目的研究沉默CT45A1(cancer/testis antigen family 45 member A1)基因的表达对人前列腺癌细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力的影响,并初步探讨分子作用机制。方法实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹(Western blot,WB)检测CT45A1在具有不同侵...目的研究沉默CT45A1(cancer/testis antigen family 45 member A1)基因的表达对人前列腺癌细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力的影响,并初步探讨分子作用机制。方法实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹(Western blot,WB)检测CT45A1在具有不同侵袭力的人前列腺癌细胞中的表达水平,利用慢病毒感染方式构建CT45A1基因沉默的前列腺癌细胞,MTT法、划痕愈合实验和Transwell小室法评估沉默CT45A1基因对细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响。实时荧光定量PCR和WB检测上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的重要标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)以及关键调控因子Twist和Zeb-1的表达情况。结果荧光定量PCR和WB实验结果表明,人前列腺癌PC-3细胞中CT45A1 mRNA的相对表达量(4.37±0.34)和CT45A1的蛋白相对表达水平(2.49±0.12),均明显高于LNCap细胞;shCT45A1#1、shCT45A1#2细胞中的CT45A1 mRNA和蛋白表达水平均低于shScram细胞,差异均有统计学意义(P<0.05)。CT45A1基因沉默后,PC-3细胞的增殖水平未发生明显变化(P>0.05),但迁移与侵袭能力及Vimentin、Zeb-1的表达均下降,E-cadherin的表达上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论CT45A1可以通过促进Zeb-1介导的EMT来增强PC-3细胞的迁移和侵袭能力。展开更多
文摘目的研究沉默CT45A1(cancer/testis antigen family 45 member A1)基因的表达对人前列腺癌细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力的影响,并初步探讨分子作用机制。方法实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹(Western blot,WB)检测CT45A1在具有不同侵袭力的人前列腺癌细胞中的表达水平,利用慢病毒感染方式构建CT45A1基因沉默的前列腺癌细胞,MTT法、划痕愈合实验和Transwell小室法评估沉默CT45A1基因对细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响。实时荧光定量PCR和WB检测上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的重要标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)以及关键调控因子Twist和Zeb-1的表达情况。结果荧光定量PCR和WB实验结果表明,人前列腺癌PC-3细胞中CT45A1 mRNA的相对表达量(4.37±0.34)和CT45A1的蛋白相对表达水平(2.49±0.12),均明显高于LNCap细胞;shCT45A1#1、shCT45A1#2细胞中的CT45A1 mRNA和蛋白表达水平均低于shScram细胞,差异均有统计学意义(P<0.05)。CT45A1基因沉默后,PC-3细胞的增殖水平未发生明显变化(P>0.05),但迁移与侵袭能力及Vimentin、Zeb-1的表达均下降,E-cadherin的表达上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论CT45A1可以通过促进Zeb-1介导的EMT来增强PC-3细胞的迁移和侵袭能力。
