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广西巴马香猪耳皮成纤维细胞的分离与培养 被引量：9
1
作者 杨素芳 汪彩珠 +3 位作者 陈凌声 覃兆鲜 黄雅琼 石德顺 《湖北农业科学》 北大核心 2009年第3期547-552,共6页
试验主要对广西巴马香猪耳皮成纤维细胞的分离和培养进行了研究。利用组织块法能够成功分离培养广西巴马香猪耳皮成纤维细胞,其大小范围在1～3mm3,去除表皮有利于组织块贴壁和细胞的游出;而采用0.25%胰蛋白酶消化液4℃冷处理过夜,不仅... 试验主要对广西巴马香猪耳皮成纤维细胞的分离和培养进行了研究。利用组织块法能够成功分离培养广西巴马香猪耳皮成纤维细胞,其大小范围在1～3mm3,去除表皮有利于组织块贴壁和细胞的游出;而采用0.25%胰蛋白酶消化液4℃冷处理过夜,不仅有利于去表皮操作,减少取材处理时间,而且操作时间自由度大。在酶消化法中采用胰蛋白酶消化30min,胶原酶继续消化30～40min,能够成功分离培养广西巴马香猪耳皮成纤维细胞。广西巴马香猪皮肤成纤维细胞要经历滞留期、对数期、平台期,分别为0～2d、2～8d、8～12d。 展开更多
关键词 广西巴马香猪 成纤维细胞 体外培养 分离
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猪成纤维细胞细胞周期同期化对核移植胚胎发育的影响 被引量：2
2
作者 吴正三 杨素芳 +3 位作者 陈凌声 陈施蓓 汪彩珠 石德顺 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期1-7,共7页
供体细胞所处的细胞周期及细胞周期同期化的方法对于体细胞核移植（somatic cell nuclear transfer，SCNT）的成功非常重要，本研究对血清饥饿培养处理与培养至完全汇合后的猪成纤维细胞周期同期化水平进行了检测。利用不同方法对猪成... 供体细胞所处的细胞周期及细胞周期同期化的方法对于体细胞核移植（somatic cell nuclear transfer，SCNT）的成功非常重要，本研究对血清饥饿培养处理与培养至完全汇合后的猪成纤维细胞周期同期化水平进行了检测。利用不同方法对猪成纤维细胞同期化处理后，通过流式细胞仪对细胞的细胞周期分布比率进行了检测。将细胞进行血清饥饿24～72h，显著地增加了Go／G。期的细胞百分率（92．2％-93．7％VS．77．8％，P〈0．05）。将细胞培养至完全汇合后再培养24-48h，GgG。期的细胞比例类似于血清饥饿法（94．4%，89．6%）。血清饥饿24h后，置换为10％FBS能逆转至生长期。用这两种不同方法处理后的体细胞作为核移植的供体构建重构胚，分裂率与囊胚率差异不显著（P〉0．05）。结果表明，猪成纤维细胞通过血清饥饿法或者培养至汇合完全均能有效地将细胞周期同期化至G0/G1期，且均可作为体细胞核移植的供体细胞。 展开更多
关键词 猪 成纤维细胞 细胞周期同期化 体细胞核移植(SCNT) 胚胎发育
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水牛胎儿成纤维细胞转染外源基因的初步研究 被引量：1
3
作者 崔奎青 刘庆友 +4 位作者 陈凌声 王晓丽 舒金辉 公方强 石德顺 《广西农业生物科学》 CAS CSCD 2008年第3期192-196,共5页
研究了水牛胎儿成纤维细胞(buffalo fetal fibroblasts,BFF)转染外源基因后的细胞生物学特性。纯化含有绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)和新霉素抗性基因的线性化载体,用脂质体法转染体外培养3代的BFF细胞,应用抗生素G418... 研究了水牛胎儿成纤维细胞(buffalo fetal fibroblasts,BFF)转染外源基因后的细胞生物学特性。