾病毒(NBVs)M3基因片段质粒,纯化融合蛋白制备NBVs M3多克隆抗体。方法利用构建的纳尔逊海湾病毒(NBVs)M3基因质粒Pris His MB-M3,转化至大肠埃希菌(E.coil)BL21(DE3)感受态细胞中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,产物经过镍柱亲和层析法获得Pris His MB-M3融合蛋白;将纯化的融合蛋白作为抗原免疫家兔,获得NBVs M3多克隆抗体;蛋白免疫印迹检测(Western blot)蛋白准确性以及多克隆抗体抗性。结果 SDS-PAGE电泳考马斯亮蓝染色检测显示:25℃、IPTG浓度为0.3 mmol/L,诱导12 h,Pris His MB-M3融合蛋白表达量最高;在咪唑浓度为MCAC-20、MCAC-40条件时洗脱下目的蛋白。用纯化的融合蛋白免疫家兔制备抗体,Western blot验证成功制备出NBVs M3多克隆抗体。结论成功获得了灵敏性及特异性较高的纳尔逊海湾病毒(NBVs)M3多克隆抗体,为进一步研究该病毒的致病性提供了很高的应用价值。展开更多
目的制备纳尔逊海湾病毒(NBV)S3多克隆抗体。方法首先将构建好的Pris His MB-S3重组基因质粒,转化到大肠杆菌(E.coil)BL21(DE3)感受态细胞中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达。镍柱亲和层析法纯化目的蛋白以获得大量融合重...目的制备纳尔逊海湾病毒(NBV)S3多克隆抗体。方法首先将构建好的Pris His MB-S3重组基因质粒,转化到大肠杆菌(E.coil)BL21(DE3)感受态细胞中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达。镍柱亲和层析法纯化目的蛋白以获得大量融合重组蛋白,以此为抗原免疫大鼠制备抗S3多克隆抗体并进行鉴定。结果 Pris His MB-S3蛋白的相对分子质量(Mr)约39 000,以包涵体形式存在,通过免疫大鼠成功制备出NBV S3多克隆抗体。间接ELISA测定抗体效价达1∶64000。间接免疫荧光实验证明S3蛋白成功在细胞内表达并以颗粒状分布在细胞质内。结论成功获得高反应性和高特异性的S3蛋白多克隆抗体。展开更多
文摘目的根据构建的人致病性纳尔逊海湾病毒(NBVs)M3基因片段质粒,纯化融合蛋白制备NBVs M3多克隆抗体。方法利用构建的纳尔逊海湾病毒(NBVs)M3基因质粒Pris His MB-M3,转化至大肠埃希菌(E.coil)BL21(DE3)感受态细胞中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,产物经过镍柱亲和层析法获得Pris His MB-M3融合蛋白;将纯化的融合蛋白作为抗原免疫家兔,获得NBVs M3多克隆抗体;蛋白免疫印迹检测(Western blot)蛋白准确性以及多克隆抗体抗性。结果 SDS-PAGE电泳考马斯亮蓝染色检测显示:25℃、IPTG浓度为0.3 mmol/L,诱导12 h,Pris His MB-M3融合蛋白表达量最高;在咪唑浓度为MCAC-20、MCAC-40条件时洗脱下目的蛋白。用纯化的融合蛋白免疫家兔制备抗体,Western blot验证成功制备出NBVs M3多克隆抗体。结论成功获得了灵敏性及特异性较高的纳尔逊海湾病毒(NBVs)M3多克隆抗体,为进一步研究该病毒的致病性提供了很高的应用价值。
文摘目的制备纳尔逊海湾病毒(NBV)S3多克隆抗体。方法首先将构建好的Pris His MB-S3重组基因质粒,转化到大肠杆菌(E.coil)BL21(DE3)感受态细胞中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达。镍柱亲和层析法纯化目的蛋白以获得大量融合重组蛋白,以此为抗原免疫大鼠制备抗S3多克隆抗体并进行鉴定。结果 Pris His MB-S3蛋白的相对分子质量(Mr)约39 000,以包涵体形式存在,通过免疫大鼠成功制备出NBV S3多克隆抗体。间接ELISA测定抗体效价达1∶64000。间接免疫荧光实验证明S3蛋白成功在细胞内表达并以颗粒状分布在细胞质内。结论成功获得高反应性和高特异性的S3蛋白多克隆抗体。