纯化含有绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)和新霉素抗性基因的线性化载体,用脂质体法转染体外培养3代的BFF细胞,应用抗生素G418筛选2周后挑取转基因抗性细胞集落扩大培养。结果发现:经过G418筛选后细胞增殖活力下降,胰蛋白酶消化法共分离获得162个转基因水牛阳性细胞集落,转移到24孔板扩大培养后,132个(85.2%)细胞集落可以存活,转移到4孔板中后仅有52个(32.1%)细胞集落能继续生长,最终能在35 mm培养皿中大量培养的只有15个(<9.3%)。抗性细胞由梭形、成簇生长变为多角形、不规则形弥漫生长,立体感减弱,细胞生长速度减慢,活力下降。染色体核型异常率增加,10个抗性细胞集落核型正常率平均为61%,显著低于对照组86.7%(P<0.01)。研究结果为建立和优化BFF细胞转染外源基因平台奠定了工作基础。 展开更多
关键词 水牛胎儿成纤维细胞 转染 外源基因 核型
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哺乳动物卵母细胞及早期胚胎蛋白质组学研究进展 被引量：1
4
作者 陈凌声 徐平 +1 位作者 石德顺 李湘萍 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1018-1025,共8页
雌性生殖细胞发育是动物繁殖的基石,哺乳动物卵母细胞和早期胚胎在其生长发育过程中有许多独特的现象和规律,涉及一系列蛋白质合成/降解和磷酸化等状态的动态改变。对卵母细胞分裂、成熟调控机理以及植入前胚胎发育规律的研究是发育生... 雌性生殖细胞发育是动物繁殖的基石,哺乳动物卵母细胞和早期胚胎在其生长发育过程中有许多独特的现象和规律,涉及一系列蛋白质合成/降解和磷酸化等状态的动态改变。对卵母细胞分裂、成熟调控机理以及植入前胚胎发育规律的研究是发育生物学领域的一项重要课题。蛋白质组学是以细胞或组织内全部的蛋白质为研究对象,系统鉴定、定量蛋白质并研究这些蛋白质功能的科学。随着蛋白质分离、鉴定技术的快速发展,蛋白质组学为卵母细胞发生、分化、成熟以及质量控制等相关研究提供了新的方法和内容,如在蛋白质定量、修饰、定位和相互作用等方面提供其他组学技术不可获得的重要信息。这些信息将有助于揭示哺乳动物卵母细胞成熟和早期胚胎发育的分子机制,对于进一步完善卵母细胞的体外成熟培养体系,提高胚胎体外生产、体细胞克隆和转基因动物生产效率具有重要意义。 展开更多
关键词 蛋白质组学 哺乳动物卵母细胞 植入前胚胎发育 生发泡期 减数分裂
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两种胰蛋白酶酶解羊肌肉总蛋白样品的质谱分析
5
作者 邹家云 姜棋予 +7 位作者 邬顺全 胡燕 陈凌声 杨锐创 柴燕涛 李晓娟 李瑞生 侯俊 《实验动物科学》 2016年第4期41-47,共7页
目的比较国产和进口两种胰蛋白酶对蛋白质的酶解效果,为后续蛋白质组学稳定研究提供依据。方法用超声破碎法提取羊肌肉组织总蛋白,经两种胰蛋白酶酶解后液相色谱串联质谱检测酶解肽段,将结果上传蛋白质序列数据库,利用质谱分析鉴定方法... 目的比较国产和进口两种胰蛋白酶对蛋白质的酶解效果,为后续蛋白质组学稳定研究提供依据。方法用超声破碎法提取羊肌肉组织总蛋白,经两种胰蛋白酶酶解后液相色谱串联质谱检测酶解肽段,将结果上传蛋白质序列数据库,利用质谱分析鉴定方法分析比较两种胰蛋白酶的酶解效果,并借助生物信息学工具对所得数据进行分析。结果两种胰蛋白酶酶解同种蛋白质样品产生的肽段长度86%以上均为6—18个氨基酸,适用于质谱检测。酶解后肽段产生的质量国产胰蛋白酶优于进口胰蛋白酶,国产胰蛋白酶比进口胰酶酶解可多鉴定到19%的蛋白质和34%的肽段。结论进口、国产的胰蛋白酶在酶解蛋白质方面均可用于质谱检测前蛋白质的酶解消化。但国产胰蛋白酶价格明显低于进口胰酶,更具应用优势。本研究为评价胰蛋白酶酶解效果提供了一种有效、全面的研究方法。 展开更多
关键词 蛋白质组 胰蛋白酶 酶解 羊肌肉蛋白
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成熟前后水牛卵母细胞蛋白质组的初步研究 被引量：2
6
作者 陈凌声 代小丽 +6 位作者 徐永茹 罗婵 陆凤花 蒋建荣 石德顺 徐平 李湘萍 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期2003-2011,共9页
应用聚丙烯酰胺凝胶电泳联合反相液相色谱-串联质谱(RP-LC-MS/MS)蛋白质组学技术,研究GV期和MII期水牛卵母细胞蛋白质组,以期为揭示水牛卵母细胞体外成熟分子机理、筛选与卵母细胞成熟质量相关蛋白质奠定理论基础。从GV期和MII期水牛卵... 应用聚丙烯酰胺凝胶电泳联合反相液相色谱-串联质谱(RP-LC-MS/MS)蛋白质组学技术,研究GV期和MII期水牛卵母细胞蛋白质组,以期为揭示水牛卵母细胞体外成熟分子机理、筛选与卵母细胞成熟质量相关蛋白质奠定理论基础。从GV期和MII期水牛卵母细胞中分别鉴定到647和570种蛋白质(FDR<1%)。其中,鉴定相同蛋白质414种;GV期和MII期卵母细胞特有鉴定蛋白质分别为233种和156种。通过谱图计数法获得鉴定蛋白质的半定量信息,从GV期和MII期水牛卵母细胞中筛选到9种高丰度蛋白质。其中8种为相同蛋白质,包括穹窿体蛋白、谷胱苷肽S-转移酶M3、蛋白精氨酸脱亚氨酶6、过氧化物氧化还原酶2、二磷核苷酸激酶B、动力蛋白轻链1、醛糖还原酶、类甘油醛-3-三磷酸脱氢酶同源物2等。热激蛋白90α和谷胱甘肽S-转移酶P分别为GV期和MII期水牛卵母细胞特有的高丰度蛋白质,这些蛋白质可能与水牛卵母细胞成熟过程密切相关。GO(Gene Ontology)和KEGG分析显示,鉴定相同蛋白质主要集中在丙酮酸盐代谢、三羧酸循环(TCA)、糖酵解/糖原生成、磷酸戊糖途径等能量代谢通路,提示水牛卵母细胞成熟过程中可能需要维持高的能量代谢水平,以保证卵母细胞减数分裂的完成。GV期细胞特有鉴定蛋白质主要集中在氧化磷酸化、核糖体以及蛋白酶体等KEGG通路,表明GV期卵母细胞可能具有高的氧化磷酸化和蛋白合成水平,蛋白酶体在推动水牛卵母细胞成熟进程中可能发挥重要作用。MII期细胞特有鉴定蛋白质主要集中在DNA复制和氨基糖、核苷糖代谢等KEGG通路,提示水牛卵母细胞可能在为后续的受精过程和早期卵裂进行遗传物质的准备。综上表明,成熟前后水牛卵母细胞蛋白质表达模式,为进一步深入了解水牛卵母细胞成熟分子机理奠定理论基础。 展开更多
关键词 水牛 体外成熟 卵母细胞 蛋白质组
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相对和绝对定量同位素标记技术在肝细胞癌蛋白质组学中的应用研究进展
7
作者 齐英姿 陈凌声 徐平 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期952-955,共4页
肝细胞癌以其异质性强、早期诊断难、预后不良和致死率高等特点，成为危害我国国民健康的重要疾病。准确的早期诊断对于提高肝癌切除手术的成功率和降低术后复发与转移至关重要，其关键是早期诊断生物标志物的筛选和验证。以同位素标记... 肝细胞癌以其异质性强、早期诊断难、预后不良和致死率高等特点，成为危害我国国民健康的重要疾病。准确的早期诊断对于提高肝癌切除手术的成功率和降低术后复发与转移至关重要，其关键是早期诊断生物标志物的筛选和验证。以同位素标记相对和绝对定量技术、基于预定同位素标记氨基酸的细胞培养技术等为代表的定量蛋白质组学技术是蛋白质组学技术重要的组成部分，其中前者因其通量高、定量精度高、不受样品来源限制等优势成为定量蛋白质组学技术中的支柱型技术。现就该技术在肝细胞癌发生、发展过程的分子机制及其标志物的筛选研究进展进行综述，为深入理解肝细胞癌发生发展的分子机制和这些新发现的生物标志物的开发创造条件。 展开更多
关键词 肝肿瘤 蛋白质组学 同位素标记 肿瘤标志物 同位素标记相对和绝对 定量技术
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